山羊ZP3基因的cDNA克隆、序列分析及组织表达研究

对高繁金堂黑山羊和低繁藏山羊ZP3基因cDNA进行克隆、序列分析,并采用Real-time PCR技术对其在发情前期母羊卵巢组织的表达进行研究.结果表明:山羊ZP3基因编码区全长为1269bp,共编码422个氨基酸,两品种间有2处碱基差异,但未导致氨基酸的差异.山羊的ZP3基因在卵巢表达量高,与其他组织差异极显著(P＜0.01),但两个品种间差异不显著(P＞0.05).说明ZP3基因主要在卵巢中表达,但可能不是影响山羊多羔性状的主基因.     

山羊INHA和INHBA基因的cDNA克隆、序列分析及组织表达研究

分别提取处于同一发情周期的5只低繁藏山羊和5只高繁金堂黑山羊的卵巢、垂体的总RNA,并通过RT-PCR技术对INHA、INHBA基因cDNA进行克隆、序列分析,以Real-time PCR技术对其进行组织表达研究.结果表明:藏山羊和金堂黑山羊INHA基因编码区均长1083bp,编码360个氨基酸,两品种基因编码区有7处碱基不同,并导致3处氨基酸的差异;INHBA基因编码区均长1278bp,编码425个氨基酸,两品种基因编码区有4处碱基不同,并导致1处氨基酸的差异.藏山羊INHA基因编码区核苷酸序列与金堂黑山羊、绵羊、牛、野猪、小鼠、褐家鼠、人的同源性分别为:99.4%、98.9%、95.8%、88.6%、81.0%、79.5%和84.8%;藏山羊INHBA基因编码区核苷酸序列与金堂黑山羊、绵羊、牛、野猪、小鼠、褐家鼠、人的同源性分别为:99.7%、99.4%、98.1%、91.7%、88.0%、88.5%和91.2%.INHA和INHBA基因mRNA在两个山羊品种的卵巢、垂体中均有表达,但两品种间无显著性差异(P0.05).说明INHA和INHBA基因在动物进化中比较保守,与山羊多羔性状的相关性有待进一步研究.     

川中黑山羊(金堂类群)和藏山羊PRLR基因cDNA克隆及序列分析

根据GenBank中绵羊的PRLR基因序列设计引物,以川中黑山羊(金堂类群)和藏山羊垂体总RNA为模板,通过RT-PCR技术对川中黑山羊(金堂类群)和藏山羊PRLR基因cDNA克隆及进行序列分析,以期为进一步研究该基因与山羊的繁殖性能奠定理论基础.结果表明:川中黑山羊(金堂类群)和藏山羊PRLR基因编码区均长1746bp,均编码581个氨基酸.川中黑山羊(金堂类群)PRLR基因编码区与藏山羊、绵羊、牛、牦牛野猪和人的同源性分别为99.71%、99%、95%、95%、83%和80%.以核苷酸序列构建分子系统进化树,川中黑山羊(金堂类群)先与藏山羊聚为一类,再与绵羊聚为一类,后与牛和牦牛聚为一类,然后与野猪聚为一类,最后与人聚为一类.     

山羊Apaf-3基因的cDNA克隆、序列分析及组织表达研究

对单胎藏山羊和多胎金堂黑山羊Apaf-3基因cDNA克隆、序列分析及组织表达特性研究.采集5只多胎金堂黑山羊和5只单胎藏山羊在发情期的卵巢、垂体等组织样,进行Apaf-3基因的cDNA克隆、序列分析,并采用定量PCR技术对其mRNA进行组织表达量研究.结果,克隆出山羊Apaf-3基因长度为1731bp编码区全长为1245bp,编码414个氨基酸.Apaf-3基因在两种山羊中序列相同,且在5种组织中的表达均无差异.同源性分析表明凋亡基因Apaf-3在动物的进化中保守性低,与山羊多羔性状的相关性需要进一步研究.     

成都麻羊MyoG基因的克隆与测序分析

根据猪MyoG基因的部分序列和绵羊MyoG mRNA设计引物,以成都麻羊、金堂黑山羊、白玉黑山羊和高原型藏山羊基因组为模板,应用PCR技术克隆测定MyoG基因序列．序列分析结果表明,成都麻羊MyoG基因长1957bp,由3个外显子和2个内含子组成,其中外显子Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的大小分别为398bp、82bp、122bp．内含子Ⅰ和内含子Ⅱ的大小分别为765bp和589bp．成都麻羊MyoG基因序列与金堂黑山羊、白玉黑山羊和高原型藏山羊的MyoG基因序列进行比对,同源性分别为99．9％、99．7％和99．3％,而它们氨基酸序列的同源性都为100％．这为进一步研究成都麻羊MyoG基因的表达、生物学活性和应用奠定了一定基础．     

