油菜双向电泳技术体系的优化

为建立一套可以较好地分离油菜不同器官(花蕾、化药、叶片)的双向电泳技术体系,对IPG胶条的pH范围、凝胶染色的方法以及蛋白质的上样量进行优化.结果表明,以pH=4~7,17cm的IPG胶条进行双向电泳,胶体考马斯亮蓝染色,蛋白质上样量为800μg时,油菜的花蕾、化药以及叶片蛋白质均可得到很好的分离,获得的2-DE凝胶图谱清晰.为检验优化后的双向电泳技术体系与质谱的兼容性,选取10个蛋白质点进行肽质量指纹图谱分析,发现这些蛋白质点经质谱分析后均可得到成功鉴定.表明该分离体系与质谱兼容性较好,蛋白质点鉴定成功率较高.     

一种适合杨树叶片的蛋白质提取方法

高质量的蛋白样品制备是进行双向电泳的前提条件.杨树叶片中因含有丰富的多酚、色素、多糖等物质,给蛋白质的提取带来了困难.为了找到一种适合杨树叶片的蛋白质提取方法,以南林895杨为实验材料,采用三氯乙酸-丙酮沉淀法对杨树叶片蛋白质进行提取.对所提取的蛋白分别用考马斯亮蓝染色法和银染法进行检测,得到了良好的双向电泳图谱.     

肝癌细胞株HepG-2的G1期细胞蛋白质组双向电泳图谱的建立

采用双向电泳分离肝癌细胞株 HepG2 的 G1 期细胞的蛋白质,经考马斯亮蓝染色及图像扫描与分析显示:在 pH3-10,13 cm 的 IPG 胶条上,可分离到 227 个重复性及分辨率均较好的蛋白斑点,蛋白斑点的匹配率为 84%.建立了 HepG2 的G1 期细胞蛋白质组双向电泳图谱,为其蛋白质组学的进一步研究奠定了基础.     

金钗石斛花芽蛋白质提取及其双向电泳体系优化

通过对蛋白质提取方法、水化方式、等点聚焦程序、IPG胶条选择等方面的优化，建立金钗石斛花芽蛋白质双向电泳体系.结果表明，采用酚抽提法提取蛋白，样品与水化液1∶〖KG-*2/3〗40复溶；被动水化，等点聚焦程序B2；选用24 cm pH 3～10NL 胶条和12% 的凝胶；采用考马斯亮蓝G-250染色，获得了可识别1 422个蛋白质斑点的双向电泳图谱，且重复性好、分辨率高，为进一步开展金钗石斛花芽在蛋白质组学水平上的分析提供了技术支持.     

用考马斯亮蓝测定植物粗提液中可溶性蛋白质含量方法的研究

用木立芦荟的叶片为材料,以牛血清白蛋白为参照,对蛋白质与考马斯亮蓝G-250结合后的光吸收稳定性,不同的蛋白质溶剂、植物粗提液等对光吸收的影响进行了研究。结果表明：蛋白质与考马斯亮蓝结合后,在595nm处的光吸收值不很稳定,通过降低仪器的灵敏度可以提高光吸收的稳定性；以0.02～0.5mol·L~(-1)pH为6.8的磷酸缓冲液、0.1～1.0mol·L~(-1)pH为6.8的Tris-HCI缓冲液为蛋白质溶剂,对蛋白质与考马斯亮蓝结合后的线性无影响；芦荟叶片粗提液中的其他成分对其中可溶性蛋白质与考马斯亮蓝结合后的线性亦无显著影响。     

橡胶草叶片蛋白质提取方法的选择及双向电泳体系的优化

目的为了建立起橡胶草叶片组织的蛋白双向电泳体系。方法采用5种不同方法提取橡胶草叶片蛋白,并通过蛋白提取率和单向SDS-PAGE电泳的比较,筛选出改良TCA-丙酮沉淀法、酚-乙酸铵沉淀法、Tris浸提法3种方法进行2-DE电泳。结果表明选择改良TCA-丙酮法为最合适的蛋白质提取方法。为进一步优化体系,比较了不同染色方法、上样量和固相p H梯度预制胶条(IPG)的p H范围对双向电泳结果的影响,电泳结果表明使用17 cm p H 3-10的IPG胶条、上样量为1200μg、考马斯亮蓝染色法能分离得到更多的蛋白点,是橡胶草叶片双向电泳体系的最优条件。结论本研究初步建立了橡胶草叶片蛋白质双向电泳体系,为深入研究橡胶草蛋白质组学提供依据。     

