活性炭联合陶瓷膜超滤纯化香菇多糖

为了改善香菇多糖精制工艺及降低生产成本,以45%香菇多糖粗品为原料,利用陶瓷膜超滤对其进行纯化精制。结果表明,4.5mg/mL的香菇多糖粗品溶液用1%活性炭作预处理,超滤温度为40℃,超滤压力为0.2MPa,膜面流速为4.5m/s时纯化效果最优。蛋白质的脱除率可达81%,多糖粗品脱色率达90.9%,精制得香菇多糖的纯度为89.7%,回收率77.6%。     

表达胰岛素的毕赤酵母生长动力学及诱导策略

对本实验室构建的一株重组巴斯德毕赤酵母基因工程菌的生长及诱导进行了研究,结果表明生长阶段菌体的生长与限制性基质甘油残留浓度的关系符合Monod关系式,细胞最大生长比速率为0.204h^-1,饱和常数为24.3g/L。经参数推导得理论最大细胞对甘油得率为0.497g/g,以及菌体生长维持系数为0.007g/g·h,后者说明此株工程菌有高密度发酵的潜力。诱导阶段补加酵母提取物、大豆蛋白胨和微量元素能有效提高目的蛋白产量。在发酵罐上罐试验中,目的蛋白产量达256mg/L,蛋白产量是摇瓶发酵蛋白产量的5倍多。     

一种快速、经济、有效纯化人工合成寡核苷酸片段的方法

采用DEAE-52纤维紊小柱，纯化了7个人工合成的寡核苷酸引物．纯化效果栗用岛津(uy-265)分光光度计扫描，8mol／L尿素-12%聚丙烯酰胺凝胶电泳及自提的模板DNA经PCR检测．该法分传统的HPLC法及PAGE法相比，具有快速、经济、有效的优越性。     

毕赤酵母表达硒代重组人血清白蛋白的研究

本试验将能够成功表达重组人血清白蛋白(rHSA)的巴斯德毕赤酵母培养至诱导期后，流加亚硒酸钠，同时设空白对照发酵液(不加入亚硒酸钠)，通过对比相同菌株在两组培养基中表达的rHSA的含硒量，判断硒能否以硒代氨基酸的形式存在于重组蛋白质中。发酵液经热处理、超滤、离子交换和丙酮沉淀等步骤后，进行Tricine-SDS-PAGE凝胶电泳、X射线能量色散谱(EDX)和原子吸收分析。结果表明，加硒发酵液样品中硒元素的质量分数比对照多23.2%，硒与蛋白质的质量比为0.0069，高于对照发酵液近35倍，初步证明无机硒可以被毕赤酵母同化，转化为硒代氨基酸，并形成硒代重组蛋白质。     

丙酸杆菌的分离与初步鉴定

采用厌氧技术从鲜牛奶等样品中分离丙酸杆菌。经初筛后对其中一株（１００２０）较详细研究,应用扫描电子显微镜（ＳＥＭ）等进行形态学观察,通过不同培养介质揭示其生理特点,并初步定为费氏丙酸杆菌。对其发酵产物经红外分光光度计测试确认为丙酸。最后讨论了应用一些研究的几个问题。     

利用转基因毕赤酵母高表达小分子药用多肽的研究

天然小肽Gsp有明显的降血糖功效,由59个氨基酸残基组成.其编码基因由本实验室设计、合成,并重组构建成表达质粒pPIC9-Gsp. 经电穿孔将该质粒转化为毕赤酵母GS115(His4- mut+),挑选His+ muts型菌株进行重组蛋白胞外表达研究.表达蛋白经Tricine-SDS-PAGE凝胶电泳分析确定了相对分子质量的正确性,其氨基酸测序显示与天然多肽序列一致,并经紫外扫描分析确定了表达量为344mg/L左右.     

表达人胰岛素前体的毕赤酵母菌株的构建

将人胰岛素前体 (HIP)基因插入到毕赤酵母Pichiapastoris的分泌表达质粒pPIC9K中,得到分泌表达质粒pPIC9K/HIP并用电转化法转化P.pastorisGS115。筛选出整合型His⁺Mut^s 菌株,进一步用G418筛选获得高拷贝转化子。经诱导培养后,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)证明HIP在毕赤酵母中能有效分泌表达。对毕赤酵母中外源基因的稳定性进行了研究,结果表明外源基因在毕赤酵母中很稳定.     

一种简便快速工艺制备重组人胸腺肽α1

将构建的含有胸腺肽α₁融合蛋白的编码基因插入表达质粒pET28a(+)中，并在大肠杆菌BL21中进行表达，该菌经IPTG诱导融合蛋白高表达后，离心收集菌体，超声波破碎，包含体裂解，目标蛋白质的体外变性复性后，经DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子交换层析纯化，每升菌液中可获得260mg融合蛋白。经重组肠激酶酶切反应、Ni-Sepharose亲和层析，Sephadex G-25柱纯化后，得到了纯度达97%的重组人胸腺肽α₁，该纯化工艺简单快速，经三步层析即可得到纯度达97%的重组人胸腺肽α₁，且产量达82mg/L，为大批量用细菌表达重组人胸腺肽α₁及纯化提供了参考。     

一株甲烷氧化杆菌的分离及其功能的初步研究

采用Ｍｕｎｚ培养基,由河底淤泥等土样中分离以甲烷为唯一碳源的细菌。对其中一株杆菌经透射电镜观察及生理学鉴定,认为该菌为甲基单胞菌属（Ｍｅｔｈｙｌｏｍｏｎａｓ）甲烷氧化杆菌。该菌能将乙烯氧化产生环氧乙烷,能在质量分数为０１％苯酚、对苯二酚和体积分数为０１％苯的培养液中增殖并发生降解或氧化反应。该菌粗蛋白质量分数为２２５％以上。下一步将对该菌的实际应用作深入研究     

一株甲烷氧化杆菌的分离及及其功能的初步研究

采用Ｍｕｎｚ培养基,由河底淤泥等土样中分离以烷为唯一碳源的细菌,对其中一株杆菌经透射电镜观察及生理学鉴定,认为该菌为甲基单胞基属甲烷氧化杆菌。该菌粗蛋白质量分数为２２．５％以上。下一步将对该菌的实际应用作深入研究。