浓度梯度胶制作方法改良研究

通过对小麦高分子量麦谷蛋白亚基（HMW－GS）、低分子量麦谷蛋白亚基（LMW－GS）的SDS－PAGE的电泳分离过程研究，找出了一种适合于在板状电泳中进行的梯度胶制备方法，实验结果表明，采用酸式滴定管依次混合11％和16％两种分离胶制备成11％－16％的浓度梯度胶，可以很好地分离HMW－GS2亚基和2^*亚基。该方法所用设备简单，制备操作方便，梯度胶的分离效果适合于一般生物化学和分子生物学实验室应用。     

小麦高分子量谷蛋白亚基多克隆抗体的制备、纯化及鉴定

利用丙酮沉淀法对小麦高分子量谷蛋白亚基（HMW—GS）进行快速高效纯化，以纯化后的蛋白做为抗原，免疫白兔，制备了相应的多克隆抗体．与大肠杆菌裂解液共温育去除交叉反应性抗体，并用饱和硫酸铵沉淀法对抗体进行了初步纯化．电泳及免疫印迹结果表明，所制备的多克隆抗体能与小麦的高分子量谷蛋白亚基发生强烈反应，而与小麦中的水溶性蛋白、醇溶蛋白及低分子量谷蛋白亚基不反应．该抗体的制备为进一步研究小麦高分子量谷蛋白亚基的功能及其品质改良提供了基础材料和有用工具．     

超大穗小麦高分子量麦谷蛋白亚基组成分析

采用十二烷基硫酸钠—聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS-PAGE)分析了超大穗小麦高分子量麦谷蛋白亚基(HMW-GS)组成及其F1代的遗传多样性。结果表明,9份超大穗小麦中共检测到7种类型的高分子量麦谷蛋白亚基,在Glu-A1位点,出现了两种亚基,null和1亚基,Glu-D1位点只有2 12一种亚基,而Glu-B1位点上亚基类型最丰富,有4种类型,尤其出现了两种新型的复合亚基组合形式7 9 8和7 9 14 15。遗传分析表明,在超大穗小麦与普通小麦杂交后代F1中,双亲的高分子量麦谷蛋白亚基呈显性遗传,且显母性遗传倾向。     

大麦醇溶蛋白酸性聚丙烯酰胺凝胶电泳条件的探索

以栽培大麦和中国近缘野生大麦为材料，用复合提取剂(内含25％2-氯乙醇和1％2-巯基乙醇)对其种子醇溶蛋白过夜提取后制备的样本液，在保持凝胶浓度(18％)不变的基础上，通过改变交联度，催化剂用量，进样量以及电场强度和电泳时间所获得的不同电泳图谱，经比较分析可知，在酸性聚丙烯酰胺凝胶电泳体系中，交联度为3．33％，催化剂(0．6％H2O2)用量在26μL～30μL之间，进样量控制在5μL～10μL之间，室温下500V稳压电泳90min左右对醇溶蛋白分离效果好，电泳图谱清晰，分辨率高。实验结果亦表明，适当提高交联度和H2O2用量，有助于增加凝胶硬度，加快凝胶聚合速度，缩短制胶时间。     

不同氮素浓度对小麦醇溶蛋白差异表达的研究

利用穗离体培养技术和A-PAGE技术研究了不同氮素浓度影响下小麦籽粒醇溶蛋白的表达差异，研究发现低氮条件下(0％～0．09％)小麦籽粒醇溶蛋白的表达不受影响，但在高氮(0．12％～0．2％)胁迫下，籽粒醇溶蛋白出现了差异表达，共产生了4条特异蛋白谱带，其中2条在ω区，另2条在γ区，且γ区的蛋白特异带表达比ω区强。     

玉米渣提取玉米醇溶蛋白工艺初探

主要介绍了从玉米渣中提取玉米醇溶蛋白的工艺。从玉米醇溶蛋白不溶于水和无水乙醇，而只溶于60％～95％的醇水溶液中的特殊溶解性出发，利用90％的乙醇溶液，在45～55℃、pH8．0的条件下处理3～4h，可将玉米醇溶蛋白从玉米渣中提取出来。并通过实验确立了各步的工艺条件，在此奈件下玉米醇溶蛋白的得率可达80％。     