乐至黑山羊的同期发情研究

乐至型川中黑山羊具有常年发情、产羔率高等优良繁殖特性,但是在极端气候条件下(炎热夏天和寒冷冬天)产的羔羊成活率低,因此,本研究拟建立同期发情率高、受胎率高和产羔率高的山羊同期发情方法以调整产羔季节.研究选取健康黑山羊63只,随机分为A、B、C三个组.在同一时间给每只羊放置CIDR阴道栓,处理13天后撤栓,同时注射PGF_(2α),然后注射不同剂量的PMSG:A组(n=20)不注射,B组(n=20)300IU,C组(n=23)500IU.母羊发情后用公羊自然交配;观测到母羊发情后,颈静脉采血制备血浆,用ELISA法测定血浆生殖激素(FSH、LH、E_2和P_4)浓度.结果发现,撤栓后72h内A、B、C三个组的发情率分别为80.0%、100.0%和82.6%,受胎率分别为68.8%、90.0%和78.9%,产羔率分别为190.9%、238.9%和206.7%.各组间生殖激素(FSH、LH、E_2和P_4)浓度差异不显著.综上所述,本试验优化出乐至黑山羊同期发情方法,即CIDR处理13天,撤栓后肌肉注射PGF_(2α)及300IU的PMSG.     

金堂黑山羊与白玉黑山羊生态特征的比较研究

采用生态地理比较方法研究金堂黑山羊与白玉黑山羊的生态特征,结果表明,金堂黑山羊与白玉黑山羊在生态地理条件、饲养管理、外貌特征和生长性能等方面存在较大的差异.金堂黑山羊的产肉性能高,繁殖性能好,是一个优良的地方肉用山羊品种.白玉黑山羊产绒性能较好.     

四川各地黑山羊品种(群体)的泌乳力与羔羊的生长发育

采用羔羊哺乳前、后体重差法,测定四川各地黑山羊品种(群体)哺乳母羊的产乳量,用常规方法测定乳的常规营养成分.结果表明,产乳量(kg)范围为23.28±0.71～101.67±4.93,以金堂黑山羊(101.67±4.93)和乐至黑山羊(85.76±3.36)最高,营山黑山羊(23.28±0.71)、建昌黑山羊(36.60±2.65)和嘉陵黑山羊(40.11±1.02)最低,江安黑山羊(62.15±3.25)和自贡黑山羊(54.32±6.64)居中,金堂黑山羊和乐至黑山羊产乳量比较差异不显著(P>0.05),两者与其他品种(群体)比较,差异均极显著(P<0.01).在乳的常规营养成分中,乳蛋白含量(g/L)范围41.36～46.37,以金堂黑山羊(46.37)最高,营山黑山羊(41.36)最低,差异显著(P<0.05);乳糖含量(g/L)范围为44.00～47.30,以金堂黑山羊(47.30)最高,建昌黑山羊(44.00)最低,差异不显著(P>0.05);乳脂含量(g/L)范围为55.45～60.52,以自贡黑山羊(60.52)最高,白玉黑山羊(55.45)最低,差异显著(P<0.01).羔羊哺乳期公母平均日增重(g)范围73.50～174.42,以乐至黑山羊(174.42)和金堂黑山羊(167.75)最高,建昌黑山羊(73.50)、嘉陵黑山羊(94.59)和营山黑山羊(96.00)最低,自贡黑山羊(149.59)和江安黑山羊(127.67)居中.     

成都麻羊与四川肉用黑山羊地方品种产乳性能研究

测定成都麻羊和四川肉用黑山羊地方品种羔羊哺乳期母羊的产乳量、乳常规营养成分、乳蛋白组分和乳酪蛋白遗传多态性.结果表明,母羊哺乳期的产乳量(kg)成都麻羊、金堂黑山羊、乐至黑山羊、自贡黑山羊和建昌黑山羊相应分别为46.15±1.78,101.67±4.93,85.76±3.36,54.32±6.64和36.65±2.65,成都麻羊极显著低于金堂黑山羊、乐至黑山羊(P<0.01),而极显著高于建昌黑山羊P<0.01)与自贡黑山羊差异不显著(P>0.05);乳中常规营养成分含量(g/L)均较高,范围乳脂为58.59～60.52、乳蛋白为44.18～46.37和乳糖为44.00～47.30;经产母羊常乳主要蛋白组分的相对含量(%)范围α-La为5.35～5.80,β-Lg为14.46～15.18,CN为70.04～71.01,IgG为7.04～7.31,SA为2.02～2.15,品种间差异不显著(P>0.05);酪蛋白电泳染色显示出α-CN和β-CN图带,α-CN均呈现4种不同的带型αS1-CN(H),αS1-CN(L)、αS2-CN(CC)型和αS2CN(CD),其中均以αS2-CN(CD)占优势.β-CN呈现单态,带型为β-CN(AB).     

