花生分离蛋白复合酶水解工艺优化研究

探讨了超声波辅助前处理对花生分离蛋白复合酶解的影响,比较了碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶、中性蛋白酶、风味蛋白酶等六种蛋白酶解物清除DPPH自由基的效果,确定碱性蛋白酶和胰蛋白酶较佳的复合比例为8∶2.在此基础上,开展响应面优化试验,以DPPH自由基清除率和水解度为指标,探讨复合酶与风味蛋白酶酶解的较佳工艺参数,并分析DPPH清除率和水解度相关性.实验结果表明,复合蛋白酶制备花生分离蛋白抗氧化肽的较佳酶解工艺为pH 8.5,温度49.36℃,酶添加量(E/S,质量分数m/m)3.40%,酶解时间203.59 min.     

乳清蛋白肽的酶法制备、分离纯化及活性评价

以抗氧化活性及蛋白质回收率为筛选指标对乳清蛋白肽酶解工艺进行优化,用层析柱对酶解液进行逐级分离纯化,并对其分子质量进行检测.研究结果表明:利用胰酶、复合风味蛋白酶、木瓜蛋白酶和碱性蛋白酶酶解制备乳清蛋白肽,最佳用酶为碱性蛋白酶、最适底物含量为4.0%、最适加酶量为8000U/g、最佳酶解时间为4h;酶解液经DEAE-52纤维素层析后得到的A组分抗氧化活性最好,其还原力为0.320 0±0.004 1,DPPH自由基清除率为6.58%±0.36%;A组分再经Sephadex G-15葡聚糖凝胶层析柱分离纯化后得到组分G,其DPPH自由基清除率为6.73%±0.083%;组分G的主要成分为分子质量378 u的肽段,其一级氨基酸组成为赖氨酸(Lys)、亮氨酸(Leu)及丝氨酸(Ser).     

紫苏籽抗氧化肽的制备工艺研究

采用碱提酸沉法从紫苏籽粕中提取蛋白质,进行蛋白酶筛选,发现紫苏籽蛋白经碱性蛋白酶酶解后有最好的抗氧化活性和水解度(DH).在单因素试验的基础上,采取响应面分析方法,并建立数学模型,确定最佳酶解工艺.试验结果表明:各因素影响紫苏籽粗蛋白酶解液DPPH自由基清除率的主次顺序是:加酶量酶解时间pH值,最佳条件是:加酶量3 000 U·g~(-1),酶解时间5.00 h,pH值9.80,温度50℃,此时DPPH自由基清除率为73.64%,说明紫苏籽蛋白质酶解多肽拥有很高的抗氧化活性.     

鲷鱼鳞多肽的酶法制备及抗氧化活性研究

以鲷鱼鳞为原料,经物理方式处理后,采用单因素实验考察液料比、pH值、温度、酶底比及酶解时间对鲷鱼鳞酶解液水解度和DPPH自由基清除率的影响.结合响应面优化设计对酶解条件进行优化,结果在液料比为28∶1、酶底比7.0%、pH值7.3、50℃、酶解6 h条件下,所得酶解液水解度为10.35%,DPPH自由基清除率为82.33%.DPPH自由基清除、羟基自由基清除、还原力、金属螯合测试表明,酶解产物的抗氧化活性与浓度呈现剂量依赖性,具有抗氧化活性.分子量测定及氨基酸组成分析表明,酶解产物含有大量的寡肽,相对分子质量分布区间为180~1 000 u,其富含甘氨酸、丙氨酸、羟脯氨酸,且含有多种人体必需的氨基酸.     

复合酶法水解花生粕制备抗氧化肽的工艺优化

以DPPH自由基清除率和收率为响应值,采用响应面法对复合酶法水解花生粕生产抗氧化性肽工艺条件进行了优化.研究结果表明,碱性蛋白酶和中性蛋白酶对花生粕具有较强的水解能力,二者以2∶1的比例对花生粕水解时,较优水解条件是50℃,pH值8.54,底物质量分数8.34%.在此条件下酶解16 h,花生肽收率为65.80%,在花生肽质量浓度为0.55 mg/mL时,对DPPH自由基清除率为25.77%,与优化前相比,复合酶比碱性蛋白酶单酶水解时收率和DPPH自由基清除率分别提高了7.48%和7.66%,比中性蛋白酶单酶水解时分别提高了10.29%和22.53%.     

