嗜碱芽孢杆菌NTT33β-甘露聚糖酶的特性研究

本文研究了嗜碱芽孢杆菌（ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｌｋａｌｏｐｈｉｌｉｃ） Ｎ Ｔ Ｔ３３β－ 甘露聚糖酶的产生条件和酶学性质．其产酶的最佳碳源为 １％ 槐豆角,最佳氮源为 １％ 蛋白胨＋ ０．２％ 酵母膏,发酵培养３６ｈ 产酶量最高（达 ６１．３ｕ／ｍ ｌ）．甘油、葡萄糖、甘露醇等对产酶有强的阻遏作用．经分离纯化后测得纯酶的分子量为３８．９ Ｋ Ｄ,等电点 ｐ Ｉ为３．０,酶反应最适 ｐ Ｈ 为 ９．０～１０．０,最适温度为８０℃,稳定 ｐ Ｈ 为６．０～９．０,稳定温度为６０℃以下,金属离子中 Ｃｕ２＋ , Ｂａ２＋ , Ｍ ｇ２＋ , Ａｌ３＋ , Ｃｏ２＋ 对该酶有一定的激活作用,而 Ａｇ＋ , Ｈｇ２＋ , Ｍｎ２＋ 对该酶有明显抑制作用     

长毛对虾碱性磷酸酶性质

从长毛对虾内脏物分离提纯碱性磷酸酶，经快速蛋白液相色谱（ＦＰＩＣ）检验为单一蛋白纯．研究该酶的性质，酶的紫外吸收特征峰在２７８ｎｍ处，荧光激发峰在２８２ｎｍ处，发射光谱特征峰在３４０ｎｍ处．酶的分子量为８２０００道尔顿．酶水解ＰＮＰＰ的最适温度为４７℃、最适ｐＨ为８．２．在３７℃、ｐＨ８．３下，酶的Ｋｍ值为８．０×１０－４ｍｏｌ／Ｌ．Ｍｇ２＋对该酶有激活作用，Ｃｕ２＋、Ｈｇ２＋甲醇、乙醇，乙二醇则表现抑制作用．Ｈｇ２＋的抑制作用表现为反竞争性类型，其抑制常数为９．０×１０－５ｍｏｌ／Ｌ．     

拟除虫菊酯对昆虫ATPse的影响研究

美洲大蠊中枢神经系统ＡＴＰａｓｅ活力测定的最适应条件是：对于Ｎａ＋Ｋ＾＋－ＡＴＰａｓｅ,蛋白质含量５－１０μｇ,ｐＨ值７．０,反应温度３０℃,反应时间１５ｍｉｎ．Ｋｍ和Ｖｍａｘ分别为５．３８＊１０＾－３ｍｏｌ／Ｌ和１４３．７５ｎｍｏｌ／ｍｉｎ．ｍｇ＾－１,Ｃａ＾２＋－Ｍｇ＾２＋－ＡＴＰａｓｅ基本相同。     

木霉4131菌株纤维素酶的分离纯化和部分性质研究

绿色木霉（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ Ｖｉｒｉｄｅ）突变菌株４１３１＾［１］产生的纤维素酶经过ｓｅｐｈａｄｅｘＧ－７５和ＤＥＡＥ－ｓｅｐｈａｄｅｘ－Ａ－２５两种层析分离,分离得到具有内切α－葡聚糖酶（ＣＭＣａｓｅ）活性的纯组分,提纯后酶的比活力提高到原来的２６．２倍;回收率为３２．８％,分子量为５６９００,等电点为４．０,最适反应温度为５５℃,最适ｐＨ为４．５,金属离子Ｋ＾＋,Ｎａ＾＋,Ｍｇ＾２＋对其     

棒曲霉UA—2木聚糖酶的蔗渣固态发酵

棒曲霉（Ａｓｐｅｒｇｉｌｕｓｃｌａｖａｔｕｓ）ＵＡ－２固态发酵蔗渣产木聚酶的培养基为每克蔗渣加营养液５ｍｌ，初始ｐＨ８．５．营养液的适宜组成为每升含：ＮＨ４ＮＯ３１０ｇ、Ｋ２ＨＰＯ４６ｇ、ＭｇＳＯ４·７Ｈ２Ｏ０．７５ｇ、ＣａＣｌ２０．７５ｇ、ＦｅＳＯ４·７Ｈ２Ｏ１１．２５ｍｇ、ＭｎＳＯ４·Ｈ２Ｏ３．７５ｍｇ、ＺｎＳＯ４３．０ｍｇ、ＣｏＣｌ２４．５ｍｇ．在上述培养基中接入其湿重１０％（Ｗ／Ｗ）的新鲜的ＵＡ－２种子曲，２８℃培养１０８ｈ，其木聚糖酶，滤纸降解酶和羧甲基纤维素酶的活力分别为２６９５．６、２８．５和４２．７ｕ／ｇ蔗渣．酶反应的最适ｐＨ５．０，最适温度５０℃；在ｐＨ４．０～１１．０内酶活性十分稳定．５０℃保温１ｈ，酶活剩余５５％，８℃下放置２３ｄ，活力几乎不变．磷酸盐，半胱氨酸对酶有激活作用，ＥＤＴＡ和对氯汞本甲酸对酶有抑制作用     