成都麻羊与7个山羊品种(群体)的AFLP遗传多样性研究

采用AFLP（Amplified Fragment Length Polymorphism AFLP）标记,研究成都麻羊与金堂黑山羊、乐至黑山羊、合江黑山羊、江安黑山羊、营山黑山羊、嘉陵黑山羊和白玉黑山羊等8个山羊品种（群体）,共261只个体的遗传多样性．结果表明,选用8对引物组合共获得174个标记,其中80个为多态性标记,标记多态频率为16．55％～38．62％,平均每对引物获得21．75条带．根据AFLP分析结果,用Shannon多样性指数公式计算获得,供试8个山羊品种（群体）的遗传多样性指数在0．0888～0．2289之间．其中营山黑山羊的遗传多样性指数最大（0．2289）,嘉陵黑山羊次之（0．2119）．白玉黑山羊最小（0．0888）、其余山羊品种（群体）介于其间．用Rogers遗传距离公式分析获得8个山羊品种（群体）间的遗传距离（DR）。根据DR值,采用Mega3．0软件以UPGMA法构建遗传系统树状图,聚类结果聚为三个大类,营山黑山羊和嘉陵黑山羊聚为一类,合江黑山羊和江安黑山羊为一类,这两类聚为一大类;成都麻羊和金堂黑山羊聚为一类后。再与乐至黑山羊聚为一大类;这两大类相聚后,再与单独为一大类的白玉黑山羊聚在一起．聚类结果与品种（群体）来源和生态地理分布相一致．AFLP标记很好的反映供试山羊品种（群体）的遗传差异和亲缘关系,是研究山羊遗传多样性一种理想的分子标记．     

山谷型藏山羊建昌黑山羊安哥拉山羊乳生化遗传标记研究

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳法（ＰＡＧＥ）分析山谷型藏山羊、建昌黑山羊、安哥拉山羊乳中的ＬＤＨ、ａｓ－ＣＮ、β－ＣＮ、β－ｌｇ、ＳＡ等基因座,结果表明,三品种的ＬＤＨ、ａｓ－ＣＮ、β－ＣＮ、β－ｌｇ有多态,ＳＡ无多态．其中乳ＬＤＨ为１～３条带,有Ａ、Ｂ、Ｃ三种表型．ａｓ－ＣＮ有ＡＡ、ＡＢ、ＢＢ三种表型,由Ａ基因和Ｂ基因控制．β－ＣＮ和β－ｌｇ多为杂合的ＡＢ型,其它的电泳表型极少．乳ＳＡ为单态,定为ＡＡ型．运用乳蛋白基因座计算三个品种的基因杂合度,表明山谷型藏山羊及建昌黑山羊乳蛋白基因座的杂合度大于安哥拉山羊．计算三品种的遗传相似系数及遗传距离,表明山谷型藏山羊与建昌黑山羊的遗传距离较小,亲缘关系较近．安哥拉山羊与山谷型藏山羊及建昌黑山羊的遗传距离较大,亲缘关系远．     

成都麻羊与四川9个黑山羊品种(群体)乳的生化组成及酪蛋白多态性研究

采用常规方法测定成都麻羊和四川9个黑山羊品种(群体)乳常规营养成分含量;以垂直板电泳经考马斯亮蓝染色分析乳蛋白组成;用碱性尿素电泳法分析酪蛋白多态性.结果表明,成都麻羊乳常规营养成分含量(g/L):乳蛋白为45.77±2.24、乳糖为44.00±3.20、乳脂肪为59.50±3.30.成都麻羊和四川9个黑山羊品种(群体)乳蛋白含量(g/L)范围为41.36～46.37,以营山黑山羊最低(41.36),金堂黑山羊最高(46.37),差异极显著(P<0.01);乳糖含量(g/L)范围为44.00～47.30,以成都麻羊最低(44.00),金堂黑山羊最高(47.30),差异极显著(P<0.01);乳脂含量(g/L)范围为55.45～60.52,以白玉黑山羊最低(55.45),自贡黑山羊最高(60.52),差异极显著(P<0.01).成都麻羊乳蛋白组分含量(%):α-La为5.80±0.61,β-Lg为14.77±0.26,CN为70.04±2.55,IgG为7.31±0.83,SA为2.08±0.23.成都麻羊与四川9个黑山羊品种(群体)乳蛋白组分含量(%)范围:α-La为5.35～5.96,β-Lg为14.46～15.87,CN为68.42～71.01,IgG为7.04～7.34,SA为2.02～2.40.在供试山羊品种(群体)中β-CN呈单态,带型为β-CN(AB);α-CN均呈现:αS1-CN(H),αS1-CN(L)、αS2-CN(CC)和αS2-CN(CD),在建昌黑山羊和白玉黑山羊中,还存在αS2-CN(DD).对αS2-CN遗传多态型与乳常规营养成分含量进行多重比较发现,在建昌黑山羊和白玉黑山羊中,αS2-CN(CC)型和αS2-CN(CD)型乳脂含量显著高于αS2-CN(DD)型的乳脂含量(P<0.05).     

