超声激活血卟啉对SW-480癌细胞的杀伤作用

采用1．1MHz,0．9W／cm^2低强度超声,结合血卟啉对体外培养的人肿瘤细胞SW—480进行声照处理,通过噻唑蓝(MTT)法、PI,HO双荧光染色等方法,根据癌细胞形态结构和功能的变化,探讨超声激活血卟啉对肿瘤细胞的杀伤作用。结果表明：血卟啉对癌细胞无明显的损伤,超声加血卟啉处理30s是引起SW—480细胞受损的敏感位点,90s为杀伤癌细胞的优选时间段;杀伤作用呈癌细胞显微结构逐步破坏的变化,并随声照时间的延长而加剧;声照时间在30s至90s区间细胞具有明显凋亡特征,提示超声激活血卟啉杀伤癌细胞机制中可能存在诱导肿瘤细胞凋亡的作用。     

超声结合原卟啉Ⅸ对艾氏腹水瘤细胞的杀伤作用

通过台盼蓝拒染法,以细胞存活率为指标用扫描电镜观察超声激活原卟啉Ⅸ(Protoporphyrin Ⅸ,PP Ⅸ)对艾氏腹水肿瘤(Ehrlich ascites tumor,EAT)细胞的杀伤作用;采用硫代巴比妥酸法检测超声激活PP Ⅸ对EAT细胞膜脂质过氧化水平的影响,研究超声激活Ⅸ对EAT细胞的杀伤效应.结果显示,超声结合PP Ⅸ杀伤EAT细胞与超声强度、处理时间及PP Ⅸ药物浓度呈正相关,超声结合PP Ⅸ对EAT细胞的损伤显著高于单纯超声组,而单纯PP Ⅸ表现出无明显的细胞毒作用;超声激活PP Ⅸ后膜的脂质过氧化水平显著增加.实验表明超声激活PP Ⅸ对EAT细胞具有明显的协同杀伤效应,推测可能是超声激活PP Ⅸ增加了膜脂质过氧化量,从而使细胞受损,并且质膜可能是超声激活PP Ⅸ杀伤EAT细胞的主要靶点之一.     

超声激活血卟啉对K_(562)肿瘤作用的研究

研究了超声激活血卟啉对人体肿瘤细胞Ｋ５６２的作用,以及声参量和血卟啉浓度对瘤细胞杀伤率的影响．结果表明,声参量和血卟啉浓度与瘤细胞杀伤率呈正相关．当频率为１．８ＭＨｚ,声强度为１．５Ｗ／ｃｍ２,作用时间为６０ｓ,血卟啉浓度为２００μｇ／ｍＬ时,超声激活血卟啉对Ｋ５６２肿瘤作用效果较佳,杀伤率达９８％,超声单独作用,杀伤率仅为４２％．单纯血卟啉无抗肿瘤效应．     

肿瘤免疫肿瘤免疫:肿瘤治疗的新希望

随着肿瘤学、免疫学及分子生物学等相关学科的迅速发展和交叉渗透,肿瘤免疫治疗技术突飞猛进,成为肿瘤治疗新的热点。肿瘤免疫治疗是应用免疫学原理和方法,提高肿瘤细胞的免疫原性和对效应细胞杀伤的敏感性,激发和增强机体抗肿瘤免疫应答,并应用免疫细胞和效应分子输注宿主体内,协同机体免疫系统杀伤肿瘤、抑制肿瘤生长。在某些肿瘤,如黑色素瘤、非小细胞肺癌等,免疫治疗展现出强大的抗肿瘤活性,部分免疫治疗药物已经获得美国FDA批准。2013年《Science》杂志将肿瘤的免疫治疗评为年度最重要的科学突破。免疫治疗成为继手术、放射治疗和化学治疗之后又一种重要的抗肿瘤治疗手段,成为攻克恶性肿瘤的希望。本文综述肿瘤免疫学的历史、发展规律、未来方向及中国的肿瘤免疫发展情况。     

肿瘤免疫:肿瘤治疗的新希望

 随着肿瘤学、免疫学及分子生物学等相关学科的迅速发展和交叉渗透,肿瘤免疫治疗技术突飞猛进,成为肿瘤治疗新的热点。肿瘤免疫治疗是应用免疫学原理和方法,提高肿瘤细胞的免疫原性和对效应细胞杀伤的敏感性,激发和增强机体抗肿瘤免疫应答,并应用免疫细胞和效应分子输注宿主体内,协同机体免疫系统杀伤肿瘤、抑制肿瘤生长。在某些肿瘤,如黑色素瘤、非小细胞肺癌等,免疫治疗展现出强大的抗肿瘤活性,部分免疫治疗药物已经获得美国FDA批准。2013年《Science》杂志将肿瘤的免疫治疗评为年度最重要的科学突破。免疫治疗成为继手术、放射治疗和化学治疗之后又一种重要的抗肿瘤治疗手段,成为攻克恶性肿瘤的希望。本文综述肿瘤免疫学的历史、发展规律、未来方向及中国的肿瘤免疫发展情况。     

