枯草杆菌AS1．398制备中性蛋白酶的研究

本文研究了枯草杆菌ＡＳ１．３９８发酵培养制备中性蛋白酶，对发酵培养基配比，培养条件，金属离子的影响等进行了摇瓶试验。制备的ＡＳ１．３９８中性蛋白酶有如下性质：最适ＰＨ７．２－７．４，在ＰＨ６．５－８．０稳定。最适温度４２－４４℃，３５℃下处理２小时能保持约８５％酶活力，６０℃下１０分钟酶完全失活，此酶被ＥＤＴＡ和Ｃｕ２＋所抑制     

带鱼内脏蛋白酶的性质

带鱼内脏提取液的蛋白酶活力，在ＰＨ２．２￣９．０之间有三个峰值出现，这说明提取液中存在酸性（最适ＰＨ为３．６）、中性（最适ＰＨ为６．８）及碱性（最适ＰＨ为８．４）蛋白酶；这三类蛋白酶在作用时间为３０ｍｉｎ时，最适温度分别为５０℃，５０￣６０℃，５０￣６０℃，温度对酶水解速度影响很大，内脏蛋白酶在０℃的水解速度是最适温度的１．７５％￣２．７１％。ＮａＣｌ，ＦｅＣｌ３，ＺｎＳＯ４，ＣａＣＬ２，ＥＤＴＡ     

离子敏感微电极的制作及参数测试

本文制作了Ｋ＋，Ｎａ＋液态膜离子敏感微电极（Ｋ＋，Ｎａ＋—ＩＳＭＥ），并稳定了其制作条件，经测试，Ｋ＋—ＩＳＭＥ线性范围为１—１０－４ｍｏｌ／Ｌ，检测下限为３．０×１０－６ｍｏｌ／Ｌ。对Ｎａ＋选择系数为２．６８×１０－４。电位飘移为±０．１ｍＶ／ｈ。Ｎａ＋—ＩＳＭＥ线性范围为１—２．０×１０－ｍｏｌ／Ｌ，检测下限为５．０×１．０－４ｍｏｌ／Ｌ。对Ｋ＋的选择系数为１．８５×１０－２，对Ｃａ２＋的选择系数为１．４６。上述参数均满足生理实验要求，离子敏感微电极技术可做为生理学研究的重要手段。     

牛血红细胞铜锌超氧物歧化酶的纯化及性质

牛血红细胞铜锌超氧物歧化酶经氯仿－乙醇混合液处理，丙酮沉淀，凝胶过滤和ＤＥＡＥ－纤维素柱层析等步骤提取和纯化．纯化酶在聚丙烯酰胺凝胶电脉（ＰＡＧＥ）图谱上的两条蛋白染色带和活性染色带相互对应，在ＳＤＳ—ＰＡＧＥ聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱上呈现单一区单一区带，说明该酶已纯化到均一程度．此酶分子量为３４０００，亚基分予量为１７０００，在紫外区最大吸收值为２５８ｎｍ．该酶对ＫＣＮ和Ｈ２Ｏ２均敏感，在０～７５℃温度范围内对热稳定．纯化酶的比活性为７４６３Ｕ／ｍｇ，纯化１００９倍，酶的回收率为７９％．     

酿酒酵母不同嗜杀菌株的比较及相互作用

以酿酒酵母两种不同类型的嗜杀菌株ＳＫ４（Ｋ１型）和ＥＲＲ１（Ｋ２型）为材料，分析了不同嗜杀酵母的嗜杀特性．证明两株菌产生的毒素蛋白的最适条件不同，最适ｐＨ和温度分别为４．８、１６℃和４．２、２２℃，但均对在对数生长期的敏感细胞作用最显著．ＳＫ４和ＥＲＲ１的嗜杀质粒的比较表明：Ｍ１－ｄｓＲＮＡ质粒和Ｍ２－ｄｓＲＮＡ质粒分子量分别为１．７ｋｂ和１．５ｋｂ，两株菌的Ｌ－ｄｓＲＮＡ质粒均为４．０ｋｂ．用高温和紫外线处理嗜杀酵母，嗜杀活性随之消失．     

制备条件对Pd／Al_2O_3催化棉籽油加氢活性的影响

使用ＳＥＭ，ＥＤＳ，ＥＰＭＡ，ＸＲＤ及ＸＰＳ对在不同温度下，于空气气氛中焙烧的负载型钯催化剂Ｐｄ／Ａｌ２Ｏ３进行了表征，结合对棉籽油的加氢反应，分析了焙烧温度对Ｐｄ／Ａｌ２Ｏ３活性的影响．结果表明，４７３Ｋ下焙烧的Ｐｄ／Ａｌ２Ｏ３活性较好；高温（９７３Ｋ）下焙烧的Ｐｄ／Ａｌ２Ｏ３活性最差．欲制备高活性的Ｐｄ／Ａｌ２Ｏ３催化剂，必须严格控制焙烧温度．     

