度夏仿刺参病原菌伯麦罗氏弧菌的分离鉴定和特征研究

以患有腐皮综合征的度夏仿刺参(Apostichopus japonicus)为对象,从其体壁病灶处分离纯化获得一株病原细菌.通过传统细菌鉴定方法对病原菌的形态学、生理生化特征和培养特征进行研究;以16SrRNA基因测序为基础,结合基质辅助激光解析电离飞行时间质谱技术(MALDI-TOF MS)进行鉴定,结果表明该菌株在分类上属于伯麦罗氏弧菌(Vibrio pomeroyi);人工感染实验验证了不论是注射感染还是浸浴感染,该菌株均能导致仿刺参发病甚至死亡.此外,将本次实验获得的伯麦罗氏弧菌菌株SUS(V.pomeroyi SUS)与伯麦罗氏弧菌的其他菌株,如V.pomeroyi LMG20537T(典型菌株)、V.pomeroyi 929进行比较,探讨了来自不同海域的菌株生理生化特征与环境因子之间的关系.研究结果显示:伯麦罗氏弧菌为南移度夏仿刺参腐皮综合征的病原菌,而且表明MALDI-TOF MS技术结合微生物数据库MALDI Biotyper系统的鉴定方法准确、便捷、重复性高,非常适合于传统鉴定方法易混淆的种类鉴别,这为南移仿刺参的疾病检查和预防奠定了基础.     

斜带石斑鱼TLR5S基因结构及功能分析

Toll样受体5(Toll-like receptor 5,TLR5)属于先天免疫系统中的一种模式识别受体(PRR),可分为可溶型和跨膜型2种.它可以识别病原体相关分子模式(pathogen-associated molecular patterns,PAMP),从而启动信号转导.本研究从NCBI数据库中得到斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)可溶型TLR5(ECTLR5S)cDNA全长序列(Genbank登录号:GQ396667).其cDNA序列全长2 439bp,包括69bp的5′UTR,435bp的3′UTR和1 935bp的开放阅读框,共编码644个氨基酸,预测编码蛋白质分子质量为72.28ku,等电点为6.37.将ECTLR5S基因氨基酸序列与其他脊椎动物的TLR5S基因氨基酸序列进行比对,结果显示出很高的相似性,其中与牙鲆相似度可达69%.Real time PCR检测结果显示ECTLR5S基因在斜带石斑鱼不同器官中均有表达,其中在肝脏中的表达量最高,其次是脾脏、血淋巴、肾脏等.Realtime PCR检测ECTLR5S基因在哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)感染3,6,12,24,48h后的肝脏中表达情况,结果显示ECTLR5S基因在3,6,12,24h时表达量显著上调(p<0.05),而在48h下降至初始水平.这些结果说明ECTLR5S基因可能参与到斜带石斑鱼抗弧菌感染的免疫反应中,并且肝脏是其发挥作用的重要器官.     

成虾发光病病原体的分离鉴定及防治技术研究

成虾养殖中也经常发生发光病，危害同样十分严重．研究证明，哈维氏弧菌(Vibroharveyi)也是成虾发光病的主要致病菌．注射、投喂、创伤、浸泡等几种感染方式都会造成对虾大量死亡，但感染速度和发光程度有明显的差别．侵入虾体内的发光菌的数量对对虾的成活率有明显的影响．致病菌与幼苗发光病的药物敏感性相似，仅对少数药物敏感，2种药饵可减少损失率，但防治工作应以预防为主，综合处理．     

斑节对虾防病养殖模式的研究

报告了斑节对虾防病养殖模式的研究,采取消毒海水的半封闭养殖和消毒海水冲淡的半封闭式淡化养殖以及地下咸水和浓缩海水冲淡的封闭式淡化养殖．由于养殖用水均无携带致死的对虾白斑病毒．虾塘彻底消毒和使用经PCR和核酸探针检测的健康虾苗,养殖过程投喂配合饲料,并防止飞禽等偶然带毒入池,从而切断了白斑病毒传播途径．放苗时,养殖用水起点盐度分别下调至12‰～10‰、8‰～6‰和5‰～4‰;捕虾期间最终盐度下降至6‰～5‰、3‰～2‰和2‰．淡化养殖虾塘环境因子的变化范围为透明度为58～40cm、水温为23．0～30．5℃、pH值7．8～9．0、DO为4．8～7．6mg／L、COD为4．0～7．6mg／L、NH4-N为0．01～0．05mg／L、NO2-N为0．001～0．05mg／L．水中和底泥弧菌数量的变化范围分别为1．0×101～8．0×102个／mL和2．0×102～8．5×103个／g;水中和底泥异养菌数量变化范围分别为0．34×103～8．6×103个／mL和1．5×105～8．6×105个／g,在养殖过程中,养殖前期的总菌数＜养殖中期＞养殖后期,这与采取捕大留小养殖后期存虾数量减少有关．