FSH受体抑制剂对卵巢发育及FSHR和ERβ表达水平研究

目的:研究卵泡雌激素(FSH)受体结合抑制剂(FRBI)对卵巢组织中FSH受体(FSHR)和雌激素受体β(ERβ)基因和蛋白表达水平的作用,并探究FRBI是否通过调控FSHR和ERβ的表达来抑制卵巢癌的发生.方法:将180只雌性小鼠随机分为对照组(CG)、FSH组和实验组.实验组又分为4个小组(n=30),分别注射不同浓度的FRBI(10 mg/kg至40 mg/kg),测定卵巢皮质厚度(OCT)、次级卵泡的最大横径(MTD)、FSHR mRNA的表达水平和血清雌二醇(E2)浓度.结果:FRBI可以减少OCT和卵泡数量.较高剂量的FRBI(30 mg/kg～40 mg/kg)可抑制卵巢和卵泡发育,降低卵巢内ERβ和FSHR mRNA蛋白的表达水平,并减少E2产生.结论:FRBI可下调卵巢组织FSHR和ERβ表达水平.     

乏情期新疆哈萨克绵羊血清中P_4、E_2、FSH和LH生殖激素变化规律分析

采用酶联免疫法(ELISA)测定孕酮(P4)、雌激素(E2)、促卵泡素(LH)和促黄体素(FSH)浓度,研究新疆哈萨克绵羊乏情期发情及不发情绵羊体内激素变化。结果表明:乏情期发情绵羊P4的含量显著低于不发情绵羊(P0.05),发情绵羊E2、LH和FSH的含量显著高于不发情绵羊(P0.05),且P4浓度变化趋势可以作为乏情期绵羊发情鉴定的手段。结果表明:乏情期发情绵羊P4的含量显著低于不发情绵羊(P0.05),发情绵羊E2、LH和FSH的含量显著高于不发情绵羊(P0.05),且P4浓度变化趋势可以作为乏情期绵羊发情鉴定的手段。     

湘西4月龄山羊羔羊生长性能的品种差异

测定4月龄波尔山羊、南江黄羊、波尔山羊×南江黄羊F1代羔羊在当地饲养水平下的采食量和日增重差异.结果表明：3个品种羔羊的每周和全期青饲料日干物质采食量差异不显著（P>0.05）;而在正式试验期第1周南江黄羊平均日增重显著高于波尔山羊×南江黄羊F1代（P<0.05）,在第2周南江黄羊平均日增重却显著低于波尔山羊×南江黄羊F1代（P<0.05）;在第3周3个品种平均日增重水平差异不显著（P>0.05）,全期各品种平均日增重差异也不显著（P>0.05）.说明在湘西当地饲养水平下,三品种山羊羔羊的生长性能相近,波尔山羊的杂交优势不显著.     

成都麻羊与四川各地黑山羊品种(群体)mtDNA D-1oop序列多态性研究

采用mtDNA多态性标记对成都麻羊与四川各地黑山羊品种(群体)D-loop序列多态性进行分析.结果表明,供试山羊品种(群体)mtDNA片段长度为16kb左右,mtDNA D-loop片段长度为1210～1212bp,共检测到10种单倍型,群体间共有多态座位83个,单一多态座位23个,简约信息座位24个,平均核苷酸歧异度为0.001510,D-loop序列多态性较贫乏.经聚类,成都麻羊与四川各地黑山羊品种(群体)分为两大类,成都麻羊首先与金堂黑山羊(D=0.203)聚在一起后,再依次与乐至黑山羊(D=0.223)、建昌黑山羊(D=0.477)、白玉黑山羊(D=0.593)形成一大类;合江黑山羊与江安黑山羊(D=0.231)先聚在一起后,再与自贡黑山羊(D=0.337)聚为1类,营山黑山羊与嘉陵黑山羊(D=0.242)聚为1类,2类形成另一大类.最后两个大类聚在一起.聚类结果与供试山羊品种(群体)来源和生态地理分布相一致.     

