抗甲胎蛋白单克隆抗体的研制及其在免疫组化中的应用

以高纯AFP为抗原,免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞和小鼠SP2/0 Ag14骨髓瘤细胞融 合,经2次亚克隆,建立5株稳定分泌抗AFP特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株。应用经纯化 的该单克隆抗体进行了原发性肝癌组织切片的免疫组织化学实验,结果显示全部5种抗AFP单 克隆抗体对肝癌亚细胞组分均呈现特异性结合。表明已筛选出适于制作甲胎蛋白临床诊断试 剂盒所需的特异性单克隆抗体。     

抗棉铃虫组织蛋白酶B单克隆抗体的制备及鉴定

分别以棉铃虫组织表达的组织蛋白酶B和基因重组的大肠杆菌表达的组织蛋白酶B为抗原免疫BALB／c小鼠，选择血清抗体滴度高的免疫小鼠，取其脾细胞和Sp2／0骨髓瘤细胞进行细胞融合．经ELISA法筛选阳性克隆和有限稀释法克隆细胞，共获得分泌抗组织蛋白酶B的单克隆抗体杂交瘤细胞3株，分别命名为9D5，100E2和100H6．以ELISA法和Western blotting法对3株杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体进行了特异性鉴定，其中9D5和100E2能够同时识别两种不同来源的组织蛋白酶B，而100H6只能识别基因重组的大肠杆菌表达的组织蛋白酶B．     

微囊化转CEA基因细胞诱导小鼠抗肿瘤免疫的研究

为发展癌胚抗原(CEA)阳性肿瘤的治疗性疫苗,应用基因工程和静电液滴技术制备出微囊化转CEA基因细胞,经腹腔免疫实验小鼠,再分别应用CEA基因转染的H 2 2 细胞小鼠皮下及腹腔接种,观察微囊化转CEA基因细胞对小鼠肿瘤的抑制作用及其诱导小鼠细胞毒性T淋巴细胞(CTL)特异性杀伤CEA 阳性肿瘤细胞的能力,并用流式细胞术检测了小鼠肿瘤细胞的生长周期和各实验组脾脏T淋巴细胞亚群的分布情况. 结果显示,微囊化转CEA 基因细胞可以有效抑制CEA阳性肿瘤的生长,诱导小鼠CTL对CEA阳性肿瘤细胞的特异性杀伤 ,并能改善荷瘤小鼠的免疫功能,延长腹水瘤小鼠的生存期.     

基因工程人表皮生长因子（rhEGF）单克隆抗体的制备与初步鉴定

以基因工程人表皮生长因子(rhEGF)为抗原,免疫BALB/c小鼠,将免疫的小鼠脾细胞与小鼠Sp2/0-Ag14骨髓瘤细胞进行融合,经多次筛选和再克隆化,获得3株能稳定分泌抗rhEGF单克隆抗体(McAbs)的杂交瘤细胞株.对该3株杂交瘤细胞小鼠腹水进行了抗体效价测定,结果显示在1×10-6～2×10-7之间.对上述3种杂交瘤单抗(分别命名为:AE-2A4,AE-2G5和AE-3E11)进行了特异性、抗原决定簇及相对亲和力测定.结果表明,它们都具有抗rhEGF高特异性;并分别抗两个不同抗原决定簇;相对亲和力大小次序为:AE-3E11>AE-2A4>AE-2G5.Ig亚类鉴定结果显示:AE-2A4,AE-3E11同为IgG1亚类,而AE-2G5为IgG2b亚类.确定AE-2A4单克隆抗体可用于制备高纯rhEGF.     

褪黑素单克隆抗体的制备及鉴定

为了获得抗褪黑素(MT)高效价的单克隆抗体，用甲醛将MT连结到BSA上，然后用连结物背部皮下多点免疫Balb／c小鼠，用PEG诱导免疫鼠脾细胞与Sp2／0细胞融合，经ELISA法筛选阳性克隆株及测定效价，用抗体与同类物之间的交叉反应进行特异性鉴定．最后获得5株(4C9D7、3E12C7H11E7、3E12A9D7、6A6A3A2C3、1E1E2H2H6)能稳定分泌高效价抗MT的单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞。     

