ptr-MIR156a启动子克隆及特征分析

miR156a在火炬松、烟草、拟南芥中的表达与病原菌侵染密切相关。为了研究miR156a在杨树与病原菌互作过程中分子机制,以毛果杨全基因组DNA为材料,预测ptr-MIR156a启动子的大概区域,设计特异性PCR引物,克隆了ptr-MIR156a上游启动子区500、1 000和1 500 bp片段,并进行顺式作用元件分析,然后分别构建了绿色荧光蛋白(GFP)报告基因植物表达载体,最后通过原生质体的瞬时表达体系对其进行了活性检测。结果表明,1 500 bp片段活性最高,1 000 bp片段次之,500 bp片段活性最低。     

杨树抗杨四瘿螨相关基因的表达分析

采用抑制性消减杂交(suppression subtractive hybridization，SSH)技术，在构建杨四瘿螨诱导差异表达的抑制消减cDNA文库的基础上，通过RTPCR技术对候选基因进行了验证，其中有6条差异表达候选基因在4个时间点表达量有明显的增强。运用RACE(Rapid Amplification of cDNA Ends)技术克隆获得了一段全长2 053 bp的cDNA克隆，命名为PtWRKY，编码588个氨基酸。     

杨四瘿螨诱导的美洲黑杨抑制消减文库的构建及分析

采用抑制性消减杂交（suppression subtractive hybridization，SSH）技术，以杨四瘿螨诱导48、72h的美洲黑杨无性系为实验方（tester），以未经诱导的美洲黑杨无性系为驱动方（driver）构建杨四瘿螨诱导差异表达的抑制消减cDNA文库，共获得了710个克隆，所建cDNA文库的插入片段主要集中在200～1000bp之间。通过序列测定拼接和同源性对比分析，获得了美洲黑杨涉及信号传递、能量代谢、胁迫响应、物质运输等功能的差异基因。     

杨树叶片蛋白质组分析

从杨树叶片的双向电泳蛋白图谱上随机选取12个蛋白点，经电喷雾串联质谱(Electrospray ionization tandem mass spectrometry ，ESIMSMS)分析。结果显示，这12个蛋白点代表了5种不同的蛋白，其中包括：核酮糖二磷酸缩化酶/加氧酶(RuBisCO)、富甘氨酸RNA结合蛋白(Glycine rich RNA binding protein)、微管蛋白(alpha tubulin)、叶绿体磷酸甘油酸激酶(chloroplast phosphoglycerate kinase)以及光敏色素(phytochrome B2)蛋白等。     

与美洲黑杨抗黑斑病基因连锁的SCAR标记的开发

通过测序和引物设计,将与美洲黑杨抗黑斑病基因相连锁的RAPD标记OPAI17-1550和OPAI13-900成功地转化成显性SCAR标记(SAI17-1570)和共显性SCAR标记(SAI13-292),并对感、抗病池和F1代91个无性系进行了SCAR标记检测.SAI17-1570在抗病池和OPAI17-1550阳性的F1代植株中扩增出1条与RAPD扩增结果相符的特异性条带,而在感病池和OPAI17-1550阴性的F1代植株中没有相应的带,SAI13-292在抗病池和OPAI13-900阳性的F1代植株中扩增出2条带,而在感病池和OPAI13-900阴性的F1代植株中只有其中1条带.     

拟南芥逆境诱导型启动子rd29A的克隆及活性检测

以拟南芥基因组DNA为模板,通过特异PCR扩增,克隆逆境诱导表达启动子rd29A。序列分析表明,该启动子与NCBI上已报道rd29A的启动子有9964%的同源性,其序列含有干旱诱导表达元件DRE和ABA作用元件ABRE等顺式作用元件。用rd29A启动子替换pBI121载体上的35S启动子构建新的载体pBrd-GUS,并以农杆菌介导法将其转入烟草。转基因烟草的GUS组织化学染色及PCR分析结果表明,在低温、干旱及高盐等胁迫诱导下,rd29A启动子可增强GUS基因表达,因此,rd29A启动子可应用于植物抗逆基因工程研究。     

美洲黑杨新无性系生长动态遗传分析及早期选择

对４个区试点的５个美洲黑杨无性系的年生长动态进行了遗传分析。在不同区试点各无性系的年生长模式大致相似。遗传方差分量、广义遗传力随不同发育年龄而波动。生长早期选择是有效的，选择年龄为第４年     

黑杨派新无性系研究——Ⅰ、苗期测定

从I-69杨 ×小叶杨派间杂交 F_1中和从I-69杨×欧洲黑杨种间杂交 F_1中分别 初选出 19个和11个无性系。前者h~2_h= 86.0211％,h~2_d= 85. 1068％,h~2_v= 76.4196％; GCV_h= 15.8371％, GCV_d=17.5931％,GCV_v= 41.7448％。后者h~2_h= 86.6561％, h~2_d=96.6488％, h~2_v=88.0213％; GCV_h=17.0832％,GCV_d=18.8078％, GCV_v=42.9045％。说明从中选择优良无性系是可能的。 苗高、地径和材积三个性状之间的遗传、表型和环境相关系数都是极显著的,表明三个性状中任何一个性状均可作为优良无性系的选择性状。在前述初选的19个和11个无性系中又分别选择了5个和6个无性系,并估算了它们的遗传增益。     

墨西哥落羽杉无性系RAPD指纹图谱的构建

利用随机多态扩增DNA(RAPD)分子标记对53个墨西哥落羽杉无性系的研究表明:31个随机引物共扩增出了241条谱带,其中118条谱带在无性系间呈现多态性,多态位点占48.96%;用POPGENE软件对无性系进行遗传分析,得出无性系间的遗传距离为0.271~0.537,说明无性系间的遗传差异相对较大。通过聚类分析将53个优良无性系分为两大类,同时利用RAPD分子标记构建了53个无性系的指纹图谱,可对墨西哥落羽杉优良无性系进行区分和鉴定。