低聚壳聚糖金属卟啉络合物的制备及抗肿瘤细胞活性研究

制备了低聚壳聚糖金属（铜、钴）卟啉络合物,通过紫外-可见光谱和红外光谱对其进行了表征,采用SRB细胞染色法研究了低聚壳聚糖金属（铜、钴）卟啉络合物对人体肝癌细胞Bel-7721的毒活性.结果表明,系列化合物均对肝癌细胞Bel-7402有较强的抑制生长活性,IC50值均小于100μg/mL,在10~30μg/mL范围内,是一类具有应用前景的抗肿瘤药物前体.     

PD-L1表达抑制剂的筛选及其抗肿瘤活性

为了筛选PD-L1启动子活性抑制剂,研究其抑制肿瘤细胞中PD-L1蛋白表达对机体抗肿瘤免疫活性的调节作用.利用荧光素报告基因检测系统对小分子化合物库中的311种化合物进行筛选,发现硫酸长春新碱(vincristine sulfate,VCR)以浓度依赖性抑制PD-L1基因启动子活性.RT-PCR、免疫印迹实验(Westernblot)等生物学评价实验显示:VCR抑制MDA-MB-231乳腺癌细胞中PD-L1表达以及B16细胞PD-L1蛋白表达和成瘤;VCR增强Jurkat细胞对MDA-MB-231细胞的杀伤活性,并促进C57BL/6小鼠细胞因子IL-2和γ-IFN的分泌,增强抗肿瘤活性.研究结果表明,VCR通过抑制PD-L1启动子活性下调肿瘤细胞中PD-L1蛋白表达,从而解除PD-1/PD-L1信号通路介导的免疫抑制,增强机体对肿瘤细胞的免疫应答和杀伤作用.     

脂肪酸胺铂的结构、理化特性及抗肿瘤效果

目的 为了开发新的铂类抗癌药物，对硬脂酸胺铂配合物结构、理化特性及抑制肿瘤作用进行研究。方法用红外光谱、元素分析对硬脂酸胺铂配合物的结构和理化特性进行研究。用MTT法对硬脂酸胺铂配合物体外培养的黑色素瘤(LiBr)、白血病细胞K562和肝癌(7721)细胞的杀伤效果进行研究。结果元素分析的实验结果与理论值相符。红外吸收光谱分析结果表明配合物中氨配体和硬脂酸配体分别以氨基的氮和硬脂酸的羟基氧与铂配位。结论硬脂酸胺铂配合物对肿瘤细胞生长活性抑制作用与胺配体及浓度密切相关。     

利用腺病毒载体过表达Meis 1基因能够上调化疗药对NSCLC细胞的杀伤作用

新型肿瘤抑制基因Meis 1(Myeloid ecotropic viral integration site 1)最近被证实可能具有肿瘤增殖抑制活性,是肿瘤患者预后和治疗的潜在指示分子,但其功能和作用机制尚需深入分析。考察利用腺病毒载体表达Meis 1蛋白对抗肿瘤药物杀伤NSCLC细胞的影响。非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞系A549感染Meis 1的腺病毒表达载体后,使用MTT、和软琼脂成集落实验验证其对NSCLC细胞增殖的抑制作用;进一步分别使用系列浓度梯度的抗肿瘤药物舒尼替尼(Sunitinib)、吉非替尼(Gefitinib)、紫杉醇(Paclitaxel)和吉西他滨(Gemcitabine)处理A549、Calu3、H460以及H358细胞,检测其抑制率,计算IC_(50)值。最后,利用耐药细胞系A549/ADR检测Meis 1逆转NSCLC化疗药多药耐药的作用。MTT和软琼脂成集落实验结果显示,Meis 1过表达能够抑制A549细胞的增殖与锚定非依赖性生长。抑制率实验显示Meis 1过表达能够上调抗肿瘤药物对NSCLC细胞的杀伤作用,显著下调其IC_(50)值。此外,Meis 1还具有逆转NSCLC细胞化疗药物多药耐药的作用。利用腺病毒载体表达MEIS1蛋白能够增加肿瘤细胞对化疗药物敏感型的作用,具有逆转肺癌细胞MDR的作用。     

