酵母基因组数据库的比较研究

通过对三个不同版本酵母基因组数据库的比较，给出了近几年酵母基因组中开阅读框架(ORF)和基因的变化情况；发现短的ORF变化不稳定。并给出造成这种不稳定的可能原因是序列的随机性；给出了TY*类ORF和以其它方式命名的ORF(*类ORF)的特点。对所有*类ORF在2001年和2002年的数据库中不复存在提出质疑．     

酵母原生质体形成中的电镜观察

用蜗牛酶处理对数期啤酒酵母和异常汉逊酵母细胞,可以有效地从中分离到原生质体透射电镜观察证明了细胞中周质体的存在,揭示了酵母原生质体的释放机理和蜗牛酶的作用位点。     

酵母菌耐性与海藻糖积累的初步研究

对 11株酵母菌进行了渗透压、乙酸、冷冻、乙醇耐性实验及海藻糖积累的比较。实验表明 ,渗透压耐性和乙酸耐性较好的菌株 ,其积累海藻糖的能力较强 ;而抗冷冻和乙醇耐性与海藻糖的积累能力无明显的相关性。     

利用毕赤酵母表达抗真菌鲎素基因

人工设计并合成了抗真菌鲎素基因ｔａｃ。将该基因克隆到酵母表达载体ｐＰＩＣ９上,使其准确融合了α交配因子分泌信号之后,电击转化毕赤酵母宿主菌ＧＳ１１５／Ｈｉｓ＾－,筛选出的转化子用甲醇作诱导物在３０℃进行诱导后,分泌到培养基中的表达产物能够抑制稻瘟病菌孢子的萌发,ｔａｃ基因以单拷贝整合到毕赤酵母染色体基因组中并有转录产物ｍＲＮＡ的存在。     

诱变筛选高生物量累积的甲基营养酵母（Candida boidinii …

报道了采用紫外线诱变和化学诱变,以及双诱变方法对甲醇酵母ＣａｎｄｉｄａｂｏｉｄｎｉｉＮｏ．２２０１野生株进行诱变筛选,得到了１０个诱变株,它们分别在１％葡萄糖,１％甲醇,４％甲醇等为碳源的培养基上摇床培养,均比野生株显示出生优势,其中５株诱变株在５％木糖培养基上的生长优于野生株,为进一步诱变筛选耐高底的浓度,生长速度快,具有高生物量累积特性的诱变株提供了新的发菌株。     

疏水吸附分离酵母 S.Cerevisiae 中的 L-天门冬氨酸酶的研究(英文)

研究了疏水柱吸附分离工业酵母（Ｓ．Ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）中的Ｌ－天门冬氨酸酶．考察了三种疏水吸附剂ＴｓｋｇｅｌＢｕｔｙ＿Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ,ＴｓｋｇｅｌＰｈｅｎｙｌ＿Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ和ＴｓＫｇｅｌＥｔｈｅｒ＿Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ６５０Ｃ的吸附性能．研究表明,通过选择控制流动相的ｐＨ值和离子强度,一次吸附过程中Ｌ－天门冬氨酸酶的分离纯化纯度可提高１４倍并保持较高的活性。实验还考察了吸附等温线类型和温度等因素的影响．结果表明,酵母中分子的电荷和疏水性是疏水柱吸附的重要影响因素．     

人类HDAC4和MIF4GD蛋白相互作用的初步研究

以HDAC4为“诱饵”,利用酵母双杂交系统筛选人肝cDNA文库得到“猎物”蛋白,通过GST Pull-down,Co-IP,荧光共定位等技术验证HDACA和“猎物”的特异性结合,并通过成人多组织cDNAPanel确定“猎物”的组织表达谱．通过体内、外蛋白结合实验证实了HDACA与MIF4GD（MIF4G domaincontaining）蛋白特异性互作,且两者亚细胞共定位于细胞质内,并确定了MIF4GD在胎盘、肝脏和胰腺中有特异性表达．本实验发现并验证了HDACA与MIF4GD的特异性互作,并确定了MIF4GD的特异性表达谱,为深入研究两种蛋白的功能及其所参与的生理过程提供了新的线索．     

乙肝表面抗原在分泌型毕赤酵母中的表达及纯化

目的对分泌型毕赤酵母中表达乙肝表面抗原并进行亲和层析纯化。方法从已确诊的乙肝患者阳性血清中提取乙肝病毒DNA,PCR扩增乙肝病毒表面抗原编码基因S,将其插入含有仅分泌信号肽序列和6个组氨酸纯化标签的毕赤酵母表达载体pPICZα,成功构建了重组表达载体pPICZα—HBVs。电转化酵母菌株GS115,得到重组乙肝表面抗原S的酵母表达菌株。结果诱导培养基BMMY中甲醇终浓度为1％,诱导表达48h重组蛋白表达量及抗原性达到最高。非变性条件下亲和层析纯化后,薄层扫描分析得到纯度超过95％,表达量约为2mg／L的重组蛋白。结论Western-blot和ELISA分析表明,所得产物为乙肝表面抗原S蛋白,其纯度和产量足以免疫小鼠制备单克隆抗体。     

油菜细胞质雄性不育相关基因的筛选

甘蓝型油菜波利马(Brassica napus pol.)细胞质雄性不育系是一种很有实用价值的油菜不育类型.目前关于其分子机制的研究已证实,线粒体ATP合成酶的一个亚基ATP6与其雄性不育相关.本实验以ATP6作为诱饵蛋白,应用酵母双杂交共转化的方法筛选与ATP6相互作用的蛋白质.在获得的阳性克隆中,发现了一个与tAPX基因及其表达的蛋白都具有较高同源性.它是活性氧清除的重要酶类,很可能与细胞质雄性不育间建立起了某种联系.     

植物GSTZ基因在毕赤酵母中的高效分泌表达

谷胱甘肽S-转移酶zeta类(GSTZ)是一种重要的多功能酶,与细胞生化代谢、环境净化等密切相关.将拟南芥、甘蓝型油菜"陕2B"和"垦C1"的GSTZ基因重组到表达载体pPIC9,电转化到毕赤酵母株GS115中,得到了分泌表达GSTZ酶的毕赤酵母工程菌株.甲醇诱导表达显示,最佳诱导时间在48～60 h,DCA-DC比活力为83.21～115.31 U/mg,GSTZ分泌量为25.71～42.90 U/mL.研究结果表明,植物GSTZ基因在毕赤酵母中的表达是高效的,为大规模发酵生产GSTZ奠定了基础.