解脂假丝酵母胞外脂肪酶的提纯和性质

通过ＤＥＡＥ－ＣｅｌｌｕｌｏｓｅＤＥ－５２和ＤＥＡＥ－ＳｅＰｈａｄｅｘＡ－５０离子交换层析等提纯步骤，对解脂假丝酵母胞外脂肪酶进行了纯化，得到了层析纯样品，比活提高２７．４倍，得率１１％．该酶反应最适温度为４０℃；最适ＰＨ为７．５；等电点约在ＰＨ４．５～５．０之间；８℃以下存放，酶活力损失较少，３０℃以上存放，酶活力有明显损失．金属离子Ｓｒ２＋，Ｂａ２＋，Ｚｎ２＋和Ｍｇ２＋对该酶的激活作用为Ｓｒ２＋＞Ｂａ２＋＞Ｚｎ２＋＞Ｍｇ２＋．Ｃｕ２＋和Ｎａ＋对酶活性有抑制作用．ＮａＮ３对保持酶活性有重要作用．     

血清白蛋白在裸银电极上的直接电化学行为

本文研究了牛血清白蛋白在裸银电极上的直接电化学行为，在ＰＨ＝７．０的ＫＨ２ＰＯ４－Ｋ２ＨＰＯ４缓冲 溶液中，ＢＳＡ在裸银电极上有一对淮可逆的氧化还原峰，当扫描速度为２０ｍＶ／ｓ．ＢＳＡ浓度为１．２＊１０＾＆－７ｍｏｌ／Ｌ时，峰电位分别为＋０．２０Ｖ和＋０．０５Ｖｖｓ．ＳＣＥ。     

大豆分离蛋白酶解过程的研究与产物分析

将大豆蛋白（ＳＰＩ）经过Ａｓｌ．３９８中性蛋白酶水解，可以获得良好溶解性的多肽，氢基酸及ＩＳＳＰＨ等极有利用价值的大豆水解产物．本文探讨大豆分高蛋白经酶水解后产物（ＳＰＨ）的水解度及粘度变化．通过ＳＤＳ－ＰＡＧＥ，半微量－凯氏定氮法，Ｇ－２５凝胶过滤，双缩脲法和茚三酮法分析ＳＰＨ的可溶上清液和不溶渣滓中成分变化情况，并探讨了水解大豆蛋白在食品上的应用．因为其在营养上有更多的优点，可以作为功能型食品的原料开发出具有生理活性作用的食品．     

小牛类表皮生长因子活性肽的高分子复合物质

小牛颌下腺通过中性抽提，硫酸按沉淀，ＣＭ５２和ＤＥ５２负吸附，ＳｏｐｈａｄｃＸＧ７５凝胶过滤得到一个具有类表皮生长因子活性的大分子多肽，该分子可在ＰＨ７．习，ＤＥ５２层析盐梯度洗脱分开成２７ＫＤ无活性的结合蛋白和６ＫＤ的具有表皮生长因子活性小肽。通过计算，该大分子为结合蛋白和类表皮生长因子活性肽１：１结合的三聚体，大分子复合物比类表皮生长因子小肽显示更高的生物活性。     

Bacterial growth blocked by a synthetic peptide based on the structure of a human proteinase inhibitor

Cysteine proteinases are important not only in the intracellular catabolism of peptides and proteins and in the processing of prohormones and proenzymes, but also in the penetration of normal human tissue by malignant cells and possibly microorganisms, including viruses. Cystatin C is a human cysteine proteinase inhibitor present in extracellular fluids. We have synthesized peptide derivatives mimicking the proposed proteinase-binding centre of cystatin C and find that they irreversibly inhibit cysteine proteinases. Several bacteria produce proteinases, so we tested a tripeptide derivative (Z-LVG-CHN2) for in vitro anti-bacterial activity against a large number of bacterial strains belonging to thirteen different species. It was found to inhibit specifically the growth of all strains of group A streptococci. The susceptibility of these human pathogens to the peptide was compared with that to well-established anti-streptococcal antibiotics such as tetracycline and bacitracin. Moreover, the peptide was active in vivo against group A streptococci: mice injected with lethal doses of these bacteria were cured by a single injection of Z-LVG-CHN2. The cysteine proteinase produced by group A streptococci was isolated and found to be inhibited by Z-LVG-CHN2; moreover, excess proteinase relieved the growth inhibition caused by the peptide derivative, suggesting that the antibacterial activity of Z-LVG-CHN2 is due to inhibition of this cysteine proteinase. This strategy of blocking proteinases with peptide derivatives that mimic naturally occurring inhibitors could be useful in the construction of new agents against other microorganisms, including viruses.     

