海洋弧菌NTi产琼胶酶的发酵条件优化

以琼胶酶活力为主要指标,采用单因素与响应面相结合的方法,对降解琼胶的海洋弧菌NTi(Vibrio natriegens NTi)发酵产琼胶酶的摇瓶发酵培养基和发酵条件进行优化。结果表明,α-乳糖对菌株产酶具有较强的抑制作用,NH+4不利于菌株生长和产酶。培养基分别以3. 3 g/L琼脂、6. 33 g/L酵母膏为唯一碳源及氮源,添加20 g/L的Na Cl,发酵海洋弧菌V. natriegens NTi产琼胶酶的效果最佳。发酵过程中的p H值、接种量、装液量、温度、发酵时间最优值分别为6. 5、2%、32 m L、27℃和24 h。优化后,该菌产琼胶酶活力达到2. 81 U/m L,比优化前增加了230%。     

微生物能力验证样品制备工艺及水产品企业水平测试结果评价

为了提高舟山市水产品企业实验室微生物检测能力,保证企业自检结果准确可靠,根据舟山市进出口检验检疫工作的特点,选取了水产品中3个常规的微生物检测项目,即菌落总数、副溶血弧菌和金黄色葡萄球菌检测,采用了真空冷冻干燥技术制备一系列微生物能力验证样品,对舟山市88家水产品企业的实验室进行微生物能力验证。结果表明采用本工艺制备的能力验证样品具有稳定性好、贮存方便、保存期长等优点。从水产品企业微生物水平测试结果来看,菌落总数项目的满意率为81.8%;副溶血弧菌检测的正确率为93.8%,而金黄色葡萄球菌检测的正确率为82.1%。检测结果存在偏差的主要原因是检测中未使用标准菌株进行参照、试剂在使用前无进行质量核查、对某些生化反应判断失误等。     

度夏仿刺参病原菌伯麦罗氏弧菌的分离鉴定和特征研究

以患有腐皮综合征的度夏仿刺参(Apostichopus japonicus)为对象,从其体壁病灶处分离纯化获得一株病原细菌.通过传统细菌鉴定方法对病原菌的形态学、生理生化特征和培养特征进行研究;以16SrRNA基因测序为基础,结合基质辅助激光解析电离飞行时间质谱技术(MALDI-TOF MS)进行鉴定,结果表明该菌株在分类上属于伯麦罗氏弧菌(Vibrio pomeroyi);人工感染实验验证了不论是注射感染还是浸浴感染,该菌株均能导致仿刺参发病甚至死亡.此外,将本次实验获得的伯麦罗氏弧菌菌株SUS(V.pomeroyi SUS)与伯麦罗氏弧菌的其他菌株,如V.pomeroyi LMG20537T(典型菌株)、V.pomeroyi 929进行比较,探讨了来自不同海域的菌株生理生化特征与环境因子之间的关系.研究结果显示:伯麦罗氏弧菌为南移度夏仿刺参腐皮综合征的病原菌,而且表明MALDI-TOF MS技术结合微生物数据库MALDI Biotyper系统的鉴定方法准确、便捷、重复性高,非常适合于传统鉴定方法易混淆的种类鉴别,这为南移仿刺参的疾病检查和预防奠定了基础.     

黄连水提物对卵形鲳鲹源溶藻弧菌的抑菌作用

卵形鲳鲹(Trachinotus ovatus)是一种生长快速且肉质鲜美的经济型海水养殖鱼类,但是近些年为满足人们的日常需求,在不断扩大养殖的同时病菌也逐渐泛滥。溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)是华南沿海地区海水养殖鱼类细菌性鱼病的主要致病菌之一,给水产养殖业带来巨大损失。本研究对黄连(Coptis chinensis Franch)的抗菌作用进行系统研究,目的是为由溶藻弧菌引起的爆发性细菌性鱼病的高效防治提供科学的用药依据。本研究采用二倍稀释法测定黄连水提物对卵形鲳鲹源溶藻弧菌的最低抑菌浓度(MIC)、最低杀菌浓度(MBC)和半数致死量(LD50),并使用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定细菌超声破碎上清液中可溶性蛋白含量。结果表明,黄连水提物对溶藻弧菌具有明显的抑制作用,其对溶藻弧菌的MIC、MBC和LD50的值分别为7.800mg/mL、31.250mg/mL和15.625mg/mL。胞内可溶性蛋白含量变化的结果提示:黄连发挥抑菌作用的机制可能是通过损伤细菌的细胞壁导致细菌内容物的释放并引起菌体裂解死亡。黄连具有发展成为一种高效抗水产病害中草药制剂的潜力。     