文蛤蛋白水解制备抗氧化活性肽的研究

以文蛤蛋白为原料,通过蛋白酶水解制备抗氧化活性肽.利用体外清除DPPH活性评价酶解产物的抗氧化活性,采用超滤、葡聚糖凝胶柱层析和HPLC对相应的活性肽进行分离纯化,通过HPLC-MS进行结构鉴定.结果表明:木瓜蛋白酶水解产物的DPPH清除活性明显高于碱性蛋白酶、风味蛋白酶、中性蛋白酶和复合蛋白酶,产物质量浓度为1 mg·mL-1时,DPPH清除率为55.74%;以DPPH清除率为筛选指标,对木瓜蛋白酶酶解产物进行逐级分离,得到4个具有抗氧化活性的目的肽段,氨基酸序列分别为LNFNLEKSR(1120.3 u)、SWLRPR(814.4 u)、RIGNIISQY(1063.3 u)和LNFNLEK(877.2 u).     

蚕蛹抗氧化肽的制备及其体外抗氧化活性评价

为更客观地评价蚕蛹抗氧化肽的抗氧化能力, 以人工胃肠模拟液对不同蛋白酶酶解物的抗氧化能力进行评价, 优选获得最佳的制备用酶——碱性蛋白酶. 在此基础上,以蚕蛹抗氧化肽总还原能力为指标, 利用响应曲面法(response surface method, RSM)优化碱性蛋白酶制备蚕蛹抗氧化肽的最佳酶解工艺. 结果表明: 碱性蛋白酶的最佳酶解条件为pH=8.30, 加酶量为15.34 μL(1 902 U), 温度为50.47 ℃, 时间为2.45 h; 在此条件下优化预测得到的2 mg 蚕蛹蛋白/mL 酶解液的总还原能力为0.434, 蚕蛹抗氧化肽对·OH 和DPPH· 自由基的半数清除率IC50 分别为4.51 与4.24 mg/mL.     

碱性蛋白酶水解螺旋藻制备抗氧化活性肽的工艺优化

为了提高螺旋藻肽的抗氧化能力与收率,采用单因素实验和响应面法对碱性蛋白酶水解螺旋藻粉制备抗氧化活性肽的工艺条件进行优化。实验结果表明,与木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、风味蛋白酶相比,碱性蛋白酶对螺旋藻粉的水解能力最强,其最适水解条件为55.46℃、pH值为 6.71、固(g)液(mL)比为1∶10.83。在此条件下,酶解240min,螺旋藻肽的收率为58.50%,与优化前相比,提高了15.61%。所制备的螺旋藻肽具有较强的抗氧化能力,在质量浓度为0.86g/L时,其DPPH·清除能力为77.60%,与优化前相比,提高了7.62%。     

薏米及其蛋白酶解物的抗氧化性能

采用碱提酸沉方法制备薏米蛋白,测定DPPH自由基清除率,检测产物的抗氧化活性.薏米蛋白的干燥方式以采用冷冻干燥和30℃普通低温干燥可以保持较高的抗氧化活性.复合蛋白酶获得的酶解物抗氧化活性较高,其次为中性蛋白酶及碱性蛋白酶.薏米蛋白酶解产物的抗氧化能力远大于薏米,并随着薏米活性肽质量分数的增加,其抗氧化能力也随之增强....     

罗非鱼鱼鳞胶原多肽的优化制备及其生物活性研究

以罗非鱼鱼鳞为原料,采用碱性蛋白酶和胰蛋白酶复合水解,在单因素试验的基础上,采用响应面法优化酶解工艺,制备鱼鳞胶原多肽.测定胶原多肽的抗氧化活性、细菌低温保护活性、氨基酸组成及相对分子质量分布.结果显示,最适酶解条件为:底物质量浓度30.6 mg·m L-1、胰蛋白酶和碱性蛋白的加酶量分别为1.44和0.70 mg·m L-1、酶解温度50℃、pH值8.5、酶解时间6.35 h.酶解胶原多肽对DPPH自由基和羟基自由基的半数清除质量浓度(IC50)分别为2.89和3.54 mg·m L-1.经过细菌低温保护试验,当胶原多肽质量浓度为1 mg·m L-1时,嗜热链球菌的存活率达到75.6%.鱼鳞胶原肽相对分子质量分布显示,78%多肽片段的相对分子质量分布于180~2 000 u之间.氨基酸组成分析显示鱼鳞多肽富含甘氨酸、丙氨酸、脯氨酸、羟脯氨酸及天冬氨酸等,这些特定的氨基酸与胶原多肽的抗氧化活性、细菌低温保护活性相关.     