超声激活血卟啉对在体艾氏腹水瘤杀伤效应的研究初报

利用超声激活血卟啉，研究对在体艾氏腹水瘤癌细胞的杀伤作用．实验分别选择不同的超声时间及取材时间．结果表明，单纯超声及血卟啉加超声组对肿瘤细胞均有杀伤作用．强度为0．9W／cm^2，声照3min，6h取材，为艾氏腹水瘤的杀伤效应最佳参数．     

自由基清除剂对干旱条件下小麦叶片膜脂过氧化的保护作用

用4种自由基清除剂——维生素C、甘露糖醇、二苯胺和没食子酸丙酯及前二者与后二者的混合液喷洒停止浇水36h后抗旱性不同的小麦幼苗,然后继续干旱处理.24h后测定叶片膜脂过氧化水平(丙二醛)及膜透性.结果表明,除二苯胺外,其它自由基清除剂或其混合液都能明显降低膜脂过氧化水平和膜透性,混合液比单一自由基清除剂效果更好,在抗旱性较差的甘麦8号上效果更明显.从而间接证明,干旱伤害包含着一个自由基伤害过程.     

组氨酸对DNA电荷逆转和凝聚的影响

以组氨酸为研究对象，通过动态光散射观察到当组氨酸浓度为1 mg/mL时，电泳迁移率由负变为正，DNA发生电荷逆转。同时通过原子力显微镜可以观察到，随着组氨酸浓度的升高，DNA分子逐渐堆积折叠，直至在组氨酸浓度为1 mg/mL时凝聚成球，说明了组氨酸可以导致DNA凝聚和电荷逆转。由于组氨酸的等电位点为7.59，相信组氨酸侧链的质子化和去质子化对其带电状态起调节作用。作为生物体内的基本遗传物质，DNA影响着生物的生长发育，与细胞癌变、突变等异常活动也息息相关。在细胞中，组蛋白是DNA染色体的重要组成部分，在DNA的转录和复制等过程中调节DNA的凝聚状态。组氨酸是组蛋白的主要成分，研究组氨酸对DNA凝聚以及相关的电荷逆转过程的影响，对于理解组蛋白的调控作用有重要的基础意义。     

组氨酸残基在焦磷酸:果糖-6-磷酸1-磷酸转移酶催化功能中的作用

应用焦碳酸二乙酯(DEPC)对焦磷酸:果糖-6-磷酸1-磷酸转移酶(PFP)进行化学修饰时,酶的活性迅速丧失,呈拟一级动力学反应.羟胺的复活作用及修饰后酶的紫外光谱变化表明,酶失活的原因是DEPC与酶的组氨酸残基形成了乙酯基组氨酸复合物.失活动力学表明,酶的活性位点结合1分子DEPC即丧失活性.活性位点的组氨酸残基的完整性是酶活性的必要条件之一.底物F6P、产物果糖1,6-二磷酸(FBP)、P i及激活剂果糖2,6-二磷酸(F2,6BP)均可保护酶免被DEPC失活,底物PP i却没有保护作用.组氨酸残基在酶的催化功能中可能与F6P,FBP及P i的结合过程有关,而与PP i无关.     

Identification of CRE1 as a cytokinin receptor from Arabidopsis

Cytokinins are a class of plant hormones that are central to the regulation of cell division and differentiation in plants. It has been proposed that they are detected by a two-component system, because overexpression of the histidine kinase gene CKI1 induces typical cytokinin responses and genes for a set of response regulators of two-component systems can be induced by cytokinins. Two-component systems use a histidine kinase as an environmental sensor and rely on a phosphorelay for signal transduction. They are common in microorganisms, and are also emerging as important signal detection routes in plants. Here we report the identification of a cytokinin receptor. We identified Arabidopsis cre1 (cytokinin response 1) mutants, which exhibited reduced responses to cytokinins. The mutated gene CRE1 encodes a histidine kinase. CRE1 expression conferred a cytokinin-dependent growth phenotype on a yeast mutant that lacked the endogenous histidine kinase SLN1 (ref. 10), providing direct evidence that CRE1 is a cytokinin receptor. We also provide evidence that cytokinins can activate CRE1 to initiate phosphorelay signalling.     