1株副干酪乳酸菌S-4对致病弧菌的抑制特性研究

针对弧菌病害的防治,选取了一株副干酪乳酸菌(Lactobacillus paracasei)S-4对4种致病弧菌进行体外拮抗实验,并在此基础上比较了不同发酵时长及稀释倍数的上清液对弧菌的抑制作用,同时探究了抑菌物质特性及进行共培养拮抗实验.结果显示:副干酪乳酸菌S-4对4株致病弧菌均具有显著的抑制作用.副干酪乳酸菌S-4生长过程中,0~16 h的上清液无抑菌活性,20 h后开始表现出对4株弧菌的抑制作用;36 h时的上清液对创伤弧菌、哈维氏弧菌、副溶血弧菌的抑制率大于95.42%,且该上清液3倍稀释后的抑菌活性无显著降低,为最佳收获时间;72 h时的上清液对溶藻弧菌的抑制率达到95.72%,6倍稀释后的抑菌活性无显著降低,为抑制溶藻弧菌的最佳收获时间.进一步探究菌株间的相互拮抗表明:副干酪乳酸菌S-4在共培养4~6 h就表现出明显的抑菌活性,比上清液提前12 h产生抑制效果,在培养初期就能有效抑制弧菌的生长.生化分析表明:抑菌物质对过氧化氢酶、蜗牛酶、胃蛋白酶不敏感,与多肽类物质无关,酸碱中和后抑菌活性完全消失,推测为有机酸.本研究表明:副干酪乳酸菌S-4对4株常见致病弧菌具有较强抑制作用,在水产养殖中具有潜在应用价值.     

嗜盐弧菌的生化群别与临床发病关系的研究

嗜盐弧菌是沿海地区引起食物中毒和急性腹浑的主要病原菌。为探明食物中毒、胃肠炎、肠炎等不同临床表现患者粪便中检得的嗜盐弧菌的菌类别，生化群别与临床发病的关系，笔者选用[2]盐胨水、蔗糖，阿拉伯糖，MR，V－P五项试验对183株嗜盐弧菌进行生化分群，现将实验结果报告如下：1材料与方法1．1研究对象被诊断为食物中毒，胃肠炎，肠炎患者粪便中分离得183株嗜盐弧菌供本次实验。1．2嗜盐弧菌的分离和鉴定[1]。1．3嗜盐弧菌的生化分群[2]。2结果2．1嗜盐弧菌的分类，生化分群见表1，综合嗜盐弧菌的生化鉴定与分群，被分为三大类14个生化…     

费氏弧菌检测土壤联合毒性模型分析

在获得费氏弧菌(Vibrio fischer)相对发光强度与重金属离子浓度关系的基础上,采用响应面分析法建立相对发光强度与土壤联合毒性的数学模型.同时,对五处正在从事生产的工厂土壤进行采样检测验证模型的可行性.结果表明:通过建立的模型成功得出五处采样地点的土壤状况.其中,五处采样点中浅层土生物毒性均大于深层土,同一工厂排污口和生产车间之间土壤生物毒性差异较小;各采样点土样中的离子联合毒性均位于模型中的Ⅱ级毒性区间,相当于重金属离子含量为0.01 mg·L^-1.说明,该模型可用于初步判断土壤生物毒性.     

凡纳滨对虾"肌肉白浊病"病原的初步研究

从患"肌肉白浊病"的凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)的淋巴和肌肉中分离到3株细菌.人工注射感染显示,BDX-C分离菌在浓度达4.0×107cfu/mL时可使90%以上健康凡纳滨对虾死亡;4.0×106 cfu/mL时可使60%健康对虾死亡,并使凡纳滨对虾出现明显的白浊症状,试验结果表明该分离菌为致病菌.BDX-C菌的主要生理生化特性为:革兰氏阴性,单鞭毛,发酵葡萄糖,甘露醇、氧化酶、鸟氨酸脱羧酶、赖氨酸脱羧酶阳性,精氨酸脱羧酶、水杨素、枸橼酸盐(西蒙氏)阴性,在无NaCl及含10% NaCl的普通培养基中不生长,在含2%～8% NaCl的普通培养基中生长,在30～42 ℃下生长良好.鉴定该菌为副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus).药敏试验结果表明,该菌对四环素、多粘菌素B、链霉素、庆大霉素、氟哌酸等药物敏感,对氨苄青霉素、青霉素G、先锋霉素G、先锋霉素V、利福平、卡那霉素、复方新诺明、新霉素、强力霉素、麦迪霉素等抗菌素不敏感.