苏丹草种子醇溶蛋白提取和电泳条件优化

以苏丹草(Sorghum sudanense)种子为材料,以蛋白质提取率和电泳图谱效果为标准,分析不同提取剂、种子粉末质量(g)与提取剂体积(mL)的比例、还原剂二硫苏糖醇(dithiothreito,DTT)的浓度对种子醇溶蛋白提取效果的影响,同时研究上样量、不同胶浓度对SDS-PAGE检测蛋白的影响.结果表明,苏丹草的最佳提取剂为含有0.2%DTT的70%正丙醇,种子粉末质量与提取剂体积的最佳比例为1∶8.在上样量适当的情况下,12%分离胶电泳可以得到清晰的电泳图谱.以苏丹草种子为材料所建立的醇溶蛋白提取和电泳条件,也可应用于其他几种常见的禾本科种子醇溶蛋白的分析,并可得到较好的分辨率.     

黄鳝超氧化物歧化酶的纯化和部分性质研究

黄鳝超氧化物歧化酶粗酶液，经过正丁醇脱脂，丙酮分级沉淀，DEAE-琼脂糖离子交换层析和Sephacryl S-200凝胶过滤，从黄鳝中分离纯化获得铁超氧化物歧化酶(Fe-SOD)，并对其性质进行研究，最终该酶的比活力为1500U／mg，提纯倍数为368．5．回收率为24．7％．该酶对KCN不敏感．而对H2O2敏感，对热较稳定，对酸碱有较强的耐受性，抗胃蛋白酶的破坏，聚丙烯酰胺凝胶电泳和等电点聚焦电泳结果表明：纯化酶蛋白呈一条带，酶分子量约为85kD，亚基分子量约为16．5kD，等电点为7．15。     

春小麦谷蛋白亚基、醇溶蛋白电泳谱带及主要品质指标的主成分分析和聚类分析

对18份小麦品种(系)的高分子量谷蛋白亚基、醇溶蛋白电泳谱带的组成及主要常规品质指标进行了检测，并对31个权重最大的小麦品质影响因子进行了主成分分析和聚类分析。结果表明，对小麦品质贡献大的前10个因子的先后次序为：湿面筋含量、硬度、Glil7．6、Gli22、沉淀值、Gli30、1Dx5 1Dy10、蛋白质含量、面筋指数、Gli59．0。这10个因子既相互促进，又相互制约。在小麦品质育种中要高度重视谷蛋白亚基及醇溶蛋白电泳谱带的作用。18个小麦品种可以聚成5类，10个主成分值在5类品种中的表现差异很大。因此，在小麦品质育种的亲本选配时，既要注意协调10个主要品质影响因子的关系，又要使同一组合亲本间保持一定的遗传距离。     

富含高丰度蛋白的人参果实双向电泳图谱的建立

通过常规的TCA-丙酮沉淀法和丙酮沉淀法对人参果实蛋白的提取效果,确立了丙酮沉淀法更适合人参果实蛋白的提取.为进一步改善其2-DE分离效果,对丙酮沉淀法提取的总蛋白用Tris-饱和酚提纯,在其2-DE图谱效果有所改善的基础上,又在Tris-饱和酚中加入等体积的氯仿/异戊醇(24∶1)对丙酮沉淀法提取的总蛋白进行再次提纯,最终得到质量较高的2-DE图谱,其高、低丰度蛋白都得到了较好的分离.     

