辣椒抗菌蛋白cDNA的分离与表达的初步分析

本研究从经辣椒疫霉侵染处理的辣椒叶片cDNA文库中分离获得了一个辣椒抗菌蛋白cDNA阳性克隆,其长度为255bp,含有长度为85个氨基酸的开放读码框架,与其它植物抗菌蛋白或几丁质酶有不同程度的同源性,推测为辣椒抗菌蛋白,命名为CansLTPS.cDNA-AFLP分析表明,CansLTPS的转录受UV-B照射和辣椒疫霉侵染的诱导,外源脱落酸(ABA)、乙烯(ETH)、水杨酸(SA)等可不同程度的诱导CansLTPS基因的转录,而MeJA处理对CansLTPS基因的转录表达影响不大,表明CansLTPS基因可应答生物和非生物逆境胁迫,其上游可能涉及ABA、ETH、SA等介入的信号传递途径.     

水杨酸和镰刀菌酸对棉花 POD 和 PAL 的影响

比较了水杨酸和镰刀菌酸对棉花植株和棉花组织培养细胞中的过氧化物酶和苯丙氨酸解氨酶的影响,用镰刀菌酸和水杨酸分别处理棉花离体叶片,过氧化物酶与苯丙氨酸解氨酶的活性都提高,但是过氧化物酶同工酶不同．用水杨酸预处理棉花叶片可抑制镰刀菌酸的诱导作用．     

声波刺激对拟南芥基因表达的影响

运用银染mRNA逆转录差异显示(DDRT-PCR)技术,初步研究了声波刺激对拟南芥差异基因表达的影响.研究分离得到SA3、SG2-1、SG2-2、SG7-1、SG7-2、CA2共6个差异表达基因片段,进一步运用Northern点杂交确定SA3、CA2、SG7-1为阳性片段,其中SA3片段属于声波刺激特异表达基因, SG7-1片段属于声波刺激增强表达基因,CA2片段属于声波刺激抑制表达基因.研究结果表明植物在基因水平对声波刺激具有响应,为下一步探索植物响应声波应力的分子生物学调控机理奠定了基础.     

Analysis of Salicylic Acid Induced Proteins in Rice

ＳｉｎｃｅＷｈｉｔｅｏｂｓｅｒｖｅｄｔｈａｔｓｐｒａｙｉｎｇｔｏｂａｃｃｏｐｌａｎｔｓｗｉｔｈｓａｌｉｃｙｌｉｃａｃｉｄ (ＳＡ)ｏｒａｃｅｔｙｌｓａｌｉｃｙｌｉｃａｃｉｄｉｎｄｕｃｅｄｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｔｏｉｎｆｅｃｔｉｏｎｗｉｔｈｔｏｂａｃｃｏｍｏｓａｉｃｖｉｒｕｓ[1] ,ｍａｎｙｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓｈａｖｅｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅｄｔｈａｔＳＡｐｌａｙｓａｎｉｍｐｏｒｔａｎｔｒｏｌｅｉｎｐｌａｎｔｄｉｓｅａｓｅｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ,ａｃｔｉｎｇａｓａｎｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓｓｉｇｎａｌｍｏｌｅｃ…     

人Megalin基因四个结构域的cDNA克隆

以人肾脏组织cDNA为模板,用PCR技术克隆了编码人Megalin基因四个结构域的cDNA,并对其进行了测序.结果表明,编码人Megalin基因四个结构域的cDNA长度分别为863bp、1,008 bp、1,247 bp及1,359 bp.编码第一结构域的cDNA序列与GenBank报道的序列有99.9%的同源性,其中两个位点有差异(第457位和605位分别为C和G,而非G和A);其余三个结构域对应的基因序列与GenBank报道的序列完全相同.     

水稻几丁质酶基因(Oschi)cDNA的克隆及序列分析

 以成功克隆大蕉几丁质酶基因（MpChi-1）时设计的一对引物,采用RT-PCR技术从广亲和水稻品种（Oryza．satival L．Cpslo17）中扩增到一水稻几丁质酶的全长cDNA,长1 115 bp,命名为Oschi;此序列已在GenBank中注册,登录号为EU045451;将Oschi基因核苷酸测序结果在NCBI服务器上用BLAST搜索软件进行同源性基因检索;并将Oschi的cDNA序列及氨基酸序列与大蕉及其它单子叶植物的相应序列进行多重序列排列比较并构建系统树;结果显示此基因具有编码Ⅰ类几丁质酶的基本结构;与大蕉核苷酸序列相比同源性为99%,氨基酸序列同源性为99%,与预测登记的最相近的水稻［Oryza sativa(japonica cultivar-group)］核苷酸序列相比同源性为98%, 氨基酸序列同源性为98%;广亲和水稻Oschi基因与大蕉MpChi-1基因的序列及蛋白结构有较高的一致性。     

扁豆几丁质酶基因的克隆及表达

以扁豆总RNA为模板,通过RT-PCR技术扩增到长度为885 bp的扁豆几丁质酶基因cDNA,其编码294个氨基酸,目的蛋白的分子量为28.429 kDa.以该基因构建pET-21a-chi表达载体并在E.coli BL21(DE3)中表达.30℃下,用0.1 mmol.L-1IPTG,诱导5 h,表达产物的酶活力为36.25 U.mL-1.通过常压Sephadex G-50凝胶过滤色谱,DEAE-650C常压与高效离子交换色谱对表达产物进行纯化.目标蛋白达到电泳纯(SDS电泳一条带),几丁质酶的比活力108.42 U.mg-1.表达的蛋白质产物主要以可溶性形式存在.     

