异常汉逊酵母原生质体形成和再生研究

采用多因子正交实验确定了一株异常汉逊酵母(Hansenula anomala)原生质体形成和再生的最佳条件。对数前期细胞在1％蜗牛酶、0.1％巯基乙醇(ME)。0.1％EOTA,0.9mol.l~(-1)甘露醇和pH5.4,35℃条件下处理30分钟,原生质体形成率和再生事分别为91.4％和9.31％,原生质体形成率×再生率值最大(8.51％)。     

酵母菌原生质体形成与再生多因子综合效应分析

研究了酶解时间、酶解温度、渗透压稳定剂和预处理剂对酿酒酵母Ａ００１与克鲁维酵母Ｙ０３４原生质体形成时间与再生的综合效应．统计分析表明，在２％蜗牛酶，菌龄为对数生长期时，影响原生质体形成的主要因素是酶解时间、酶解温度，且两者存在交互作用．影响原生质体再生的主要因素是渗透压稳定剂．确立了实验菌株原生质体形成与再生的最佳匹配条件     

维生素B＿2产生菌的原生质体制备及再生

用１．０％纤维素酶＋０．５％蜗牛酶的混合酶液酶解培养２６～３２小时的维生素Ｂ＿２产生菌阿氏假囊酵母（Ｅｒｅｍｏｔｈｅｃｉｕｍａｏｈｂｙｉｉ）菌丝体，可以得到大量原生质体，最佳酶解时间为１．５小时。原生质体再生率为０．３５％～０．６７％。阿氏假囊酵母在原生质体再生过程中具有较高的突变率，以维生素Ｂ＿２产量为指标的正突变率为１２．１４％。     

酵母菌原生质体形成戌再生多因子综合效应分析

研究了酶解时间、酶解温度、渗透压稳定剂和处理剂对酿酒酵母Ａ００１与克鲁维酵母Ｙ０３４原生质体形成时间与再生的综合效应，统计分析表明，在２％蜗牛酶，菌龄为数生长期时，影响原生质体形成的主要因素是酶解时间、酶解温度，且两者存在交互作用，影响原生质体再生的主要因素是渗透压稳定剂，确立了实验菌株原生质体形成与再生的最佳匹配条件。     

酵母原生质体融合的研究

本文报道了酵母原生质体的制备、再生及融合过程.培养亲株对数生长早期的细胞(浓度为2.5×10~7细胞/ml),在1.5-2%蜗牛酶及0.1%β-巯基乙醇的作用下,45-60分钟后,原生质体的形成率可达99-100%,在35%聚乙二醇(分子量为6000)和10mMCaCl_2溶液的作用下进行融合实验,可得融合率为2.6×10~(-6)-2.1×10~(-7),它是自发回复突变率的100-1000倍.     

球孢白僵菌几丁质酶的定位研究

采用酶解球孢白僵菌菌丝细胞壁以获得原生质体,用超声破碎器破碎细胞,并用差速离心等方法,对此丝状病原真菌细胞中几丁质酶的定位进行了研究.采用球孢白僵菌 Eu-120株,分别用几丁质酶、蜗牛酶和纤维素酶,以不同比例混合进行脱壁处理.通过测定培养物上清液及原生质体溶解物的几丁质酶活性,发现此培养物上清液中的酶活性占其总酶活性的81.46%,而原生质体溶解物中酶活性极少.研究表明,球孢白僵菌几丁质酶主要存在于细胞的周质空间,并在菌生长过程中通过细胞壁分泌至细胞外.     

葡萄原生质体分离和培养的研究

以葡萄花药诱导的胚性愈伤组织为材料,在附加5％纤维素酶(OnozukaR-10)和0.5％蜗牛酶的混和酶液中分离,获得大量具有活力的原生质体.分离的原生质体在附加2mg/L 6—BA和0.5mg/L 2,4—D的改良B_5培养基中进行液体浅层培养,原生质体能再生细胞壁、生长和分裂,形成了较大的细胞团。     

几种丝状真菌原生质体的形成与再生

本文用商品混合酶酶解的方法,研究了黑曲霉、绿色木霉、桔青霉头孢霉、粗糙脉孢霉、紫色红曲霉、白地霉、凤尾菇、冬菇、平菇等10种13株丝状真菌原生质体的制备及再生,对这些真菌原生质体形成和再生过程中的形态学变化进行了观察,并通过透射电子显微镜的观察证明所得到的制备物确实为没有细胞壁的原生质体.实验表明,用商品纤维素酶、蜗牛酶、溶菌酶等配制成的混合酶液,可成功地从上述分属于子囊菌纲、担子菌纲、半知菌纲的丝状真菌菌丝体制备出原生质体.实验还说明,巯基乙醇对多数丝状真菌原生质体的形成并不是必需的.在所有供试菌株中均观察到由原生质体直接长出菌丝及由原生质体先形成酵母芽链状再长出菌丝这两类再生方式.     