野生二粒小麦高分子量谷蛋白亚基等位变异分析

本研究采用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）方法,对从国内外引进的175份野生二粒小麦（Triticum dicoccoides）种质资源高分子量谷蛋白亚基（HMW-GS）Glu1-等位基因组成进行了鉴定和分析.结果表明,175份野生二粒小麦中,Glu-1B位点上的HMW-GS有32种变异类型,比普通面包小麦Glu-1B位点编码的HMW-GS的变异类型丰富得多,其中7＋8和14.1＋15.1亚基分布频率最高（占20.00%）;Glu-1A位点编码的HMW-GS有4种变异类型：1、1^＊、2^＊和Null,一共鉴定了10个新的高分子量亚基.这些新的亚基和等位基因有可能成为面包小麦品质改良的候选基因资源.     

野生二粒小麦高分子量谷蛋白亚基组成的多态性研究

对来自以色列的38份野生二粒小麦的高分子量谷蛋白亚基(high molecular weight glutenin subunits,HMW-GS)组成进行SDS-PAGE检测,发现其HMW-GS具有较高的遗传多样性.在Glu-A1和Glu-B1位点共有18种可确定的亚基变异类型.其中,A1位点上的亚基1、2*(出现频率分别为60.53%和13.16%)和B1位点上的亚基13+16、14+15与17+18为优质亚基(出现频率分别为26.32%、7.89%和2.63%).同时出现了许多普通小麦所稀有或缺乏的特异亚基类型,如6+8*,7*+9,6+9*,7+9*,20,22等,在2份材料中出现了1种未命名的新亚基类型.     

数量化回归在小麦加工品质分析上的应用

数量化回归分析是为了达到预测目的所进行的定量变量对定性变量的回归分析。本文以小麦高分子谷蛋白亚基与沉降值的相关性研究为例，就这一方法的统计学原理以及在小麦加工品质分析上的应用作了详细介绍。从实例分析结果来看，该方法简单、实用，且操作易行。     

Transgene inheritance and quality improvement by expressing novel HMW glutenin subunit （HMW-GS）genes in winter wheat

The expression vector pBPC30, which carries the high molecular weight glutenin subunit (HMW-GS) 1Dx5 and 1Dy10 genes, was transferred into hexaploid winter wheat cv. Jinghua No. 1, Jing411 and Jingdong No. 6 explants of immature embryos and immature inflorescence by particle bombardment. A large number of resistant transgenic plants were obtained under the selection of herbicide bialaphos or phosphinothricin (PPT). Confirmed transgenic plants of To generation showed successful integration of HMW-GS genes and bar gene into the wheat genome. T1 generation of transgenic plants can resist 20--150 mg/L PPT.Protein analysis of T2 seed by SDS-PAGE showed that HMW-GS 1Dx5 and 1DylO genes were well expressed in offspring seed of transgenic lines by co-expression with or substitution of endogenous 1Dx2 or 1DylO. In one transgenic line, TG3-74, a new protein band between endogenous protein subunits 7 and 8 (marked as 8*) of glutenin appeared,but endogenous subunit 8 (encoded by 1By8 gene) was absent. Analysis of gluten rheological quality on seed proteins of 102 T3 plants showed that the sedimentation value of 5 transgenic lines (44.2149.0 mL) was remarkably improved,59.6%---64.3% higher than that of wild type Jinghua No. 1 and Jingdong No. 6, similar to bread wheat Cheyenne (48.0 mL). Analysis of dough rheological properties of transgenic lines showed that the dough stable time of 5 transgenic lines range from 16 to 30 min, whereas the dough stable time of wild type was only between 3--7 min. Our research suggests that introducing novel HMW-GS genes into wheat is an efficient way to improve its bread-making quality.     

小麦与高冰草体细胞杂种F5代麦谷蛋白及SDS沉降值分析

通过对普通小麦与高冰草体细胞杂种F5代 175个株系的麦谷蛋白及SDS沉降值分析 ,发现杂种F5代有 10种不同的麦谷蛋白组成 ,并出现了 1Ax1,1Ax2 ,1Bx13,1By16 ,1By8,1Dx5等 6种不存在于亲本小麦中的高分子量麦谷蛋白亚基及 1Bx13 1By16 ,1Bx7 1By8,1Dx5 1Dy12等 3种新亚基组合 ,部分杂种中出现了高冰草的麦谷蛋白特征谱带 ;杂种株系的SDS沉降值表现出较大的差异 ,其中一些杂种的SDS沉降值明显高于亲本普通小麦 .结果表明 ,通过体细胞杂交有可能将野生禾草的优良性状引入普通小麦 ,创造出多种不同组成及组合的新种质 ,为小麦品质育种开辟新途径     