胃蛋白酶催化壳聚糖降解的特性研究

采用粘度测定法和还原糖测定法,研究了温度、ＰＨ值、反应时间、底物浓度、金属离子及壳聚及壳聚糖的脱乙酰化度对胃蛋白酶降解活性的影响,确定了以壳 底物的猪胃酶的一些催化特性：最适温度为７０℃,最适ＰＨ值为５．０,米氏常数Ｋｍ为８．９４＊１０＾－３ｇ．ｍＬ＾－１,一定浓度的Ｃａ＾２＋,Ｃｕ＾２＋,Ｂａ＾２＋,Ｍｎ＾２＋抑制该酶的活性。结果表明,随着壳聚糖脱乙酰化度的提高,胃蛋白酶活性降低。     

解脂假丝酵母胞外脂肪酶的提纯和性质

通过ＤＥＡＥ－ＣｅｌｌｕｌｏｓｅＤＥ－５２和ＤＥＡＥ－ＳｅＰｈａｄｅｘＡ－５０离子交换层析等提纯步骤，对解脂假丝酵母胞外脂肪酶进行了纯化，得到了层析纯样品，比活提高２７．４倍，得率１１％．该酶反应最适温度为４０℃；最适ＰＨ为７．５；等电点约在ＰＨ４．５～５．０之间；８℃以下存放，酶活力损失较少，３０℃以上存放，酶活力有明显损失．金属离子Ｓｒ２＋，Ｂａ２＋，Ｚｎ２＋和Ｍｇ２＋对该酶的激活作用为Ｓｒ２＋＞Ｂａ２＋＞Ｚｎ２＋＞Ｍｇ２＋．Ｃｕ２＋和Ｎａ＋对酶活性有抑制作用．ＮａＮ３对保持酶活性有重要作用．     

木聚糖降解菌的筛选和木聚糖酶性质的研究

筛选两株生长快、产木聚糖酶活力高的菌种；黑曲霉（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｎｉｇｅｒ，ＡＮ０１）、链霉菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｓｐ．Ｓｔｒ７Ｂ），酶活力分别达１２８ｍｇ／Ｌ·ｍｉｎ和１７６ｍｇ／Ｌ·ｍｉｎ；酶反应最适温度分别为６０℃与５０℃；最适ｐＨ值为５．０和６．０，并分别在ｐＨ２．２～５．０，５．８～６．４酶活性稳定；在６０℃条件下保温１．５ｈ，酶活力分别剩余２０．５％，８８．５％，其中ＡＮ０１株原酶液在９０℃保温１０ｍｉｎ，活力仍剩余１４．５％．Ｃｕ２＋对酶活表现出极强抑制，Ｆｅ２＋，Ｍｇ２＋，Ｃａ２＋等离子则有促进作用；用纸层析法探讨了不同培养时间各种产物产生的情况．     

产耐热蛋白酶菌株的分离和酶性质的研究

从南汇县黄路乡一草堆下的土壤中分离到一株产耐热蛋白酶的链霉菌。该酶的最适反应温度为７０℃。在６０℃时稳定，当８０℃时处理１０ｍｉｎ，尚余８４％活性。在Ｃａ＾２＋存在的条件下，酶的热稳定性有显著提高。酶反应的最适ｐＨ为８．５，在ｐＨ５～９之间稳定，因此属于微碱性蛋白酶。通过抑制剂试验，该酶基本上被ＰＭＳＦ（苯甲基磺酰化合物）抑制，但不被金属螯合剂（ＥＤＴＡ，双吡啶）抑制。金属离子Ｃｕ＾２＋，Ｚｎ＾２     