文蛤抗癌多肽抑制肝癌细胞SMMC-7721差异蛋白质组分析

为了研究文蛤抗癌多肽对肝癌细胞抑制作用的蛋白表达差异,寻找并鉴定差异蛋白质,探讨多肽抑制肝癌细胞的作用机理,本文通过双向电泳、考马斯亮蓝染色、Melanie 4双向软件分析、质谱技术(MALDI-TOF-MS)和数据库检索分析多肽作用SMMC-7721后的差异蛋白质.利用差异蛋白质组方法分析了抗癌多肽对肝癌细胞SMMC-7721抑制后的蛋白变化,找到差异点并进行了质谱鉴定(MALDI-TOF-MS).结果表明,通过对差异蛋白功能的分析,推测抗癌多肽可能引起了肝癌细胞的凋亡,为进一步的抗癌多肽抑制肝癌细胞作用的研究提供了理论基础.     

聚丙烯酰胺凝胶电泳快速显色方法的研究

通过对聚丙烯酰胺凝胶电泳的固定方法、时间、染色液种类、染色方法及蛋白灵敏度的研究,确定了以10%三氯乙酸为固定液,室温固定10min的固定方法;染色液为：考马斯亮蓝G-250、95%乙醇和10%磷酸,染色时间为15min;蛋白质灵敏度与考马斯亮蓝R-250相当,达到0.1μg。     

双向凝胶电泳分析动脉粥样硬化大鼠心肌蛋白表达图谱

采用双相凝胶电泳分离大鼠冠状动脉总蛋白，胶态考马斯亮蓝G-250染色，GS-800凝胶扫描仪获取凝胶图像，并用PDQUEST软件分析，检测出2626个蛋白质斑点，并且得到不同条件下的蛋白质组的差异图谱，在相同的参数设置下，不同谱图间的匹配斑点数为1841，匹配率达70．1％以上，测量了凝胶蛋白斑点的在IEF、和SDS—PAGE方向上的位置偏差；对比分析了两种心肌组织的差异蛋白，发现33个蛋白质斑点只在正常大鼠心肌蛋白检测到表达；46个蛋白点在两种细胞中表达量上有显著变化，为从分子水平上理解心血管类疾病的发病机制，寻找防治药物和药物的构效关系的进一步研究开拓了新的途径，同时为深入研究AS的发病机制和药效研究提供参考数据。     

考马斯亮蓝G-250染色法测定草乌中可溶性蛋白质含量

采用考马斯亮蓝G-250染色法对草乌药材中可溶性蛋白质含量进行了测定,建立了快速、灵敏的测定蛋白质的方法.结果表明,考马斯亮蓝G-250染色法简单、迅速,且相对较为准确,是测定低浓度蛋白质含量的有效方法.     

大腹圆蛛毒素的双向电泳分析

提取大腹圆蛛毒素,进行双向凝胶电泳(Two Dimension Gel Electrophoresis,2-DGE),经银染法显色及电脑软件分析,结果表明:大腹圆蛛的毒素至少有80种成份,其中大部分显碱性或中性.     

莽山烙铁头蛇粗毒双向凝胶电泳分析

采用固相pH梯度等电点聚焦-SDS双向聚丙烯酰胺凝胶电泳对莽山烙铁头粗毒进行了分析,通过银染法显色,电脑软件识别出约40个蛋白质点.其中分子量超过130 kD的蛋白质点很少,分子量90 kD~10 kD的区域均有蛋白质点分布,分子量34 kD区域的蛋白质点较为密集,且它们的含量明显较高.从蛋白质点的等电点分布范围分析,偏于碱性端的蛋白质明显多于酸性端的蛋白质,且分布在中性偏碱(pH 7~8)的区域.质谱数据的数据库搜寻结果表明:莽山烙铁头蛇毒中含有类凝血酶组分、纤溶酶组分、血小板聚集蛋白、抗血小板聚集蛋白和平滑肌钙离子通道阻断剂等组分.     