2—（三氯甲基）—2—丙醇的相转移催化法合成研究

用聚乙二醇－４００作为相转移催化剂合成２－（三氯甲基）－２－丙醇，反应在碱性介质中进行，条件温和，反应温度控制在５～１０℃原料的摩尔配比为丙酮：氯仿：氢氧化钠：聚乙二醇－４００＝１０：１０：７：１．产率为３０．４％。     

胡椒烯丙酮的绿色合成新方法

报道了一种绿色合成胡椒烯丙酮[3160-37-0]的新方法.这种不污染环境的合成方法是用洋茉莉醛[120-57-O]与丙酮[67-64-1]在水相和有机相之间进行克莱森-施密特反应;产物分离后有机层循环再用,水层经过活性炭吸附处理后也循环使用,做到了无试验废水排放.1mol洋茉莉醛、回收的苯溶液200ml、补充丙酮70ml、回收并且经过活性炭吸附处理后的水溶液200ml、补充1.1g氢氧化钠,50℃反应7h,产率99.7%,纯度99.6%.     

SnO2的微乳液法合成及其气敏性能测试

研究了由阴离子表面活性剂组成的微乳液在纳米材料合成中的应用,采用X射线衍射(XRD)检测了产物的晶体结构和粒径分布。结果表明,由十二烷基苯磺酸钠、正庚烷和正丁醇组成的微乳液所制得的SnO2具有四方结构。用该粉体制成厚膜型旁热式气敏元件,测试结果表明,在工作电压为5V时气敏元件对甲醇、乙醇、丙酮、正丙醇等有机溶剂的还原性气体具有很高的灵敏度,特别是对正丙醇有较好的选择性,可以检测空气中浓度低至5ppm的甲醇、乙醇、丙酮和正丙醇蒸气。所有气敏元件呈现随气体种类不同而变化的较好的灵敏度,可望用于制备价廉的对多种气体的浓度进行测定的气敏元件。     

生物体液差异蛋白质组学研究技术体系的建立

为探讨以2D-DIGE为核心的生物体液差异蛋白质组学技术体系,取2组不同生物学状态下的体液样本进行研究。每组包含一例人类多发性硬化样本和一例对照样本,共设3组平行实验。经冷丙酮沉淀法除盐提取蛋白并精确定量,分别用分CY5和CY2荧光染料按最小标记法对多发性硬化样本和对照组进行标记。另再取混合蛋白内用CY3标记。混合样品后分别在3块2D-gel上进行电泳,通过Typhoon 9400多功能荧光扫描仪及DeCyder 2-D差异分析软件进行DIGE分析。差异蛋白用MALDI-TOF／TOF进行鉴定,将所得结果录入Metarcore计算平台,进行蛋白质相关分析。结果表明,利用该方法研究不同生物学状态下的体液标本,结合网络图谱分析,可得到较多有意义的候选蛋白信息。     

高粱总DNA导入春小麦新品系高分子量麦谷蛋白亚基的变化

通过花粉管通道法将高粱总DNA导入春麦甘麦8号、陇春13号和陇春10号,经过多代选择获得了5个稳定遗传新品系.在高分子量麦谷蛋白亚基分析中,甘麦8号后代89144的高分子量麦谷蛋白亚基发生突变,较其受体多了5 10亚基,而少了2 12亚基;其他几个转基因后代与其受体比较,高分子量麦谷蛋白亚基组成未发生变化;但是各亚基的相对质量分数有较大变化.高分子量麦谷蛋白亚基的组成和各亚基质量分数的变化直接影响小麦品质.本研究对外源总DNA花粉管通道法导入小麦在改良小麦品质方面的作用进行了讨论.