松梢枯病防治新技术及其机理研究

水杨酸和多效唑预处理可以减轻湿地松梢枯病的发生、水杨酸的效果尤佳。病原孢子萌发试验证明，多效唑具有抑菌或杀菌作用，而水杨酸对病原孢子萌发及菌丝生长均无抑制作用。因此认为水杨酸处理后是通过增强湿地松的抗性来抑制梢枯病的发生。经水杨酸和多效唑处理后，嫩梢中超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）活性明显上升。ＳＯＤ在湿地松抗梢枯病上可能起积极作用。较高浓度的水杨酸及阿斯匹林引起嫩梢苯丙氨酸解氨酶（ＰＡＬ）活性下降。说     

水杨酸处理对南瓜幼苗壮苗和抗寒能力的影响

以不同浓度水杨酸(SA)处理的南瓜幼苗,其中250 mg/L SA处理差异显著.从形态指标上表明SA处理可促进南瓜壮苗的形成.同时研究了4,15℃ 2种低温胁迫条件下最佳浓度水杨酸处理与25℃处理作为对照的南瓜幼苗抗寒性指标的变化.结果表明:经SA处理的脯氨酸、丙二醛与对照的差异极显著,外源SA能抑制脯氨酸的形成积累,且能提高南瓜幼苗叶片细胞膜的稳定性,抑制MDA形成积累.因此外源水杨酸能显著提高南瓜的抗寒性.     

棉蚜Para钠通道cDNA和基因组DNA片段的克隆和序列分析

采用降落 PCR技术 ,根据昆虫 para型钠通道 区 S4至 S6及 与 连接区的保守区域设计简并引物 ,成功地克隆了棉蚜 para型钠离子通道 c DNA和基因组 DNA片段 (Gene Bank登录号分别为 :AF4 114 5 5、AF4 475 74 ) ,其中 c DNA片段为 6 5 9bp,编码 2 2 0个氨基酸。利用 c DNA片段设计特异性引物克隆获的基因组DNA片段为 132 8bp,共有 2个内含子。Blast序列分析表明 ,PCR扩增获得的棉蚜 para型钠离子通道 c DNA片段所编码的氨基酸与其他昆虫的 para型钠通道氨基酸具有很高的同源相似性 ,与马铃薯甲虫、德国小蠊、果蝇和家蝇的同源性分别为 6 5 %、6 3%、6 3%、5 9%。棉蚜 para型钠离子通道 c DNA和基因组 DNA片段的克隆对于农药分子设计与害虫抗性机制 ,特别是靶标抗性分子监测具有重要意义。     

Cloning a Full—length cDNA Encoding UDP—glucose Pyrophosphorylase from Amorpha fruticosa by PCR—based Methods

A method based on degenerate Oligo-primed polymerase chain reaction(PCR) and randomamplification of cDNA end (RACE) PCR for cloning a full-length cDNA is described.An Amorpha fruticosa cDNA clone encoding UDP-glucose pyrophosphorylase(UGP),a key enzyme producinng UDP-glucose in the synthesis of sucrose and cellulose,is cloned by using this method.We design 5‘ RACE rpimers based on UGPA1 fragment ,which obtains from degenerate PCR.Inverse PCR and nested PCR enable cloning of the remainder 5‘ and 3‘ end fragments of the gene.The deduced amino acid sequence xhibits significant homology with the other UGP genes cloned.This method is more simple and inexpensive than screening cDNA library,and can be easily adapted to clone other genes.     

Induction of phenylalanine ammonia-lyase and lipoxygenase in cotton seedlings by mechanical wounding and aphid infestation

Plants have developed a multitude of inducibledefense mechanisms against aggressive biotic and abi otic agents[1]. Wound and herbivory induced plantresponses can negatively affect herbivore’s physiologydirectly by stimulating the synthesis of toxic metabo lites[2—4]. In addition to such direct defense mecha nisms, plants can also emit specific blends of volatilesthat attract carnivorous enemies to defend themselvesagainst herbivores[5—9].Herbivory induced plant volatiles can n…     

