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寡聚脱氧核苷酸介导的体外多点定位突变:五点定位突变法… 总被引:1,自引:0,他引:1
用5个化学合成的寡聚脱氧核苷酸片段作为诱变引物。对枯草杆菌蛋白酶E基因同时进行体外诱变,转化了经打点杂交及温度梯度洗膜法筛选出了若干在5个预定位点同时突变了的突变子,其突变效率达到50%。同时还得到了1个四点突变的突变子。突变子经DNA测量测序分析,充分肯定了突变的可靠性。 相似文献
54.
克隆到脂肪芽孢杆菌Bacillus stearothermophilus中的对硝基酚磷酸酶(p-nitrophenylphosphatase,pNPPase)基因,将其编码区eDNA连接到pQE30表达载体中,在E.coli M15中经IPTG诱导得到高效表达.用Ni-NTA Superflow层析柱对表达产物进行了分离纯化,初步测定了pNPPase的酶学性质.发现它的反应最适pH是10.0,最适反应温度是55℃,热稳定性Tm值为52℃,Mg^2 、Mn^2 和Co^2 对pNPPase的活性有一定的促进作用,而Zn^2 和Ni^2 对pNPPase没有影响.纯化后其比活为120U/mg. 相似文献
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人神经节苷脂诱导分化相关蛋白cDNA的克隆、染色体定位和初步功能研究 总被引:1,自引:1,他引:0
通过构建,筛选人18周胎脑cDNA文库,克隆到一条与神经节苷脂诱导分化相关蛋白高度同源的新基因,经HUGO/GDB人类基因命名委员会的同意命名为GDAP1L1,进行新基因的全序列测定,RH定位分析,Blast分析及生物学信息分析,Northern杂交提示GDAP1L1基因在胎脑中高度表达,但在成人脑组织中低表达,新的神经节甙脂诱导分化相关蛋白的表达和功能研究初步提示:全长新神经节苷脂诱导分化相关基因核苷酸序列长1163bp,RH定位分析新基因定位在染色体20q12区,BLASTN,BLASTP,TBLASTN分析新基因的蛋白质序列与人和鼠“神经节甘脂诱导分化相关蛋白1”有58%的同源性,而与人的另一条“类似神经节苷脂诱导分化相关蛋白1”的部分蛋白序列(47-253aa)的同源性达100%,新基因蛋白在3,5端分别多出46aa和114aa的长度,生物学住处分析证实神经节苷脂诱导分化相关基因与神经营养与细胞凋亡有密切关系,全长新神经节苷脂诱导分化相关基因是一个神经营养与发育及细胞周期调控,信号传导有关的基因,可能在肿瘤的发生中具有重要作用,其功能的进一步研究将为肿瘤机理的阐明提供思路。 相似文献
60.
从人的胎脑cDNA文库中,克隆到一条全新的人类羧肽酶A抑制物基因,此cDNA序列全长1049bp,包括翻译起始位点附近的Kozak序列,669bp 的开放读框以及3端的加尾信号,共编码222个氨基酸,它编码的蛋白与小鼠Latexin蛋白和大鼠Latexin蛋白分别有高达85%和84%的同源性,因此命名为人类LATEXIN基因,应用辐射杂交方法,将该基因伫位在人3号染色体3q24区段,位于分子标记D3S1605和D3S1553之间,采用基因芯片杂交的方法研究其在某些组织或细胞中的表达情况,发现在前列腺癌中表达量较高。 相似文献