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本文介绍了一种构建辣椒脉斑驳病毒(Chilli veinal mottle virus , ChiVMV)侵染性克隆的简易方法. 基于辣椒脉斑驳病毒的全长确定序列, 根据基因内部的单一限制性酶切位点, 设计引物, 将ChiVMV分成KL1,KL2, KL3三个片段通过RT PCR和TA克隆的方法将3个片段构建到PMD19 T载体上. 通过双酶切将ChiVMV前面7000bp的片段构建到载体上, 从而将全部的ChiVMV cDNA分段构建到两个重组质粒中, 成功地避免了全长病毒序列在大肠杆菌中不稳定的现象. 进行体外转录时, 先通过PCR扩增出两个彼此有一定重叠的平末端片段, 再利用两个重叠片段为模板用重叠PCR的方法扩增出全长带T7启动子的ChiVMV cDNA, 并通过T7 RNA聚合酶成功转录出ChiVMV的病毒RNA. 相似文献
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(一)引言乙二胺四乙酸简称EDTA. 作为一个絡合剂,有其独特的性質。一方面,生成的絡离子稳定度特别高,而且和所有的金屬几乎都能絡合。这是因为在EDTA絡合剂中既含有N又含有O,而且还形成五原子环螯合物。另一方面,它所形成的絡合物都是很簡單的,通常仅1:1的絡合物是重要的,因此在滴定中的計算亦极簡單。乙二胺四乙酸在水溶液中的解离常数,及其与二价金屬离子所生成螯合物的稳 相似文献
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