辣椒脉斑驳病毒侵染性克隆构建的简易方法

本文介绍了一种构建辣椒脉斑驳病毒(Chilli veinal mottle virus , ChiVMV)侵染性克隆的简易方法. 基于辣椒脉斑驳病毒的全长确定序列, 根据基因内部的单一限制性酶切位点, 设计引物, 将ChiVMV分成KL1,KL2, KL3三个片段通过RT PCR和TA克隆的方法将3个片段构建到PMD19 T载体上. 通过双酶切将ChiVMV前面7000bp的片段构建到载体上, 从而将全部的ChiVMV cDNA分段构建到两个重组质粒中, 成功地避免了全长病毒序列在大肠杆菌中不稳定的现象. 进行体外转录时, 先通过PCR扩增出两个彼此有一定重叠的平末端片段, 再利用两个重叠片段为模板用重叠PCR的方法扩增出全长带T7启动子的ChiVMV cDNA, 并通过T7 RNA聚合酶成功转录出ChiVMV的病毒RNA.     

牛肉及其制品中肉类掺假的荧光PCR鉴别体系优化

根据可能用于牛肉及其制品掺假的肉类原料(猪肉、鸡肉和鸭肉),设计了4对引物和探针.经过测试其具有良好的特异性后,对影响各自聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增的5个影响因素包括Mg2+浓度、Taq DNA聚合酶活、dNTPs浓度、引物和探针浓度以及模板DNA用量等进行了优化,确定了最佳的PCR扩增体系.同时,根据优化后的结果,对特异性进行进一步的测试,并使用建立的优化荧光PCR鉴别体系对混合样品和市售样品进行检测,确定整体检出限为0.1%(质量分数),并证明该鉴别体系的实际应用价值.     

多胎和单胎山羊品种促性腺素基因及其受体基因的克隆、序列分析及组织表达研究

以多胎的金堂黑山羊和单胎的藏山羊为研究对象,通过RT-PCR技术,对金堂黑山羊和藏山羊FSHβ、LHβ、FSHR和LHR基因进行克隆,采用Real-time PCR技术测定FSHR和LHR基因在发情前期母羊卵巢中的表达量,采用酶联免疫法测定血浆中FSH和LH的浓度.结果表明:金堂黑山羊和藏山羊FSHβ、LHβ、FSHR和LHR基因的CDS区长度分别为390bp、426bp、2088bp、2103bp,同源性分别为99.74%、100%、99.95%、99.57%;发情前期两山羊品种之间卵巢FSHR和LHR基因的mRNA相对表达量差异不显著(P>0.05),血浆中FSH浓度无显著差异(P>0.05),LH的浓度差异显著(P<0.05).提示FSHβ和LHR基因序列及血浆中LH浓度在两个品种间的差异可能是品种间产羔数性状差异的重要原因.     

一种采用微波炉加热快速提取细菌DNA用于PCR扩增的方法

利用微波加热原理,探索一种快速、简单、高效提取细菌DNA用于常规PCR快速检测的方法.在微波炉额定功率800 W条件下分别对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、单增李斯特氏菌、副溶血弧菌、沙门氏菌以及志贺氏菌6种常见食源性病原菌进行微波处理,离心取上清,获取细菌DNA,将样本DNA进行PCR扩增及琼脂糖凝胶电泳进行验证.并进一步采用微波加热方法针对6种病原菌最低检出浓度和混合提取6种病原菌DNA的PCR检测进行分析.6种病原菌在微波炉中加热40-130 s的上清DNA样本均能用于常规PCR扩增.针对检出浓度的分析表明,副溶血弧菌的最低检出浓度为103cfu/ml,金黄色葡萄球菌为104cfu/ml,肠出血性大肠杆菌为105cfu/ml,肠炎沙门氏菌和福氏志贺氏菌的最低检出浓度为106cfu/ml,针对单核细胞增生李斯特氏杆菌的的最低检出浓度为107cfu/ml.进行6种混合菌微波共提取时,其中5种病原菌的特异性基因都能扩出,并且条带很亮.该微波提取方法具有快速,简单,高效的特点,能满足大部分食源性病原菌的常规PCR检测需求,大大节约了时间和成本,具有广泛的适用性,为细菌快速分子检测提供了简便手段.     