内蒙古额吉淖尔盐碱湖嗜盐古菌的抗生素抗性及分泌的嗜盐菌素的抑菌性

本实验室从内蒙古额吉淖尔湖盐碱土样分离得到一株属于Natrinema属的嗜盐古菌。本文对其进行了抗生素抗性实验以及对其产生的嗜盐菌素进行了抑菌性研究。结果表明诺氟沙星对该菌具有较强的抑菌作用,头孢氨苄对该菌具有微弱的抑菌作用。通过测定抑菌圈的大小表明该菌株对抗生素具有一定的抗性。该菌株所生产的嗜盐菌素对蛋白酶K 较敏感,对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌具有抑菌作用。     

家蝇蛹血淋巴抗菌活性的诱导及相关蛋白/多肽的表达规律

对家蝇蛹血淋巴的抗菌活性进行了诱导，并用统计学逐步回归的方法和多项式回归的方法确定了抗菌相关蛋白／多肽，研究了其表达规律。结果表明，针刺、带菌针刺和超声波均能诱导家蝇蛹产生抗G^ 球菌的物质，而对G^-杆菌无效。在分子量低于18000的蛋白／多肽中，有两种物质（R5、R6）对抑菌活性有显著影响，它们的表观分子量分别在12000和7650左右，这两种蛋白／多肽均在诱导下表达。其中，R6对抑菌活性有极显著正贡献，而R5对抑菌活性有显著负贡献，推测R5为细胞生长促进因子。     

大肠杆菌诱导黄粉虫产生抗菌肽的提取及抑菌活性的测定

为了探究大肠杆菌对黄粉虫抗菌肽的诱导效果,采用不同方法处理的大肠杆菌诱导黄粉虫产生抗菌肽,经过诱导的黄粉虫于12、24、36、48、60、72 h时,分别粗提其中的抗菌肽,测定其浓度和抑菌活性,同时,统计了大肠杆菌诱导的黄粉虫体内细菌含量。结果表明:经诱导各个时间点的黄粉虫抗菌肽浓度均显著高于未诱导的黄粉虫组(P0.05),且在诱导48 h时产生的抗菌肽浓度最高,大肠杆菌和灭活大肠杆菌诱导黄粉虫产生的抗菌肽对3种细菌的抑菌直径均显著大于未诱导组,且对大肠杆菌抑菌力高于金黄色葡萄球菌和沙门氏菌(P0.05),大肠杆菌诱导48 h后的黄粉虫中细菌含量为9.5×10~4 CFU/g,低于国家规定标准饲料中细菌总数最低值2×10~6 CFU/g。提示,用大肠杆菌诱导黄粉虫能刺激黄粉虫产生高表达量的抗菌肽,并对大肠杆菌具有较强的抗菌性能且具有一定的安全性。     

煤工尘肺结核患者肺部细菌感染及耐药性研究

研究淮南矿区煤工尘肺结核患者肺部产超广谱β-内酰胺酶细菌感染及其耐药情况.对从煤工尘肺结核肺部感染患者痰标本分离的132株革兰阴性杆菌进行ESBLs检测,并对产ESBLs细菌进行药物敏感性检测.共计检出产ESBLs细菌31株,占全部测试菌株的23.48%,其中主要包括肺炎克雷伯菌15株,大肠埃希菌13株.产ESBLs细菌对氨苄西林均高度耐药;对头孢噻肟、头孢他定等第三代头孢菌素类也高度耐药;而头孢西丁对产ESBLs肺炎克雷伯菌及大肠埃希菌有较强的抗菌效果,但产ESBLs铜绿假单孢菌和阴沟肠杆菌对头孢西丁的耐药率却高达100%;除铜绿假单胞菌外的产ESBLs细菌对亚胺培南的敏感率极高;奈替米星、阿米卡星及氧氟沙星、环丙沙星对产ESBLs细菌抗菌作用较弱.淮南矿区煤工尘肺结核患者肺部产ESBLs细菌感染以产ESBLs肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌引起的肺部感染为主要要致病菌,亚胺培南可作为治疗产ESBLs细菌(铜绿假单胞菌除外)的首选药物,临床应采取措施以预防产ESBLs细菌肺部感染的发生.     