生物体液差异蛋白质组学研究技术体系的建立

为探讨以2D-DIGE为核心的生物体液差异蛋白质组学技术体系,取2组不同生物学状态下的体液样本进行研究。每组包含一例人类多发性硬化样本和一例对照样本,共设3组平行实验。经冷丙酮沉淀法除盐提取蛋白并精确定量,分别用分CY5和CY2荧光染料按最小标记法对多发性硬化样本和对照组进行标记。另再取混合蛋白内用CY3标记。混合样品后分别在3块2D-gel上进行电泳,通过Typhoon 9400多功能荧光扫描仪及DeCyder 2-D差异分析软件进行DIGE分析。差异蛋白用MALDI-TOF／TOF进行鉴定,将所得结果录入Metarcore计算平台,进行蛋白质相关分析。结果表明,利用该方法研究不同生物学状态下的体液标本,结合网络图谱分析,可得到较多有意义的候选蛋白信息。     

杂交水稻品质性状与农艺性状的相关性分析

通过对杂交水稻品质性状与农艺性状进行相关分析,结果表明:小区产量和穗着粒数对各品质性状具有一定相关,但未达到显著水平,其它农艺性状均对不同品质性状相关达到显著或极显著,其中穗实粒数对整精米率、直链淀粉含量、长宽比正相关达显著水平以上,结识率对整精米率、蛋白质含量、胶稠度、长宽比正相关达显著水平以上,株高对整精米率和蛋白质呈负相关达显著水平以上,播始历期对垩白米率、垩白度、蛋白质含量负相关达极显著水平,千粒重对整精米率负相关达极显著水平.通过对外观品质与其它品质性状相关分析,结果表明:长宽比与蛋白质含量、整精米率呈极显著负相关,与直链淀粉含量呈负相关,垩白米率与直链淀粉含量呈极显著正相关,与蛋白质含量呈显著正相关,与胶稠度呈负相关,垩白度与与蛋白质含量、直链淀粉含量呈正相关,与胶稠度呈负相关.     

盐胁迫对两种小麦叶片蛋白质的影响

以抗性不同的两种小麦89122和9614为实验材料,研究了NaCl处理对小麦叶片蛋白质质量分数及结构的影响.与对照比,150 mmol/L和300 mmol/L的NaCl处理抑制89122和9614小麦种子的萌发和幼芽的生长,此效应具有浓度依赖性,但相同浓度的处理对89122产生的抑制效应明显弱亍对9614小麦的抑制效应;NaCl处理使89122小麦幼苗叶片可溶性蛋白质量分数增加,却使9614小麦幼苗叶片可溶性蛋白质量分数减少;此外,傅立叶红外光谱分析结果表明,NaCl处理使两种小麦幼苗叶片蛋白的C=O键和C-N键都受不同程度的扰动.     

Proteomic analysis of long-term salinity stress-responsive proteins in Thellungiella halophila leaves

Salinity is one of the most severe environmental factors that may impair crop productivity. A proteomic study based on two-dimensional gel electrophoresis is performed in order to analyze the long-term salinity stress response of Thellungiella halophila, an Arabidopsis-related halophyte. Four-week-old seedlings are exposed to long-term salinity treatment. The total crude proteins are extracted from leaf blades, separated by 2-DE, stained with Coomassie Brilliant Blue, and differentially displayed spots are identified by MALDI-TOF MS or QTOF MS/MS. Among 900 protein spots reproducibly detected on each gel, 30 spots exhibit significant change and some of them are identified. The identified proteins include not only some previously characterized stress-responsive proteins such as TIR-NBS-LRR class disease resistance protein, ferritin-1, and pathogenesis-related protein 5, but also some proteins related to energy pathway, metabolism, RNA processing and protein degradation, as well as proteins with unknown functions. The possible functions of these proteins in salinity tolerance of T. halophila are discussed and it is suggested that the long-term salinity tolerance of T. halophila is achieved, at least partly, by enhancing defense system, adjusting energy and metabolic pathway and maintaining RNA structure.     

水稻穗颈维管束性状的株内变异

水稻穗颈大小维管束数株内茎间差异明显，株内茎的次数分布呈正态分布，研究群体穗颈维管束时，可取中等株内中等茎为样本，株内各茎的穗颈大小维管束数之比和第2节间与穗颈大维管束数比值都表现亚种特性，中等茎具有代表性。     

转基因水稻与野生稻（Oryza nivara Sharma et Shastry）杂交后代种子萌发率

种子休眠性是野生植物重要的适应性状,通过种子萌发实验可以分析种子休眠性强弱.通过人工杂交获得转抗虫基因栽培稻与一年生普通野生稻三种组合的杂种,对杂种的F3代和F4代种子采用直接萌发、打破休眠后萌发、埋土15 d和30 d 4种不同处理来检测种子活力和萌发率.结果显示转基因杂种后代种子表现出较强的休眠性,转基因对种子活力和休眠性没有明显的影响,种子休眠性有随种子世代的增加而逐渐减弱的趋势,提示水稻转基因逃逸后有在野生稻群体中宿存和扩散的可能性,但这种可能性可能会随世代增加而下降.这为进一步研究水稻转基因逃逸风险提供了参考.