The role of the distal histidine in myoglobin and haemoglobin

The distal E7 histidine in vertebrate myoglobins and haemoglobins has been strongly conserved during evolution and is thought to be important in fine-tuning the ligand affinities of these proteins. A hydrogen bond between the N epsilon proton of the distal histidine and the second oxygen atom may stabilize O2 bound to the haem iron. The proximity of the imidazole side chain to the sixth coordination position, which is required for efficient hydrogen bonding, has been postulated to inhibit sterically the binding of CO and alkyl isocyanides. To test these ideas, engineered mutants of sperm whale myoglobin and the alpha- and beta-subunits of human haemoglobin were prepared in which E7 histidine was replaced by glycine. Removal of the distal imidazole in myoglobin and the alpha-subunits of intact, R-state haemoglobin caused significant changes in the affinity for oxygen, carbon monoxide and methyl isocyanide; in contrast, the His-E7 to Gly substitution produced little or no effect on the rates and extents of O2, CO and methyl isocyanide binding to beta-chains within R-state haemoglobin. In the beta-subunit the distal histidine seems to be less significant in regulating the binding of ligands to the haem iron in the high affinity quaternary conformation. Structural differences in the oxygen binding pockets shown by X-ray crystallographic studies account for the functional differences of these proteins.     

Inhibition of Alkaline Phosphatase from Pearl Oyster Pinctada fucata by o-Phthalaldehyde： Involvement of Lysine and Histidine Residues at the Active Site

Alkaline phosphatase from Pinctada fucata was inactivated by o-phthalaldehyde （OPA）. The inactivation followed pseudo first-order kinetics with a second rate constant of 0.167 （mmol/L）^-1·min^-1 at pH 7.5 and 25℃. A Tsou＇s plot analysis showed that inactivation occurred upon formation of one isoindole group. The OPA-modified enzyme lost the ability to bind with the specific affinity column and the presence of substrates or competitive inhibitors protected the enzyme from inactivation. The results revealed that the OPA-reaction site was at the enzyme substrate binding site. Prior modification of the enzyme by lysine or histidine specific reagent abolished formation of the isoindole derivatives, suggesting that lysine and histidine residues were involved in the OPA-induced inactivation. Taken together, OPA inactivated the alkaline phosphatase from Pinctada fucata by cross-linking lysine and histidine residues at the active site and formed an isoindole group at the substrate binding site of the enzyme.     

组氨酸的Keggin结构杂多金属氧酸盐的合成及性质研究

首次合成了组氨酸的Ｋｅｇｇｉｎ结构（ＸＭ１２Ｏ４０＾ｎ－,Ｘ＝Ｐ,Ｓｉ,Ｍ＝Ｗ,Ｍｏ）３种杂多金属氧酸盐化合物,用元素分析、ＩＲ、ＵＶ、ＴＧ－ＤＴＡ等方法对标事物进行了表征,结果表明该类化合物仍保持Ｋｅｇｇｉｎ结构、杂多酸阴离子和氨基酸靠静电作用相结合。     

小分子对氯化血红素催化性能的影响

以氯化血红素(hemin)催化H2O2氧化邻苯三酚红反应为指示反应，研究了氨基酸、有机碱、表面活性剂等多种小分子对hemin催化性能的影响．发现，L-精氨酸、L-组氨酸、L-苯丙氨酸、L-色氨酸对hemin的催化性能有明显的增强作用．并使其最适pH更接近天然过氧化物酶的最适pH；具有芳香结构的阴离子表面活性剂十二烷基苯磺酸钠胶团(SDBS)也可提高hemin的催化性能，且与L-精氨酸、L-组氨酸、L-苯丙氨酸有明显的协同效应．该结果可为hemin与保守氨基酸衍生表面活性荆胶团模拟过氧化物酶研究提供科学依据．     

大豆ASR蛋白富含组氨酸结构域在结合金属离子中的作用

利用固相亲和层析实验结果表明,GmASR蛋白及其含组氨酸结构域A1~A5短肽可与金属离子Cu2+和Cd2+结合；采用Cu-抗坏血酸体系检测了GmASR蛋白及A1~A5清除羟基自由基的能力，证明GmASR蛋白及A1~A5短肽中组氨酸数目与清除羟基自由基能力呈正相关；GmASR蛋白及A1~A5可保护DNA分子免受Cu2+造成的氧化损伤.CD实验和SDS-PAGE实验结果发现，GmASR蛋白及A1~A5短肽与Cu2+结合后将引起可逆性聚集及沉淀.可见GmASR蛋白通过组氨酸结合过多的金属离子，维持细胞内离子平衡，是保护植物免受重金属毒害的重要机制之一.