1株副干酪乳酸菌S-4对致病弧菌的抑制特性研究

针对弧菌病害的防治,选取了一株副干酪乳酸菌(Lactobacillus paracasei)S-4对4种致病弧菌进行体外拮抗实验,并在此基础上比较了不同发酵时长及稀释倍数的上清液对弧菌的抑制作用,同时探究了抑菌物质特性及进行共培养拮抗实验.结果显示:副干酪乳酸菌S-4对4株致病弧菌均具有显著的抑制作用.副干酪乳酸菌S-4生长过程中,0~16 h的上清液无抑菌活性,20 h后开始表现出对4株弧菌的抑制作用;36 h时的上清液对创伤弧菌、哈维氏弧菌、副溶血弧菌的抑制率大于95.42%,且该上清液3倍稀释后的抑菌活性无显著降低,为最佳收获时间;72 h时的上清液对溶藻弧菌的抑制率达到95.72%,6倍稀释后的抑菌活性无显著降低,为抑制溶藻弧菌的最佳收获时间.进一步探究菌株间的相互拮抗表明:副干酪乳酸菌S-4在共培养4~6 h就表现出明显的抑菌活性,比上清液提前12 h产生抑制效果,在培养初期就能有效抑制弧菌的生长.生化分析表明:抑菌物质对过氧化氢酶、蜗牛酶、胃蛋白酶不敏感,与多肽类物质无关,酸碱中和后抑菌活性完全消失,推测为有机酸.本研究表明:副干酪乳酸菌S-4对4株常见致病弧菌具有较强抑制作用,在水产养殖中具有潜在应用价值.     

软骨藻酸多克隆抗体的制备及间接竞争ELISA检测法的建立

软骨藻酸(Domoic Acid, DA)是记忆缺失性贝毒(Amnesic Shellfish Poisoning,ASP)的主要成分,能在鱼类、贝类富集,通过食物链的传递作用对人产生毒性作用. DA是小分子半抗原,运用活泼酯法将DA与载体蛋白钥孔血蓝蛋白(KLH)和牛血清白蛋白(BSA)偶联,用1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)提高偶联效率,通过紫外-可见分光光度法和聚丙烯凝胶电泳(SDS-PAGE)检测鉴定,成功制备偶联比为44 : 1的完全免疫抗原DA-KLH和偶联比为16 : 1的包被抗原DA-BSA; 用DA-KLH免疫小鼠后获得高达210 000 units/mL效价的抗血清,并通过不断优化间接竞争ELISA(ic-ELISA)检测DA的条件,确定各项最佳工作质量浓度及条件,最后成功绘制100 ng/mL~10 μg/mL范围内的DA检测标准曲线.通过优化ic-ELISA检测方法成功实现了快速定量检测DA,这对水产品藻毒素检测试剂盒的开发具有指导意义,也为建立赤潮毒素监督体系提供了良好的实验基础.     

尼罗罗非鱼IgM单抗的制备及IgM+B淋巴细胞吞噬能力的研究

采用免疫亲和层析方法纯化尼罗罗非鱼抗TNP特异性IgM，并以此为抗原免疫Babl/c小鼠进行单克隆抗体制备. 免疫的小鼠脾脏细胞与骨髓瘤细胞(SP2/0)融合成杂交瘤细胞，利用酶联免疫吸附法、蛋白质印迹法(Western blot)和流式细胞术筛选获得两株抗IgM重链的单克隆抗体，分别命名为3B3和9D12. 纯化后的单克隆抗体3B3和9D12在1 mg/mL浓度下其抗体效价分别为740,741和359,712 units/mL. 利用制备的单抗结合激光共聚焦显微镜检测发现，膜结合型IgM位于B细胞膜表面(IgM+ B细胞). 流式细胞术检测尼罗罗非鱼IgM+ B细胞的免疫组织分布，发现IgM+ B细胞分布存在组织差异性，其中在外周血(PBL)所占比例最大，约为37.6%，其次是脾脏(SPL)，占百分比33.7%，头肾(AK)占比例约为23.9%，而后肾(PK)占比例约为20%. IgM+ B细胞荧光微球的吞噬能力分析发现，IgM+ B细胞对0.5 m的荧光微球吞噬能力强于1 m. 另外，IgM+ B细胞的吞噬能力存在免疫组织差异性，其中对于0.5 m荧光微球的吞噬，PBL明显高于其他组织，而AK IgM+ B细胞对1 m荧光微球的吞噬能力最强. 以上结果表明，本研究成功制备了鼠抗尼罗罗非鱼IgM单抗工具，并利用其IgM单抗发现IgM+ B细胞具有吞噬能力且其吞噬能力存在组织差异性，表明IgM+ B细胞在先天性免疫中可能发挥重要作用.     

水体铅对草鱼幼鱼肠道结构与功能的影响

以草鱼(Ctenopharyngodon idellus)幼鱼为研究对象,采用急性毒性实验法研究铅(Pb)对平均体质量为(6.0±1.5) g的草鱼幼鱼的急性毒性效应.获得了96 h所对应的半致死质量浓度LC₅₀值,计算了Pb对草鱼幼鱼的安全质量浓度(SC),并检测了安全质量浓度胁迫0、3、6、12、24、48、72、96 h后草鱼幼鱼肠道Pb的质量分数、消化道酶活力、肠道结构及炎症相关基因表达和肠道组织结构的变化.结果表明:Pb对草鱼幼鱼96 h的SC为3.46 mg/L.随着时间变化,Pb在草鱼肠道内富集;炎症相关因子IL-1β、TNF-α、IL-10的表达量均呈现显著上调后降低;胰蛋白酶和脂肪酶的活力在实验后期均出现不同程度的显著性下降; 肠道紧密连接蛋白基因Claudin-3和ZO-1的转录水平出现显著上调后下降,肠道的隐窝深度和内壁厚度先上升后逐渐恢复.本研究可为进一步开展Pb对淡水养殖鱼类的毒性机理研究奠定试验基础,为保障水产品质量和保护渔业资源提供数据支持.     

硬骨鱼IgM结构和功能及其体液免疫应答

经典免疫学理论有2个基本模式阐述抗体免疫反应的发展和功能:（1）亲和力成熟依赖于机体本身的和通过突变形成的高亲和力抗体的抗原驱动选择过程；（2）抗体的生物效应功能是由抗体的类型所决定的.最近研究发现硬骨鱼的免疫系统通过调控结合抗原的亲和力大小来改变分泌的IgM抗体同质异构体结构的比例，从而影响其抗体在血清中的半衰期.这种独特性质的发现是对经典免疫学理论的补充和扩展.文章概述了硬骨鱼IgM抗体结构和功能的亲和力驱动调节，并介绍维持体液免疫记忆的长寿命浆细胞和记忆性B细胞的性质以及抗体分泌细胞（如原浆细胞、浆细胞）在体液免疫应答中的作用.了解硬骨鱼IgM结构和功能的关系，以及不同分化阶段B细胞维持体液免疫反应的机制，将有利于探索构建硬骨鱼免疫评价体系，并为高效的渔用疫苗开发和疫苗效果精确性评价奠定理论基础.