抗鱼卵透明带单克隆抗体淋巴细胞杂交瘤的建立及初步鉴定

详细介绍了抗鱼（花鲢Anstichthysnobilis）卵透明带单克隆抗体淋巴细胞杂交瘤的制备及鉴定方法，用佛氏佐剂乳化热溶花鲢鱼卵透明带，然后免疫雌性BALB／C小鼠，取其脾细胞与骨髓瘤Sp2／0融合产生杂交瘤，经3次再克隆后，用间接ELISA方法筛选出一株抗鱼卵透明带的单克隆抗体杂交瘤，经免疫双扩散试验测得该种单克隆抗体为IgG1，经过染色体检查知其染色体数目在86～108之间，为93.6±3.81，杂交瘤细胞染色体经检查发现有中间和亚中着丝点染色体，符合杂交细胞染色体特征。     

抗KDR-Fc杂交瘤细胞系的建立

用杂交瘤技术建立抗KDRFc的杂交瘤细胞系,以KDRFc抗原免疫雌性BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,经ELISA间接法检测和有限稀释法克隆培养,再经稳定性检测、效价检测,筛选出分泌抗KDRFc单克隆抗体的杂交瘤细胞.得到了10株能持续分泌抗KDRFc的单克隆抗体的细胞株,其中3株分泌的单抗具有较高的生物活性、特异性和稳定性.     

抗猪促卵泡激素小鼠源单克隆抗体的研究

用猪促卵泡激素(PESH)作为抗原免疫BALB/C小鼠。通过将免疫小鼠的脾细胞和同系小鼠骨髓瘤细胞(SP2/O—Ag14)进行融合,建立了九株能稳定分泌抗PFSH单克隆抗体的杂交瘤细胞。其中三株杂交瘤细胞分泌的抗体被证实是对PFSH特异结合的,它们和另一种非常相近的垂体激素——猪促黄体激素(PLH)不结合。用有限稀释法对全部九株杂交瘤进行了三次亚克隆。有几种单克隆抗体被羟基磷灰石柱层析一步法从小鼠腹水所纯化。以聚丙烯酰胺凝胶电泳法检测经纯化单克隆抗体制品的纯度。     

抗人绒毛膜促性腺激素（HCG）单克隆抗体的研制和特性分析

以HCG为抗原,免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与小鼠Sp2/0—Ag14骨髓瘤细胞融合,经反复筛选和再克隆化,获得8株能稳定分泌抗HCG特异单克隆抗体的杂交瘤细胞株。对其中6个高效价单抗进行了特异性和抗原决定簇检测,选出两个抗相距较远不同决定簇的单抗(2D_4,4F_4)作进一步特性分析。结果显示:免疫球蛋白亚类鉴定,2D_4为IgGl亚类,4F_4为IgG2a亚类;亲和力常数(K_(affi)),2D_4为5.41±0.94×10~(-10)mol/L,4F_4为1.37±0.33×10~(-9)mol/L。证实该两种单克隆抗体可用于研制有关临床诊断试剂盒。     

抗Der p 2单克隆抗体细胞株的建立与鉴定

目的:建立Der p 2(屋尘螨Ⅱ类变应原)杂交瘤细胞株,并对其分泌的Der p 2单克隆抗体进行鉴定.方法:用重组Der p 2蛋白作为免疫原,免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与Sp2/0小鼠骨髓瘤细胞融合,经筛选和3次克隆化,制备出单克隆抗体.采用间接ELISA法、Western blot法确定单克隆抗体的免疫球蛋白的类型和亚类、相对亲和力、特异性,对单克隆抗体进行鉴定.结果:获得3株能稳定分泌高效价Der p 2单克隆抗体的杂交瘤细胞株,1B6为IgG1类,1G11、4B1为IgG2a类.间接ELISA法检测细胞上清效价为104~105,腹水效价为105~106.Westernblot试验证明3株单抗与Der p 2蛋白均有特异性反应.结论:成功制备了3株抗Der p 2的单克隆抗体,均具有良好的特异性和亲和力,为进一步建立Der p 2蛋白检测和纯化的方法奠定了基础.     