生淀粉糖化菌NL—3的发酵条件

以黑曲霉（Ａｓｐｅｒｇｉｌｕｓｎｉｇｅｒ）５２３原生质体为对象,经激光、紫外线和亚硝基胍复合诱变,选育出高产生淀粉糖化酶突变株黑曲霉ＮＬ３,其生淀粉酶活力为１５６Ｕ／ｍｌ．产酶最适培养条件为：起始ｐＨ４５,３０℃,９６ｈ产酶量达最高．Ｋ＋,Ｍｇ２＋对ＮＬ３产生淀粉糖化酶有促进作用;Ｚｎ２＋对产酶有抑制作用．酶的最适作用条件为：以玉米淀粉为底物的最适温度５０℃,最适ｐＨ４５;以甘薯淀粉、马铃薯淀粉为底物时最适温度６０℃,最适ｐＨ４０～４５．酶在６０℃保温１５ｍｉｎ,玉米淀粉为底物时酶剩余活力为８０％;甘薯淀粉、马铃薯淀粉为底物时酶剩余活力为９８％．     

云芝胞外漆酶活性研究

研究了云芝在ＰＤＹ培养基中的漆酶活性;漆酶的产酶高峰在第９天出现,酶反应的最适温度为２５℃,最适酸碱度为ｐＨ４．６,Ｋ＾＋,Ｚｎ＾２＋等离子可提高漆酶的活性,而Ａｇ＾＋离子则以漆酶活性有明显的抑制作用。     

灵芝纤维素酶的纯化和性质研究

从七种食用和药用真菌中筛选出纤维素分解能力较强的灵芝菌株（Ｇａｎｏｄｅｒｍａｌｕｃｉｄｕｍ５００５９），比较了几种不同碳源的固体发酵培养基对灵芝５００５９产内切β－葡聚糖酶（又称羧甲基纤维素酶，ＣＭＣ酶）能力的影响，确定了最佳培养时间为５～６ｄ。通过硫酸铵沉淀、凝胶过滤和离子交换层析初步提纯了灵芝的ＣＭＣ酶，得到三个组分。其中一个组分在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳中为一条带，为单亚基分子，分子量为４．５×１０４，等电点为３．２，以ＣＭＣ－Ｎａ为底物的米氏常数（Ｋｍ）为７．２ｇ／Ｌ。该酶活力的最适温度为５０℃，半致死温度约６７℃。该ＣＭＣ酶组分在ｐＨ３．０～６．０范围内稳定，最适ｐＨ约为２．０和４．０。     

黑曲霉单宁酶的纯化及部分性质研究

黑曲霉在五倍子单宁的诱导下产生单宁酶。通过（ＮＨ４）２ＳＯ４分形沉淀,ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ离子交换层析,Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－１５０凝胶过滤,从黑曲霉的发酵液和菌丝中纯化得到凝胶电泳均一的单宁酶。酶作用的最适温度为３０℃,最适ｐＨ值为５．５,在温度１０－３０℃和ｐＨ４－６之间保持稳定,金属离子对单宁酶没有的激活作用,Ｆｅ＾２＋和Ｍｎ＾２＋则对酶有抑制作用。     

福寿螺β-葡萄糖苷酶的分离纯化及性质的初步研究

以福寿螺内脏为材料,经本实验室开发的工业生产法制备粗酶粉,进一步采用葡聚糖凝胶（ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２００）和ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ－５０柱层析纯化,获得经ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定为单一纯的β－葡萄糖苷酶制剂．测定该酶的最适反应温度为４３℃,最适反应ｐＨ为５．１;在ｐＨ５．１,４５℃下,该酶催化水杨素水解的Ｋｍ值为３．４０ｍｍｏｌ／Ｌ,活化能为５０．６３ｋＪ／ｍｏｌ．研究几种效应物对酶活力的影响,结果表明：Ｍｎ２＋、Ｃｏ２＋对酶有激活作用,而Ｃｕ２＋、Ｈｇ２＋、Ｐｂ２＋、ＳＤＳ及脲对酶有不同程度的抑制作用,其中Ｃｕ２＋和Ｈｇ２＋对该酶的抑制作用最强,其抑制机理均表现为非竞争性抑制     

黑曲霉AJ1958菊粉酶的产生和性质

从菊芋根际土壤中分离出一株菊粉酶（ＩｎｕｌｉｎａｓｅＥ．Ｃ．３．２．１．７）产生菌，经物理和化学诱变得高酶活黑曲霉突变株ＡＪ１９５８．该菌株在培养基（０．０７ｇ／ｍＬ菊芋提取液１０００ｍＬ，豆饼粉５ｇ，麸皮５ｇ，ＫＣＩ０．７ｇ，ＦｅＳＯ４·７Ｈ２Ｏ０．０１ｇ，ＭｇＳＯ４·７Ｈ２Ｏ０．５ｇ，ＰＨ５．０）中，于３０℃振荡培养３ｄ，酶活力可达６４μｍｏｌ·ｍｉｎ－１．酶水解反应的最适ＰＨ为３．０～４．０，最适温度为６０℃，在ＰＨ２．５～５．５的范围内和７５℃以下较稳定．适宜条件下，１０ｈ内０．０５ｇ／ｍＬ的菊粉溶液中之底物几乎１００％被酶水解．产物糖中果糖质量分数为９３％，葡萄糖质量分数为５．６％．该突变株产生的菊粉酶具有较满意的水解性和热稳定性．     