鲭鱼罐头蒸煮液蛋白酶解产物的生物活性分析

以鲭鱼罐头蒸煮液为原料,采用生物酶解方法制备活性肽,以实现鱼罐头加工废弃液的高值化利用.研究结果表明,采用复合酶(碱性蛋白酶和胰蛋白酶)分段酶解,得到相对分子质量MW1 ku的组分占50%,高于碱性蛋白酶(30%)和胰蛋白酶(28%)单酶水解效果.进一步采用超滤方法分离酶解产物,得到不同相对分子质量范围的3个组分,其中MW1 ku的P1组分的抗氧化活性和ACE抑制效果最好.     

鲍鱼性腺小肽的制备及抗氧化活性的初步研究

以雄性皱纹盘鲍性腺为原料,建立了蛋白酶酶解制备抗氧化活性蛋白肽的工艺条件.分别对木瓜蛋白酶和中性蛋白酶进行单因素研究,并以二者的复合酶为工具酶进行响应面分析.结果显示,雄性鲍鱼性腺的最优酶解条件为木瓜蛋白酶与中性蛋白酶的比例为1∶4、pH=6.6、酶解温度为53.7℃、酶解时间为70.4 min.高效液相色谱(HPLC)分析结果表明,酶解液中多肽的分子质量主要分布在1 ku以下.制备的酶解液具有较强的清除自由基效果,清除1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)的EC50值为6.8 mg/mL,还原力的AC0.5值为12.87 mg/mL.     

酶解法制备鱿鱼蛋白抗氧化肽工艺优化

以酶解液的还原力为抗氧化性指标,测定木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、风味蛋白酶、碱性蛋白酶、酸性蛋白酶、中性蛋白酶、胃蛋白酶7种蛋白酶的鱿鱼蛋白酶解液抗氧化性.实验结果表明7种蛋白酶在相同加入酶量(酶活力U/底物g)条件下,中性蛋白酶在酶解1 h、3 h、5 h所得的酶解液还原力均最高.以中性蛋白酶为实验用酶,进行三因素二次正交旋转组合实验优化出酶解法制备鱿鱼蛋白抗氧化肽的最佳酶解条件为酶加入量4 841 U/g、pH 5.3、酶解时间1.3 h.所得酶解液定性检测结果为具有抗氧化性的肽类混合物,有进一步开发应用价值.     

超声波辅助酶解制备东海海参胶原蛋白低聚肽及其活性的研究

以东海海参胶原蛋白为原料,采用超声波辅助酶解制备低聚肽(分子量小于1 kDa),并对其抗氧化性进行了研究。研究结果表明,超声波辅助对胃蛋白酶、胰蛋白酶、中性蛋白酶和木瓜蛋白酶酶解东海海参胶原蛋白均有显著促进效果,低聚肽含量和收率均有大幅提高。当超声波功率为100 W时,中性蛋白酶酶解的低聚肽含量最高,达70.5%。采用单因素试验,对超声波辅助下中性蛋白酶酶解工艺进行优化,确定最佳酶解工艺为:超声波功率100 W,酶解温度60℃,酶解pH 7.0,酶添加量5%(w/w),酶解时间20 min。在最佳工艺条件下,低聚肽含量和收率最大达75.4%和52.9%。抗氧化试验表明,该低聚肽对DPPH和ABTS清除的效果均随低聚肽浓度的增加而增强。该低聚肽对ABTS的清除快速高效,对DPPH的清除则随着处理时间的延长而缓慢增加。当低聚肽浓度为8 mg/mL,处理时间为30 min时,DPPH和ABTS的清除率分别为19.0%和87.2%。     

基于蛋清抗氧化肽增效因子的优化研究

以DPPH自由基清除率为评价指标,考察了单独添加NaCl、糖类、柠檬酸以及两两或三者合用时对蛋清抗氧化肽活性的影响,并在此基础上运用响应面分析法,优化出增效剂最佳组合。结果表明,NaCl、麦芽糖及柠檬酸均能显著提高蛋清抗氧化肽的活性（P<0.05）,可作为蛋清抗氧化肽的抗氧化增效剂单剂,三者合用时增效效果最佳,最佳组合为1.4%NaCl+3.0%麦芽糖+2.4%柠檬酸,在此条件下蛋清抗氧化肽对DPPH自由基的IC50值为0.27mg/ml,增效比SR可达3.96。     