酵母嗜杀质粒融合转移──Ⅰ．融合转移系统的建立

以嗜杀酵母ＥＲＲ１和啤酒生产酵母ＡＳ２４２０出发菌株，建立了供体菌ＭＫ２－３：Ｋ＋Ｒ＋Ｌｅｕ－ρ＋（ｎ）和受体菌ＡＳ２４２０－１：Ｋ－Ｒ－ｌｅｕ＋ρ°（２ｎ）．对原生质体制备再生条件的研究结果表明两株菌的原生质体制备条件不尽相同；同一菌株原生质体形成与再生的最佳条件也不相同．有利于融合再生的原生质体制备条件是ＭＫ２－３：菌龄３０ｈ，蜗牛酶解量３０ｇ／Ｌ酶解时间３０ｍｉｎ，此时原生质体形成率为８０％，而再生率达１７．１％，这些条件对嗜杀活性无影响，再生菌落的嗜杀活性率达１００％；而ＡＳ２４２０－１；菌龄２４ｈ，蜗牛酶量２０ｇ／Ｌ，酶解时间３０ｍｉｎ，原生质体形成率为８１％，再生率为１８．１％．对四种渗透压稳定剂的再生效果实验表明甘露醇效果最佳，氯化钾次之，考虑到廉价，氯化钾是很好的代用品，在３０％ＰＥＧ６０００及Ｃａ２＋条件下进行原生质体融合，融合率可达８．９×１０－６，对其中的融合子ＭＡＲ４的遗传性状及嗜杀活性的稳定性检测，ＤＮＡ含量及细胞大小测定，ｄｓＲＮＡ质粒的提取及电泳结果分析和发酵性能测定，结果表明融合子ＭＡＲ４具有较高的嗜杀活性并可以稳定遗传，有与供体菌ＭＫ２－３嗜杀质粒ｄｓＲＮＡ相同的电泳行为，     

阿舒假囊酵母(Eremothecium ashbyii)原生质体制备与再生的研究

阿舒假囊酵母(Eremothecium ashbyii)在经0.4％巯基乙醇30℃预处理15分钟的菌丝体,其菌龄以对数期为宜。在蜗牛酶浓度8mg/ml、纤维素酶0.lmg/ml及果胶酶0.05mg/ml的作用下,pH为6.0～7.5,以0.7M甘露醇或0.gM蔗糖作稳定剂,有利于此种酵母原生质体的制备和再生.     

应用正交实验研究铜绿假单胞菌原生质体制备与再生

通过对铜绿假单胞菌原生质体制备与再生进行正交实验,探讨各因子对铜绿假单胞菌原生质体制备与再生影响水平,得到铜绿假单胞菌原生质体制备与再生的最优条件:酶解时间 0. 5h,酶浓度 2mg/L,菌龄为 15h 此时原生质体形成率为 80. 5%,再生率为 20. 6%     

小诺霉素产生菌棘孢小单孢菌的原生质体诱变育种

通过对菌株产量分布参数的统计学分析，棘抱小单孢菌７４＃被选作原生质体诱变育种的出发菌株．获得小诺霉素含量为８０％的高产突变株的概率以紫外线对原生质体悬液３０秒诱变处理为最高（２２．８％），５株高产突变株的小诺霉素组份与效价平均分别比出发菌株提高３３．３％与５１．２％．初步探讨了甘氨酸对原生质体化的作用机理以及原生质体诱变与再生处理提高小诺霉素产生菌生产能力的机理．     

产辅酶Q10的类球红细菌原生质体制备和再生研究

 辅酶Q₁₀(CoQ₁₀)是人类细胞自身产生的内源性辅酶因子,是一类天然抗氧化剂,目前已广泛应用于医药、食品、化妆品等诸多领域.基因组改组技术的核心内容为原生质体融合,为了提高基因组改组的效率,提高辅酶Q₁₀的产量,本研究对产辅酶Q₁₀的类球红细菌原生质体制备及再生条件进行了优化,通过生长曲线、正交试验等确定了原生质体制备及再生的适宜条件：溶菌酶浓度1mg/mL、作用温度37℃、作用时间1h以及再生培养基蔗糖浓度10%.在此条件下,类球红细菌原生质体形成率可达到96.1%,再生率可达到28.8%.这为进一步对该菌的基因组改组研究奠定了基础.     

