| 辣椒脉斑驳病毒侵染性克隆构建的简易方法 |
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| 引用本文： | 刘 健,赵霏霏,陈应娟,吴阳晨,朱 桐,席德慧,林宏辉.辣椒脉斑驳病毒侵染性克隆构建的简易方法[J].四川大学学报(自然科学版),2015,52(5):1151-1156. |
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| 作者姓名： | 刘 健 赵霏霏 陈应娟 吴阳晨 朱 桐 席德慧 林宏辉 |
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| 作者单位： | 四川大学生命科学学院;四川大学生命科学学院;四川大学生命科学学院;四川大学生命科学学院生物资源与生态环境教育部重点实验室;四川大学生命科学学院, 能源植物生物燃油制备及利用国家地方联合工程实验室;四川大学生命科学学院, 能源植物生物燃油制备及利用国家地方联合工程实验室;四川大学生命科学学院, 能源植物生物燃油制备及利用国家地方联合工程实验室 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(31171835, 31270290); 四川省应用基础项目(2012JY0078); 中央高校基本科研业务费(2011SCU04B34) |
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| 摘 要： | 本文介绍了一种构建辣椒脉斑驳病毒(Chilli veinal mottle virus , ChiVMV)侵染性克隆的简易方法. 基于辣椒脉斑驳病毒的全长确定序列, 根据基因内部的单一限制性酶切位点, 设计引物, 将ChiVMV分成KL1,KL2, KL3三个片段通过RT PCR和TA克隆的方法将3个片段构建到PMD19 T载体上. 通过双酶切将ChiVMV前面7000bp的片段构建到载体上, 从而将全部的ChiVMV cDNA分段构建到两个重组质粒中, 成功地避免了全长病毒序列在大肠杆菌中不稳定的现象. 进行体外转录时, 先通过PCR扩增出两个彼此有一定重叠的平末端片段, 再利用两个重叠片段为模板用重叠PCR的方法扩增出全长带T7启动子的ChiVMV cDNA, 并通过T7 RNA聚合酶成功转录出ChiVMV的病毒RNA.
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| 关 键 词： | 辣椒脉斑驳病毒 侵染性克隆 体外转录 重叠PCR |
| 收稿时间： | 2014/4/21 0:00:00 |
Simple methods for constructing infectiouscDNA clone of ChiVMV |
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| LIU Jian,ZHAO Fei Fei,CHEN Ying Juan,WU Yang Chen,ZHU Tong,XI De Hui and LIN Hong Hui.Simple methods for constructing infectiouscDNA clone of ChiVMV[J].Journal of Sichuan University (Natural Science Edition),2015,52(5):1151-1156. |
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| Authors: | LIU Jian ZHAO Fei Fei CHEN Ying Juan WU Yang Chen ZHU Tong XI De Hui and LIN Hong Hui |
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