抗氧化香茅草水提液浸提工艺的优化

优化抗氧化香茅草水提液浸提的工艺.以新鲜香茅草为材料,以香茅草添加量、浸提时间、浸提温度为因素,通过考查DPPH自由基清除率、铁离子螯合、羟基自由基清除率,评价香茅草水提液的抗氧化活性.在香茅草添加量、浸提时间、浸提温度为单因素的基础上,通过响应面Box-Behnken模型,以羟基自由基清除率为指标对浸提工艺参数进行优化.最终确定抗氧化香茅草水提液浸提工艺参数,即香茅草的添加量为6.9%,浸提时间为3.6 h,浸提温度为54℃.在该条件下,羟基自由基的清除率为(99.21±4.50)%,与预测值接近.该优化工艺简单易行,天然安全,可为香茅草水提液的理论研究提供参考.     

酶解时间对罗非鱼鱼皮胶原蛋白酶解物抗氧化活性的影响

为了探究酶解时间对罗非鱼鱼皮胶原蛋白酶解物抗氧化活性的影响,采用酸法提取罗非鱼鱼皮胶原蛋白,胃蛋白酶酶解3、6、9、12和24 h制备酶解物,进行紫外光谱扫描,水解度测定,以DPPH·、·OH和O2?·清除率为指标评价抗氧化活性.结果表明:最大紫外吸收峰相似,水解度与酶解时间呈正相关;9 h酶解物对三种自由基清除效果最好;罗非鱼鱼皮胶原蛋白酶解物抗氧化活性与酶解时间有关,为罗非鱼鱼皮进一步加工利用提供理论依据.     

尖吻蝮蛇毒不同蛋白酶水解物的制备及抗氧化活性研究

【目的】研究尖吻蝮(Deinagkistrodon acutus)蛇毒的不同蛋白酶水解产物的制备及抗氧化活性。【方法】分别用碱性蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶和胰蛋白酶水解尖吻蝮蛇毒,以水解物的水解度、清除自由基活性、金属离子螯合能力和总还原力作为抗氧化活性比较指标来选出最佳水解蛋白酶,并比较该蛋白酶水解物在超滤后得到的不同分子量组分的抗氧化活性大小。【结果】碱性蛋白酶水解物的清除DPPH自由基活性、亚铁离子螯合能力和总还原力均为最佳;该酶解物经超滤得到的3个组分中,分子量为3～10kDa的组分对DPPH自由基和羟基自由基清除能力最强,分子量大于10kDa的组分的亚铁离子螯合能力和总还原力最强。【结论】尖吻蝮蛇毒的不同蛋白酶水解物均具有抗氧化活性,其中用碱性蛋白酶水解物抗氧化活性较强。     

酶解制备牦牛乳酪蛋白降血压肽的初步研究

目的:牦牛乳富含酪蛋白,其经酶解制备的降血压肽以安全性高、无副作用等优点已成为乳品开发和高血压防治药物研究的新热点.方法:本实验对从牦牛乳中提取的酪蛋白,依据复合蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶及胰蛋白酶各自的最适pH及温度采用酶解方法制备降血压肽,并且以ACE抑制活性为指标初步筛选最佳水解酶.结果:五种酶ACE抑制肽抑制率分别为:复合蛋白酶为39.02%,中性蛋白酶为67.48%,碱性蛋白酶为56.10%,木瓜蛋白酶为71.54%,胰蛋白酶为8.94%.结论:说明,在最适pH及温度条件下,木瓜蛋白酶和中性蛋白酶为制备降血压肽的最佳酶选,这为后续进一步的制备降血压肽实验提供依据.     

酶解鲭鱼罐头蒸煮液制备生物活性肽

以鲭鱼罐头蒸煮液为研究对象,从风味蛋白酶、中性蛋白酶和木瓜蛋白酶中筛得最佳酶为风味蛋白酶,通过单因素实验和正交试验确定风味蛋白酶的最佳酶解工艺为:5 g底物(即5 m L蒸煮液)、加酶量28.6 mg/m L、时间5 h、p H值6.0、温度50℃.按最佳工艺条件酶解,并经小分子电泳分析,证明蒸煮液主要蛋白被风味蛋白酶高效酶解;所得生物活性肽酶解液具有较好的抗氧化活性,其DPPH自由基清除活性的IC50值为31.35 mg/m L;羟自由基清除活性的IC50值为9.807 mg/m L;还原力的IC50值为7.019 mg/m L.