担子菌《Basidiomyces》原生质体融合的研究 [1]金针茹(Flammulina velutipes)原生质体的制备与再生

本文报导由金针菇制备原生质体的条件和方法,以及对原生质体形成和再生过程中形态学变化进行观察的结果。     

香菇菌丝原生质体制备及融合条件的研究

讨论不同菌龄、酶解时间、酶解温度、渗透压稳定剂对香菇原生质体产率的影响。结果表明 ,香菇菌丝制备原生质体时最适菌龄为 6天 ,酶解时间为 3h ,酶解温度为 34℃ ,渗透压稳定剂用 0 .6mol/L甘露醇为最佳。在此基础上 ,以 35 %的PEG为融合诱导剂进行香菇B0 1、L2 6种间原生质体融合 ,并用显微镜观察到融合子的形成     

灭活原生质体融合技术选育苏云金杆菌新菌种——原生质体融合条件的研究

利用双灭活原生质体融合技术获得了苏云金杆菌新菌株。着重对原生质体制备、再生、灭活及融合的实验条件进行了报道。     

Dynamic organization of actin cytoskeleton during the polarity formation and germination of pollen protoplasts

The formation of the polarity of pollen protoplast and the dynamics of actin cytoskeleton were observed by non-fixation, Alexa-Phalloidin probing and confocal laser scanning microscopy. Our results showed that the protoplast obtained from stored pollen contained numerous crystalline fusiform bodies to constitute a storage form of actin. When dormant pollen was hydrated, the actin cytoskeleton forms a fine network spreading uniformly in the protoplast. In the process of polarity formation and germination of pollen protoplast, actin filaments marshaled slowly to the brim, and then formed multilayer continuous actin filament bundles surrounding the cortical of the protoplast. When the protoplast was exposed to actin filament-disrupting drugs, such as Latrunculin A and Cytochalasin D, continuously arranged actin bundles were disturbed and in this condition, the protoplast could not germinate. But when exposed to actin filament stabiling drug-phalliodin, the dynamics of actin filaments in the protoplasts behaved normally and the protoplasts could germinate normally. These results were also confirmed by the pharmacology experiments on pollen grains. And when Latrunculin A or Cytochalasin D was washed off, the ratio of pollen germination was resumed partly. All the results above show that the dynamic organization of the actin cytoskeleton are critical in the cell polarity formation and germination of pollen protoplast, and that the reorganization of actin cytoskeleton is mainly due to the rearrangement of actin filament arrays.     

大蕉胚性培养物及其原生质体再生植株的染色体分析

 采用看护培养法对大蕉胚性细胞悬浮系（Embryogenic cell suspensions, ECS）来源的原生质体进行培养,并研究了不同品种的看护细胞对原生质体培养的影响,以及大蕉ECS及其原生质体再生植株的染色体数目。结果发现,采用贡蕉ECS作为看护细胞时,大蕉原生质体培养15 d后细胞分裂频率达到8.5%,培养30 d后细胞团形成率为0.35%;而以大蕉ECS作为看护细胞时,全部原生质体褐化,不能正常发育。染色体检测结果表明,大蕉ECS的染色体数目不稳定,除含有正常的三倍体染色体数目的细胞（2n=3x=33）外,还出现大量染色体数目异常的细胞。其中绝大部分细胞含有多倍和非整倍的染色体数目,仅14.5%的细胞含正常三倍体染色体数目;但通过ECS原生质体培养获得的再生植株具有正常的三倍体染色体数目（2n=3x=33）。     

L-甲硫氨酸产生菌M0658原生质体形成及其再生条件的研究

以产L-甲硫氨酸芽孢杆菌M0658为出发菌株，考察了各种因素对原生质体形成和再生的影响．在原生质体形成和再生的最佳条件下，M0658原生质体形成率和再生率分别达到96．4％和75．3％，并在光学显微镜下观察了原生质体和原菌的形态差别．