毕赤酵母表达硒代重组人血清白蛋白的研究

本试验将能够成功表达重组人血清白蛋白(rHSA)的巴斯德毕赤酵母培养至诱导期后，流加亚硒酸钠，同时设空白对照发酵液(不加入亚硒酸钠)，通过对比相同菌株在两组培养基中表达的rHSA的含硒量，判断硒能否以硒代氨基酸的形式存在于重组蛋白质中。发酵液经热处理、超滤、离子交换和丙酮沉淀等步骤后，进行Tricine-SDS-PAGE凝胶电泳、X射线能量色散谱(EDX)和原子吸收分析。结果表明，加硒发酵液样品中硒元素的质量分数比对照多23.2%，硒与蛋白质的质量比为0.0069，高于对照发酵液近35倍，初步证明无机硒可以被毕赤酵母同化，转化为硒代氨基酸，并形成硒代重组蛋白质。     

发酵型梨汁酒酿造工艺研究

梨是人们日常生活中的一种主要水果，将梨汁进行酿造，得到的梨汁酒既有酒的醇香又有梨的保健功能，对发酵型梨汁酒酿造工艺进行了研究，起始糖度20％左右，最佳发酵温度20℃，发酵液pH为5，发酵时间7d，该条件下发酵的梨汁酒颜色金黄，透光率高，口感较好．同时也对梨汁酒工业化做了展望．     

产朊假丝酵母(Candida utilis)尿酸酶的基本特性

产朊假丝酵母尿酸酶通过由DEAE-sepharose和Xanthine-agarose等层析纯化.纯化酶经SDS-PAGE显示单一蛋白带,HPLC显示纯度为97.5%.其相对分子质量为127 kDa,变性SDS-PAGE表明该酶的表观分子质量为33 kDa.该酶具有较强的酸碱稳定性和热稳定性,最适pH为8.5,最适温度为40.0℃.在最适条件下测得其Km为35.0 μmol/L.某些金属离子对酶活性的研究结果表明,Co3 ,Pb2 ,Mn2 及EDTA,NEMI对尿酸酶活性有抑制作用,Mg2 ,Triton X-100对尿酸酶活性略有激活作用.     

朊圆酵母Y0401尿酸酶的基本特性研究

研究了尿酸酶分离纯化条件和pH、温度、底物浓度、一些有机和无机试剂对尿酸酶酶促反应速度的影响.研究结果表明,用Triton X-100及巯基乙醇处理细胞悬液(pH 8.5),再用超声波处理破碎细胞效果最佳.硫酸铵沉淀尿酸酶的最佳浓度为75%.用Phenyl-Sepharose CL-4B疏水层析和Xanthine-agarose亲和层析两步纯化步骤可获得理想纯度的酶制剂.在一定的条件下,尿酸酶的最适pH和酸碱稳定pH范围分别为8.5和5.0～12.最适温度为37℃;热稳定性较好,在50℃处理30 min时活性保持90%,在60℃处理30min时活性仍保持80%.在最适条件下,该酶催化尿酸的米氏常数(Km)为3.34×10-5mol/L.一些金属离子和有机化合物对酶活性的影响也进行了研究.     

Debaryomyces sp.甘油激酶基本动力学性质研究

通过平板初筛和摇瓶复筛,从105株菌中筛得一株甘油激酶的高产菌株,并研究了其所产甘油激酶的动力学性质.研究结果表明:在MES系统中,甘油激酶有较好的酸碱稳定性,pH稳定范围为5.5～10.5;最适pH和最适温度分别为pH 8.0和50℃,该酶催化甘油的米氏常数(Km)为3.5×10-5mol/L,催化ATP的Km为4.46×10-4mol/L.同时对一些金属离子和有机化合物对酶活性的影响也进行了研究.     

温和化学渗透剂对解脂假丝酵母神经酰胺含量的影响

为了分析温和化学渗透剂木瓜蛋白酶、甘氨酸对解脂假丝酵母33M Candida lipolytica中神经酰胺含量的影响，分别采用氯仿甲醇抽提法和乙醇抽提法提取神经酰胺，用固相萃取法（SPE）分离神经酰胺与其它膜中脂类，并用薄层色谱（TLC）方法和高效液相色谱-蒸发光散射器（HPLC-ELSD）对其进行定性和定量分析，结果表明：加温和化学渗透剂木瓜蛋白酶、甘氨酸能增加解脂假丝酵母中的神经酰胺含量，并以木瓜蛋白酶效果最好。     

β葡聚糖酶杂合基因bglHAM的克隆及在P.pastoris中的表达

采用PCR的方法,以Bacillus macerans总DNA为模板,构建出β-1,3-1,4葡聚糖酶杂合基因bglHAM,与巴斯德毕赤酵母表达载体pPIC9K重组,得到重组质粒pPIC9K-HAM,电脉冲转化法转化酵母菌GS115,KM71,在MM,MD平板上筛选表型,YPD-G418平板上筛选多拷贝重组子,重组菌株经甲醇诱导后,刚果红平板染色法检测到β-葡聚糖酶活性,SDS-PAGE证明表达产物的分子量约为24kD,摇瓶诱导培养筛选到的重组菌株,胞外每mL发酵液最高酶活达240U。     

8-（2′-萘磺酰）-胺基喹啉锌荧光探针的合成及其对酵母细胞的染色

合成了一种锌离子荧光探针-8-(2′-萘磺酰)-胺基喹啉(NSQ),NSQ自身具有较弱的荧光,向NSQ溶液中加入Zn2 后,荧光增强5.7倍,并且生物体系中含量较多的碱金属或碱土金属离子几乎不干扰Zn2 的荧光.酵母细胞染色实验表明,NSQ可以对酵母细胞中的锌离子进行荧光显微分析.     

福建药白曲中优势菌的筛选及其特性研究

对福建药白曲中的优势菌进行分离纯化,得到4株毛霉(M1,M2,M3,M4)和3株酵母(Y1,Y2,Y3).初步鉴定3株酵母分别为啤酒酵母葡萄酒变种、产膜毕氏酵母和汉逊酵母.对毛霉和酵母的生理特性研究表明:毛霉产酶高峰期是在发酵第3~4d;4株毛霉中M4产蛋白酶、糖化酶和淀粉酶均相对较高,同时能产生特殊的酒香味;酵母生长最适温度为30℃,最适pH5~6,生长对数期为5~15 h;3株酵母中,Y1产酒精能力最高.综合考虑福建黄酒酿造工艺,选取毛霉M4和酵母Y1作为纯菌种酿造菌株.