藏绵羊脂肪酸结合蛋白(H-FABP)基因的克隆及序列分析

利用RT-PCR、T-A克隆技术获得了藏绵羊H-FABP基因, 并对克隆序列进行分析. 结果显示, 藏绵羊H-FABP编码基因全长402bp, 编码133个氨基酸. 将藏绵羊H-FABP基因及氨基酸序列分别与Gene Bank中公布的山羊、水牛、家牛、野牦牛、猪、马、狗7种动物进行序列一致率比对, 结果显示, 藏绵羊与所选的7种动物的H-FABP基因序列一致率在90.8%～99.5%之间, H-FABP氨基酸序列一致率在93.2%～100%之间. 其中, 藏绵羊与藏山羊H-FABP基因存在2个位点核苷酸差异:114位碱基位点A→G和第129位碱基位点T→C, 但两个位点的核苷酸差异均为同义密码子, 藏绵羊与山羊H-FABP氨基酸无差异.     

奶牛生殖激素浓度与胎次的相关性研究

为探讨奶牛血液生殖激素浓度随不同胎次的变化规律及相关性和回归关系,用ELISA法测定了48头奶牛促卵泡激素(FSH)、促黄体激素(LH)、绒毛膜促性腺激素(β-HCG)、睾酮(T)、孕酮(P)和雌二醇(E2)的浓度,分析了激素浓度胎次间的相关关系和回归方程.结果表明,HCG浓度以第0、1胎为最高和最低(p<0.05);P、LH和E2浓度均以第三胎最高,各胎次P浓度差异极显著(p<0.01),第3胎与第1、2胎E2浓度差异显著(p<0.05).各胎次间FSH和T浓度差异不显著(p>0.05);胎次与六种激素以及各激素间的相关性均很小,胎次与孕酮(P)和促卵泡激素(FSH)呈负相关,FSH与LH、T和E2为负相关,LH与E2间的相关性具有显著性(p<0.05);六种激素与胎次回归方程的截距A和回归系数均不相同.     

FSHβ和ITGB1基因多态性与母猪繁殖性状的关联性分析

为探讨FSHβ和ITGB1基因多态性与母猪繁殖性状的相关性,本研究采用PCR-RFLP技术对939头大白猪群体中进行FSHβ和ITGB1基因的多态性检测,并对不同胎次不同基因型的总产仔数、产活仔数、健仔数、木乃伊数、死胎数、窝重等繁殖性状进行关联性分析。结果显示:在试验大白猪群体中,FSHβ和ITGB1均具有中度多态性,FSHβ基因型频率为ABBBAA,优势基因为B等位基因。ITGB1基因型频率在大白猪中为CTCCTT,优势基因为C基因。FSHβ基因在头胎的死胎性状上AB基因型显著低于BB型0.15头/胎(P0.05),而在窝重性状上AB基因型显著高于BB基因型0.69kg/胎(P0.05),在其他胎次中各繁殖性状在不同基因型间差异不显著(P0.05)。ITGB1基因在头胎的死胎性状中TT基因型显著低于CC型,在二胎的窝重性状上CC型显著高于CT和TT型,分别高出0.88和0.97 kg/胎(P0.05);在三胎健仔数和窝重性状中CC型均显著高于CT型(P0.05),由此可见CC基因型为ITGB1在繁殖性状中的优势基因型。合并基因型分析结果发现:头胎的大白猪FSHβ-ITGB1合并基因型中最优分子标记组合为AATT,经产二胎、三胎次大白猪繁殖性状FSHβ-ITGB1最优分子标记组合为BBCC。     

乐至黑山羊催乳素受体基因cDNA克隆及序列分析

根据GenBank中绵羊催乳素受体（PRLR）基因序列（AF041257.1）设计1对引物,以乐至黑山羊脑垂体总RNA为模板,通过RT-PCR技术对乐至黑山羊PRLR基因cDNA克隆测序和序列分析.结果表明：扩增出的乐至黑山羊PRLR基因cDNA序列长为1743bp,编码581个氨基酸.乐至黑山羊与绵羊、牦牛、欧洲牛、野猪和人的核苷酸同源性分别为：98.34％、94.67％、94.27％、77.48％、74.33％.以核苷酸序列构建分子进化树,乐至黑山羊先与绵羊聚为一类,再与欧洲牛和牦牛聚为一类,而后与野猪聚为一类,最后与人聚为一类.