重金属离子对扁玉螺细胞色素氧化酶的影响研究

测定子扁玉螺肝脏中细胞色素氧化酶活力,其最适温度为４４℃,最适ＰＨ值７．０研究了Ｆｅ＾３＋,Ｃｕ＾２＋,Ｚｎ＾２＋三种重金属离子在离体条件下对该酶的影响,结果显示：低浓度的Ｆｅ＾３＋Ｃｕ＾２＋对其具有激活作用,高浓度的Ｆｅ＾３＋,Ｃｕ＾２＋及低浓度的Ｚｎ＾２＋对其具有显著的抑制作用。     

绿色木霉固态发酵产纤维素酶条件及酶性质的研究

对绿色木霉 Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ　ｖｉｒｉｄｅ９４０５固态发酵产纤维素酶的条件及酶的性质进行了研究。结果表明,最适产酶条件为：秸秆粉与麸皮的比 ７：３;玉米秸秆粉培养基含水量２５０％;花生皮粉培养基含水量１５０％;ｐＨ４．０～４．５;温度３０℃;周期７２ｈ。在玉米秸秆粉固体培养基上,所产纤维素酶ＣＭＣ活力为１３８６ｕ／ｇ,ＦＰＡ活力为２１７ｕ／ｇ,棉花糖化力为３２５ｕ／ｇ。必作用的最适条件为ｐＨ４． ５～５． ０,温度 ５０℃;在 ４５℃以下, ｐＨ３． ５～６． ０之间比较稳定,室温放置半年,酶活保存率在９０％以上。     

阿霉素金属配合物及其与氨基酸的作用

采用紫外－可见光度法和荧光光度法研究了ｐＨ７．０条件下,阿霉素与金属离子,生物小分子的相互作用。结果表明,Ｆｅ＾２＋,Ｃｕ＾２＋与阿霉素可形成稳定的配合物,Ｍｇ＾２＋,Ｎｉ＾２＋,Ｃｏ＾２＋与阿霉素有较弱的相互作用,在氨基酸存在下,Ｃｕ－ＡＤＭ配合物发生解离,而Ｆｅ－ＡＤＭ相对较稳定。     

带鱼内脏蛋白酶的性质

带鱼内脏提取液的蛋白酶活力，在ＰＨ２．２￣９．０之间有三个峰值出现，这说明提取液中存在酸性（最适ＰＨ为３．６）、中性（最适ＰＨ为６．８）及碱性（最适ＰＨ为８．４）蛋白酶；这三类蛋白酶在作用时间为３０ｍｉｎ时，最适温度分别为５０℃，５０￣６０℃，５０￣６０℃，温度对酶水解速度影响很大，内脏蛋白酶在０℃的水解速度是最适温度的１．７５％￣２．７１％。ＮａＣｌ，ＦｅＣｌ３，ＺｎＳＯ４，ＣａＣＬ２，ＥＤＴＡ     

拟除虫菊酯对昆虫 ATPase 的影响研究

美洲大蠊中枢神经系统ＡＴＰａｓｅ活力测定的最适反应条件是：对于Ｎａ＋－Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ,蛋白质含量５～１０μｇ,ｐＨ值７．０,反应温度３０℃,反应时间１５ｍｉｎ．Ｋｍ和Ｖｍａｘ分别为５．３８×１０－３ｍｏｌ／Ｌ和１４３．７５ｎｍｏｌ／ｍｉｎ·ｍｇ－１．Ｃａ２＋－Ｍｇ２＋－ＡＴＰａｓｅ基本相同,只是ｐＨ值为７．４,Ｋｍ和Ｖｍａｘ分别为２．６４×１０－４ｍｏｌ／Ｌ和４６．２８ｎｍｏｌ／ｍｉｎ·ｍｇ－１．初步研究了氯氰菊酯及氰戊菊酯的不同异构体对ＡＴＰａｓｅ的影响,结果显示均对ＡＴＰａｓｅ有不同程度的抑制,与生测结果不完全一致．