乙肝表面抗原在分泌型毕赤酵母中的表达及纯化

目的对分泌型毕赤酵母中表达乙肝表面抗原并进行亲和层析纯化。方法从已确诊的乙肝患者阳性血清中提取乙肝病毒DNA,PCR扩增乙肝病毒表面抗原编码基因S,将其插入含有仅分泌信号肽序列和6个组氨酸纯化标签的毕赤酵母表达载体pPICZα,成功构建了重组表达载体pPICZα—HBVs。电转化酵母菌株GS115,得到重组乙肝表面抗原S的酵母表达菌株。结果诱导培养基BMMY中甲醇终浓度为1％,诱导表达48h重组蛋白表达量及抗原性达到最高。非变性条件下亲和层析纯化后,薄层扫描分析得到纯度超过95％,表达量约为2mg／L的重组蛋白。结论Western-blot和ELISA分析表明,所得产物为乙肝表面抗原S蛋白,其纯度和产量足以免疫小鼠制备单克隆抗体。     

黑河水库水源的微生物区系考察

以黑河水系的陈河(地名)和黑河大桥上侧坝内作断面采水样。分离得36株异养细菌和13株霉菌,并对以上菌株按常规方法进行了鉴定.还发现有与水质有关的紫色细菌、绿硫细菌、反硝化细菌、磷细菌、铁细菌、氨细菌和大肠杆菌。没有检测到氧化硫硫杆菌和氧化亚铁硫杆菌。反硝化细菌、氨细菌和大肠杆菌群的最大可能数(MPN)分别是273个/g,300个/g,75个/l。水体内的细菌总数是3.79×10~2个/ml.本文还对黑河水系的微生物区系与水质的关系进行了评估和未来预测.     

天花粉蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞系的制备及鉴定

将小鼠骨髓瘤细胞（SP2／0细胞）与经TCS免疫过的小鼠脾细胞融合，融合后的细胞悬浮于HAT培养液中进行选择性培养，挑选可以分泌TCS单克隆抗体的细胞系，再经克隆化为单克隆细胞系。用间接酶联免疫吸附法检测此细胞系分泌单克隆抗体情况。经细胞融合和2次克隆化后，获得1株可以稳定分泌TCS单克隆抗体杂交瘤细胞系，ELISA检测结果为阳性。获得了可以稳定分泌天花粉蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞系，为TCS鉴定、应用奠定良好的基础。     

关于“不明生物体”的实验研究：特大型粘菌复歙本的实…

通过对“不明生物体”表层、内层结构和分离培养的观察，物体表层有多种粘菌子实体，其内部无明显的细胞界限，流动的原生质内含有大颗粒和小颗粒。经过分离培养，证实原生质内的大颗粒为酵母菌和霉菌的孢子，小颗粒是原生质的颗粒物质夹杂少量细菌细胞。水琼脂和Ｗ２Ａ琼脂载片培养，可形成大量变形体；并可见其伸出伪足摄食其它微生物颗粒的习性。变形体有趋集作用，形成原质团。７２ｈ后原质团可变为不定形的多粘菌子实体；在合成     

从植物分离产紫杉醇的内生真菌的研究

将生于秦岭地区的中国红豆杉树皮中分离得到的一株内生真菌,在马铃薯培养基中进行发酵试验,用薄层层析、薄层扫描检测。分析结果表明这株真菌能合成紫杉醇,高效液相色谱技术测定其紫杉醇含量约为１４．２０μｇ／Ｌ。     

菲降解菌株的筛选及特性研究

目的 以菲为模型,分离能够以菲作为惟一碳源和能源进行生长繁殖的微生物,研究菲的降解特性,为多环芳烃的生物降解机制和工业应用的研究奠定基础.方法 从焦化污水池附近的土壤中,通过选择性富集培养,筛选、分离具有菲降解能力的茵株,通过16s rDNA序列分析鉴定其种属,并在不同的温度和pH条件下,测定菌株的生长及对菲的降解性能.结果 得到两株较好的菲降解茵,初步鉴定其分别属于不动杆菌属和假单胞茵属.其最适生长温度均为37℃,最适降解温度分别为34℃和37℃,最适生长pH分别为7.0和6.5～7.0,最适降解pH为7.0和6.5,两天内菲的最大降解率分别达到80.4%和86.6%.结论 分离得到的两株茵对菲都具有较好的降解能力,且假单胞茵略微优于不动杆菌,降解机制及降解策略、工程应用研究正在进行中.     

兔血管平滑肌细胞和聚羟基丁酯（PHB）的细胞相容性实验研究

探索血管平滑肌细胞和新型可降解材料聚羟基西酯（PHB）的细胞相容性，为组织人工血管的构建寻找理想的支架材料。将组织法体外培养的兔血管平滑肌细胞种植在PHB膜片和PHB三维微孔支架上，在相差显微镜下观察细胞的粘附和生长情况，用MTT法测定细胞粘附率和细胞增殖指数，复合培养7d后进行扫描电镜观察并用流式细胞仪（FCM）测定细胞周期、DNA指数。结果兔血管平滑肌细胞在PHB膜片上粘附率为77％，细胞增殖符合细胞的生长曲线，在PHB三维微孔支架上生长情况良好，并被证实为二倍体细胞。结论是兔血管平滑肌细胞和聚羟基西酯（PHB）的细胞相容性较好，但细胞与材料间的粘附有待进一步改善。     

固氮菌B8—G菌株产聚—β—羟基丁酸发酵条件研究

通过利用碳源、氮源实验，发现固氮菌Ｂ８－Ｇ菌株，在以ＮＨ４ＮＯ３为氮源、蔗糖或甘露醇为碳源的发酵培养基中生长良好。在３０℃，２２０ｒｐｍ摇床培养４８ｈ，Ｂ８－Ｇ菌株的生物量可达９．５１ｇ·Ｌ－１以上，ＰＨＢ含量可达细胞干重的７４％以上。同时对Ｂ８－Ｇ菌株的培养条件也作了研究，采用补料分批培养方法，获得Ｂ８－Ｇ菌株的生物量达到１７．２ｇ·Ｌ－１；ＰＨＢ的含量达到７６．１４％。     

一株高产聚β－羟基丁酸的细菌

从处理印染废水的活性污泥中分离出一株细胞内积累聚β－羟基丁酸（ＰＨＢ）的革兰氏阴性，氧化型，可运动的短杆菌（Ｚ＿５）。经鉴定为动胶菌（ｚｏｏｇｌｏｅａ，ｓ·ｐ）。该菌在简单的葡萄糖蛋白胨培养基中，培养３４ｈ，积累的ＰＨＢ可达细胞干重的５２％（Ｗ／Ｗ）。由Ｚ＿５所得的抽提物经红外先谱，核磁共振分析确证为ＰＨＢ；提取物ＰＨＢ纯度可达９９．８７％。这是一株有工业化生产应用前景的优良菌株。     

一株产紫杉醇真菌发酵条件的研究

研究了在一株产紫杉醇真菌的发酵培养中，初始糖浓度、碳源、氮源和前体饲喂对生物量和紫杉醇合成的影响。结果表明，一定氮源和前体饲喂对紫杉醇产量提高有显促进作用。在发酵过程中补加糖也有一定影响。