大蕉冷诱导差减文库的构建与分析

以低温处理的大蕉幼苗cDNA为检测子,未处理的大蕉幼苗cDNA为驱赶子,利用抑制性差减杂交技术(suppression subtractive hybridization,SSH)构建了大蕉幼苗冷诱导差减cDNA文库,通过点杂交差异筛选cD-NA文库,得到约50个低温下表达增强的候选克隆,对其进行DNA测序和同源性比较,发现获得的ESTs在功能上主要涉及信号传导、表达调控、非生物胁迫防御、蛋白质加工和能量代谢等方面。该SSH文库的构建为克隆大蕉抗寒相关基因奠定了基础。     

外源胁迫对水稻内源茉莉酸和水杨酸的影响

茉莉酸和水杨酸是植物防御反应中的重要分子，为研究茉莉酸和水杨酸在水稻防御反应中的作用，采用了色谱法测定了此两种激素在外源植物生长调节剂胁迫下的水平变化。我们采用的此方法简单，灵敏度高，再现性好，此两种激素含量变化可得到准确分离与测定。我们的结果表明在水稻中茉莉酸和水杨酸的作用可能不同与其它植物。首先，水杨酸含量变化较缓慢，其次，茉莉酸含量变化较明显。此结果表明水稻中茉莉酸和水杨酸的作用可能不同与烟草和拟南介，在信号传递过程中可能起到正面的调节作用。     

水稻矮化突变体差异表达cDNA片段的克隆与分析

利用抑制性消减杂交（Suppressive subraction hybridization,SSH）分离本实验室获得的一株水稻矮化突变体dwarf69与其野生型对照品系特光矮-2（Rryza sativa,TGA-2 indica）间表达有差异的cDNA片段,分别以dwarf69作为驱赶子,TGA-2为检测子,以及以dwarf69作为检测子,TGA-2为驱赶子建立了两个差异表达cNDA文库,分别代表在TGA-2和dwarf69中特异表达的cDNA,经反式Northern检测这两个文库共得到10个阳性克隆。     

BMP－3及BMP－5在不同组织和细胞中的表达

报道ＢＭＰ－３及ＢＭＰ－５在不同组织细胞中的表达．将人的神经母细胞瘤ＳＫ细胞的总ＲＮＡ及人的脑、肝、胸腺、脾、胎盘及睾丸的总ＲＮＡ反转录成ｃＤＮＡ作为模板，利用设计的编码ＢＭＰ－３和ＢＭＰ－５成熟蛋白的专一性引物分别扩增出相应的片段．ＰＣＲ产物的琼脂糖凝胶电泳结果表明，ＢＭＰ－３及ＢＭＰ－５在不同组织细胞中表达类型不同．     

PCR法快速鉴定阳性克隆实验的改进

分析了常规PCR扩增鉴定阳性克隆实验中存在的问题,进行了改进探索:反转录PCR(RT-PCR)获得目的基因片段,TA克隆连接质粒载体、转化大肠杆菌感受态细胞;利用目的基因的特异性引物,用菌液PCR法直接筛选重组克隆,在筛选的阳性菌液中扩增到与目的基因片段大小一致的阳性条带,与质粒PCR及酶切的阳性对照一致,验证了菌液PCR具有可靠性。实验证明,自身引物菌液PCR法用于定性筛选重组阳性克隆,是一种简便、快速、有效的方法。     

一株生防烟管菌几丁质酶表达及抗真菌活性

为了探究烟管菌BK-1的生物防治潜力,本研究测试了一株具有生防菌活性的烟管菌BK-1的抗病效果,并使用RT-qPCR分析了该菌株的8个细胞壁裂解酶基因在与不同病原真菌对峙培养中的表达水平,结果表明,在应对链格孢、茄链格孢、尖孢镰刀菌和灰葡萄孢这4种病原真菌时,几丁质酶基因BaCHIB表达上调了27.3至50.3倍,远高于其他7个基因.BaCHIB属于糖苷水解酶18家族(GH 18),并具有Chic_BD结构域,属于B类几丁质酶(CHIB).结合基因表达谱分析,该基因诱导表达上调情况的出现与抗病效果的出现高度同步.外源表达蛋白BaCHIB显示出较高的几丁质酶活性,且表现出对多种植物病原真菌,包括链格孢,链格孢和灰葡萄孢显著的抗真菌活性,显示其对部分病原真菌具有拮抗能力.     

平颏海蛇CRVP基因全长cDNA片段的克隆和序列分析

通过对平颏海蛇毒腺cDNA文库的随机测序和PCR筛选,克隆得到两种分别长为1309和1307bp的编码半胱氨酸丰富毒蛋白（cysteine-rich venom protein,CRVP）的全长cDNA序列。这两种crvp基因同源性为97％,分别编码238和199个氨基酸残基,其中包括一段相同的由19个氨基酸残基组成的信号肽。氨基酸序列分析表明,这两种CRVP蛋白与蜥蜴helothermine毒素蛋白以及台湾饭铲倩CRVP毒蛋白高度同源,而且具有半胱氨酸丰富分泌蛋白（cysteine-rich secretory protein,CRISP)家族的典型结构特征。