甘肃地区女性宫颈HPV感染的现状研究

目的:了解甘肃地区女性人乳头瘤病毒(HPV)感染的基因亚型、年龄及地区分布等.方法:采用凯普医用核酸分子快速导流杂交基因芯片技术,对7318名兰州女性进行生殖道21种HPV感染基因亚型筛查.结果:甘肃地区女性HPV感染率为19.9%(1 452/7 318),其中高危型HPV感染率14.78%(1 082/7 318),低危型HPV感染率3.38%(247/7 318),高危型中HPV16为主要致病亚型,占28.59%(415/1 452),低危型中HPV6占6.30%(98/1 452).1452例感染HPV的标本中,单一感染1 188例,占81.82%(1 188/1 452),多重感染264例,占18.18%(264/1 452).按年龄分组中≥50岁组HPV感染率最高,占24.24%.按地区分析,陇南地区HPV感染率最高,达到30.97%(83/268).结论:甘肃地区为宫颈癌高发区,其中HPV16是感染最多的型别,对该地区女性进行子宫颈癌的筛查和防治已成为当务之急.     

嗜盐菌XZ515 中类BR 蛋白基因部分片段的序列研究

在一个新嗜盐菌Ｈ．ｓｐ．ＸＺ５１５吧，编码自螺旋Ｃ至螺旋Ｇ的视黄醛蛋白基因片段已扩增并测定了此基因片段的核苷酸序列，翻译出的氨基酸排列次序与菌紫质蛋白和ａｒ－１，ａｒ－２相应蛋白的相应片段进行了比较，结果说明，在ｂｒ蛋白中，对于完成质子泵功能和视黄酝酿结合为关键性的氨基酸残基均为保守的。在ｂｒ蛋白中，Ｍ１４５可能对于视黄醛异构化反应是重要的残基。     

4种百合不同花期花香成分鉴定与关键基因表达研究

使用顶空固相微萃取（HS-SPME）和气相色谱-质谱（GC-MS）联用技术，对4个百合（Lilium spp.）品种初花期和盛花期的花朵进行花香成分分析，并利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和中性红染色试验，分别对不同品种百合初花期和盛花期花朵进行6个花香合成关键基因相对表达量和花香释放部位的测定.结果表明，4个百合品种初花期和盛花期共测定出61种挥发性化合物，盛花期花朵挥发物总含量均高于初花期，含量较高的成分有芳樟醇、(Z)-β-罗勒烯、桉树脑、(+)-柠檬烯、月桂烯、苯甲酸甲酯等.差异挥发物的筛选结果显示，4个品种共筛选出差异挥发物44种.将61种挥发性化合物分为9大类，4个品种初花期与盛花期花香的主要成分为萜烯类和酯类化合物. qRT-PCR结果表明，PAL、PAL3、DXS、TPS这4个基因在4个品种盛花期的相对表达量均高于初花期，而BSMT在‘西伯利亚’盛花期，DXR基因在‘竞争’和‘木门’盛花期的相对表达量低于初花期.中性红染色试验结果显示，盛花期花朵染色程度高于初花期，且均在花瓣的上半部反卷处染色最深，说明该部位为主要的花香物质释放区域.     

绵羊RARG基因组织表达规律的研究

根据GenBank中报道的绵羊视黄酸受体γ（retinoic acid receptor—gamma，RARC）基因mRNA序列，设计特异性引物，利用Real—time PCR技术对绵羊RARG基因的组织表达规律进行了研究，并对其进行了生物信息学分析，为进一步研究该基因的功能提供线索。结果表明，绵羊RARG基因共编码458个氨基酸，其中亮氨酸所占比例最高，为11．10％；该基因编码产物在系统进化树中与牛的亲缘关系最近；RARG基因编码产物二级结构主要以无规则卷曲和α螺旋为主，主要位于细胞核中，是一种水溶性蛋白；Real—time PCR结果显示，绵羊RARG mRNA在心、肝、脾、肺、肾、瘤胃、十二指肠、淋巴、下丘脑、垂体、肌肉、睾丸等12个组织中均有表达，其中在睾丸中表达量最高，推测绵羊RARG基因可能参与机体繁殖机能的调控。     

ELISA法检测乙肝患者血清乙肝病毒前S1蛋白

目的:探讨检测乙型肝炎病毒前S1蛋白(Pre-S1)的临床意义。方法:本文用酶联免疫分析(enzymelinkedimmuno-adsorbedassay,ELISA)法对22例急性乙型肝炎患者及160例慢性乙型肝炎患者进行Pre-S1蛋白及HBV标志物检测,同时用荧光定量PCR法(fluorescencequantitativepolymemsechainreaction,FQ-PCR)检测HBV-DNA。结论:在急性乙型肝炎中,Pre-S1转阴,提示疾病的预后良好;Pre-S1蛋白和HBV-DNA相关较大,能反映HBV复制,有可能作为体内HBV复制的实验室指标。     

多聚酶链式反应

1985年以前进行遗传病的产前诊断一般都用羊膜穿刺术采取羊水中的胎儿脱落细胞,抽提它们的DNA,然后用分子杂交等方法进行检测,一次检测需要几天时间,而且胎儿至少四周,操作既复杂又较不安全,1985年美国Cetus公司人类遗传学实验室的科学家发明了一种