鱼皮胶原蛋白的纯化及酶解性质的研究

分别对鲨鱼、鲢鱼、草鱼、罗非鱼鱼皮的胶原蛋白进行提取、纯化并进行SDS PAGE电泳分析,对它们的酶解性质进行研究.结果表明,提取的胶原蛋白有较高纯度,是典型的I型胶原蛋白.4种鱼皮胶原蛋白均能被胰蛋白酶和蛋白酶K水解,两种酶酶切位点有差异.不同鱼种鱼皮胶原蛋白的一级结构不同.本实验的酶解条件是适宜的.     

短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)X93胞外产物对病原弧菌抑制效果的研究

采用平板扩散法对从健康大黄鱼肠道中分离筛选到的对病原弧菌有抑制作用的短小芽孢杆菌(Bacillus pumi-lus)X93胞外产物(Extracellular products,ECP)作用的环境影响因子进行了研究。结果显示,菌株X93胞外产物的抑菌活性强弱随着培养时间的不同而不同,胞外产物对pH条件有一定的耐受性,对热敏感,不耐高温,过高的NaCl能使其抑菌活性降低,蛋白酶K和不同浓度的FeCl3均对其抑菌活性产生影响,其胞外产物发挥最大抑菌作用的最适培养时间、温度、pH、盐度分别为48 h、28℃、pH 7和0.5%。     

A peptide fusion protein inhibits angiogenesis and tumor growth by blocking VEGF binding to KDR

Vascular endothelial growth factor (VEGF) binding to its tyrosine kinase receptors (KDR/FLK1, Flt-1) induces angiogenesis. In search of the peptides blocking VEGF binding to its receptor KDR/FLK1 to inhibit tumorangiogenesis and growth, we screened a phage display peptide library with KDR as target protein, and some candidate peptides were isolated. In this study, we cloned the DNA fragment coding the peptide K237 from the library, into a vector pQE42 to express fusion protein DHFR-K237 in E. coli M15. The affection of fusion protein DHFR-K237 on endothelial cell proliferation and angiogenesis was investigated. In vitro, DHFR-K237 could completely block VEGF binding to KDR and significantly inhibit the VEGF-mediated proliferation of the human vascular endothelial cells. In vivo, DHFR-K237 inhibited angiogenesis in chick embryo chorioallantoric membrane and tumor growth in nude mice. These results suggest that K237 is an effective antagonist of VEGF binding to KDR, and could be a potential agent for cancer biotherapy.     

纤维结合素多肽衍生物的化学合成及对骨髓瘤细胞株K562的体外抑制作用

应用固相多肽合成技术，人工合成了一种衍生于纤维结合素的六肽ＧＲＧＤＳＳ。用高效液相层析进行纯度鉴定，并观察六肽对骨髓瘤细胞株Ｋ５６２的体外抑制作用。实验结果表明，六肽在７２ｈ内对骨髓瘤细胞的抑制率为３１％；多肽的结构对功能有一定的影响。根据竞争抑制原理，设计和合成多功能的多肽可为临床医学治疗肿瘤开辟一个新的途径。     

宣威火腿中抗菌肽的分离、纯化及鉴定

为探究干腌火腿中生物活性多肽的抗菌活性及其组成,选取产自中国云南省曲靖地区的宣威火腿为材料,通过缓冲液浸提的方法提取火腿中的多肽成分。以粗提多肽对单增李斯特菌和O157型大肠杆菌的生长抑制情况为指标进行抗菌性评价,同时结合离子交换色谱、尺寸排阻色谱等技术对宣威火腿粗多肽进行分离与纯化,并选取其中抑菌活性较强的组分进行氨基酸序列测定。抑菌实验发现宣威火腿粗多肽具有显著抑制单增李斯特菌和O157型大肠杆菌生长的效果；经过逐级分离纯化得到的各组分具有不同的抑菌活性。其中组分7活性最强,对大肠杆菌和李斯特菌的抑菌率分别为98%和56%。通过Nano-LC-ESI-MS/MS肽序列鉴定,最终得到抑菌活性较强的多肽序列,分别为QYYNGEEHVRFDSDVGEYR、LRNLPNLEVLDLGTNFI、FASFEAQGALANIAVDK。将鉴定得到的3条多肽化学合成后进行抑菌实验发现,合成多肽均具有较好的抑菌效果,对O157型大肠杆菌的生长抑制效果均显著高于单增李斯特菌。研究结果表明宣威火腿中含有抑菌效果的肽类成分,从而为阐释宣威火腿多肽的功能特征提供理论依据。