硝基苯胺单克隆抗体的制备和效果评价

为了测定水中硝基苯胺类化合物,进而开发酶联免疫分析法(EL ISA)快速检测方法,制备了抗硝基苯胺单克隆抗体。以合成的硝基苯胺完全抗原,作为免疫原免疫B a lb/c小鼠,采用B细胞杂交瘤技术,经免疫、融合、筛选和克隆等,得到了抗硝基苯胺单克隆抗体。该抗体亚类为IgG1,制备的单克隆抗体腹水效果评价达10-7,与其他硝基苯胺结构类似物无交叉反应。实验结果表明,用本间接竞争EL ISA方法可以精确地检测不同水样中硝基苯胺残留。     

乙型脑炎病毒(JEV)单克隆抗体的制备及初步应用

目的制备乙型脑炎病毒(JEV)单克隆抗体,应用于猪源性生物制品中JEV的检测。方法提纯病毒抗原,免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,经间接ELISA方法筛选和有限稀释法三次克隆获得4株杂交瘤细胞,并应用琼脂扩散、酶联免疫吸附试验和免疫荧光方法进行抗体鉴定和样品检测。结果获得4株稳定分泌JEV单克隆抗体的杂交瘤细胞株G10、F4、C10、A5,免疫荧光抗体实验证实是特异的抗JEV抗体,其免疫球蛋白亚类G10和F4为IgG1,A5为IgM,C10未鉴定出其亚类。G10和F4腹水效价为105以上,C10和A5腹水效价为102以上。结论成功制备了抗JEV单克隆抗体,建立了以单抗介导的间接ELISA和间接IFA检测方法,并应用于猪源性生物制品中JEV的检测。     

Solid lipid nanoparticles loading adefovir dipivoxil for antiviral therapy

Herein, solid lipid nanoparticles （SLN） were proposed as a new drug delivery system for adefovir dipivoxil （ADV）. The octadecylamine-fluorescein isothiocynate （ODA-FITC） was synthesized and used as a fluorescence maker to be incorporated into SLN to investigate the time-dependent cellular uptake of SLN by HepG2.2.15. The SLN of monostearin with ODA-FITC or ADV were prepared by solvent diffusion method in an aqueous system. About 15 wt% drug entrapment efficiency （EE） and 3 wt% drug loading （DL） could be reached in SLN loading ADV. Comparing with free ADV, the inhibitory effects of ADV loaded in SLN on hepatitis B surface antigen （HBsAg）, hepatitis B e antigen （HBeAg） and hepatitis B virus （HBV） DNA levels in vitro were significantly enhanced.     

抗家蚕抗菌肽单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立

首次报道了抗家蚕抗菌肽（一种小分子多肽）单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立．用ＦＰＬＣ纯化家蚕抗菌肽（ＡＢＰ）获得了电泳一条带的均一样品；将它与辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）偶联，以此偶联物免疫ＢＡＬＢ／Ｃ鼠．以抗菌肽—牛血清白蛋白（ＡＢＰ－ＢＳＡ）做包被物ＥＬＩＳＡ筛选出５个阳性杂交瘤细胞株，冻存复苏后得到三个稳定分泌抗体的阳性细胞株，抗体ＩｇＧ亚型为ＩｇＧ２ａ．统计了杂交瘤的染色体数     

分泌抗弓形虫单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

用弓形虫可溶性抗原免疫ＢＡＬＢ／ｃ 小鼠,取脾细胞,与Ｓｐ２／０ 细胞融合,获得３ 株能稳定分泌抗弓形虫单克隆抗体的细胞。细胞培养上清液和腹水中的单克隆抗体效价分别为１∶１６ ～２５６ 和１０ － ６ ～１０ － ７ 。单抗类型均为ＩｇＭ。杂交瘤细胞经液氮冻存１２ 个月后,复苏生长良好,分泌活性稳定。在ＭｃＡｂ－ Ｄｏｔ－ ＥＬＩＳＡ 实验中,所能测出可溶性抗原的最小浓度为１０ ｎｇ／ ｍＬ     

马立克氏病病毒MEQ蛋白单克隆抗体的制备及应用研究

基因表达与病毒感染细胞及致瘤能力之间关系的阐明，将有助于我们对马立克氏病病毒（MDV）meq基因功能的了解，该研究利用通过杆状病毒载体在昆虫细胞系SF9上高度表达的MEQ蛋白免疫BALB/c小鼠，然后收获其免疫脾细胞与肿瘤细胞系SP2/0通过PEG于体外融合，获得的杂交瘤细胞被克隆并通过与MDV感染的鸡胚成纤维细胞（CEF）做免疫荧光试验（FA），进行其分泌抗MEQ单克隆抗体（McAb）能力的筛选，获得4株稳定产生抗MEQ蛋白McAb的杂交瘤细胞，其中3G12E6通过FA和免疫酶组化技术能够检测到MDV致瘤株感染的CEF及自然MD肿瘤细胞中表达的meq基因产物。研究的结果首次发现，MDV致瘤株GA、RB1B感染的CEF及自然MD肿瘤细胞中均有meq基因的表达，但在弱毒疫苗株CV1988感染的CEF和免疫鸡组织细胞中则未检测到MEQ，作者认为这是由于meq基因在致瘤株中表达水平高，而在非致瘤株中表达水平低所致，这可能是决定MDV毒力（virulence）或致瘤性（oncogenicity）的关键因素之一。     

58型人乳头瘤病毒E7蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

 为获得抗58型人乳头瘤病毒(HPV58)E7蛋白的单克隆抗体,乳糖诱导重组工程菌表达HPV58 E7融合蛋白,以纯化后的该重组蛋白为免疫原,经细胞融合和有限稀释后,得到6株分泌抗HPV58 E7单克隆抗体(McAb)的工程细胞株,并采用体内接种方法及亲和柱层析纯化技术制备6株抗体.酶联免疫吸附测定(ELISA)、Western-blot实验和细胞免疫荧光检测结果表明,所得抗体均为IgG2a类,κ型,抗体效价均可达10^-5,并且能够与原核及真核系统表达的HPV58 E7蛋白发生特异性抗原-抗体反应.该抗体的成功制备为后续HPV58 E7致癌生物学研究及相关肿瘤诊断试剂的开发奠定基础.     

鸡新城疫病毒HN蛋白多表位抗原的表达与免疫原性研究

有效抗原及表位的预测和筛选是疫苗研究的基础,在对鸡新城疫病毒HN蛋白抗原表位预测的基础上,对多表位抗原进行表达与免疫原性测定。根据生物信息学表位预测方法获得的家禽新城疫病毒抗原表位,利用PCR技术合成基因,构建pBVIL1-HN重组载体,转化大肠杆菌HB101,进行基因工程表达;经纯化蛋白后免疫小鼠,抗体滴度用酶联免疫吸附方法测定,确定抗原的免疫原活性。结果表明,多表位抗原基因经测序结果正确,融合基因在大肠杆菌得到高效表达,电泳纯融合多表位抗原经三次免疫得到抗血清,抗体滴度为1：8000。鸡新城疫病毒HN蛋白多表位抗原得到高效表达,且具有良好的免疫原性。     

Protective effect of DNA-mediated immunization with liposome-encapsulated GRA4 against infection of Toxoplasma gondii

The dense granule protein 4 (GRA4) is a granular protein from Toxoplasma gondii, and is a candidate for vaccination against this parasite. In this study, the plasmid pcDNA3.1-GRA4 (pGRA4), encoding for the GRA4 antigen, was incorporated by the dehydration-rehydration method into liposomes composed of 16 mmol/L egg phosphatidylcholine (PC), 8 mmol/L dioleoyl phosphatidylethanolamine (DOPE), and 4 mmol/L 1,2-diodeoyl-3-(trimethylammonium) propane (DOTAP). C57BL/6 mice and BALB/c mice were immunized intramuscularly three times with liposome-encapsulated pGRA4 to determine whether DNA immunization could elicit a protective immune response to T. gondii. Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) of sera from immunized mice showed that liposome-encapsulated pGRA4 generated high levels of IgG antibodies to GRA4. Production of primary interferon (IFN)-γ and interleukin (IL)-2 in GRA4-stimulated splenocytes from vaccinated mice suggested a modulated Th1-type response. 72.7% of C57BL/6 mice immunized with liposome-encapsulated pGRA4 survived the challenge with 80 tissue cysts of ME49 strain, whereas C57BL/6 mice immunized with pGRA4 had only a survival rate of 54.5%. When immunized BALB/c mice were intraperitoneally challenged with 10³ tachyzoites of the highly virulent RH strain, the survival time of mice immunized with liposome-encapsulated pGRA4 was markedly longer than that of other groups. Our observations show that liposome-encapsulated pGRA4 enhanced the protective effect against infection of T. gondii.