超声激活血卟啉对S180肿瘤细胞膜脂的影响

通过应用TBA法、比色法和荧光偏振法研究腹水型S180细胞在超声激活血卟啉处理后膜脂质过氧化程度,游离脂肪酸含量和膜流动性,探讨声动力疗法对腹水瘤膜脂结构和功能的作用以及声动力抑癌作用的生物学机制.研究结果显示,单纯超声可使肿瘤细胞膜脂质过氧化,磷脂降解而降低膜流动性.超声结合血卟啉显著增强单纯超声的作用,单纯血卟啉无作用.声动力疗法处理后,膜流动性的下降与脂质过氧化和磷脂降解呈显著相关,且与磷脂降解关系更为密切.分析得出,声动力疗法能使肿瘤细胞膜脂质过氧化程度明显升高,磷脂降解加剧,显著降低膜流动性,从而影响细胞正常代谢,抑制肿瘤细胞的恶性增殖.     

超声激活血卟啉诱导艾氏腹水瘤细胞凋亡的细胞学研究

采用频率为1.34 MHz、声强为1w/cm2的超声结合血卟啉对EAT细胞凋亡模式进行了研究,探讨了声动力学疗法抗肿瘤的分子机制.超声激活血卟啉作用于EAT细胞后,不同时间点取材,通过扫描电镜观察EAT细胞的形态学变化;通过HO荧光染色观察凋亡细胞的形态学特征;利用免疫细胞化学方法检测caspase-8蛋白的活性变化.结果表明,超声激活血卟啉可诱导EAT细胞凋亡的发生,并且随时间的延迟凋亡现象愈加明显;免疫细胞化学方法表明超声处理后caspaSe-8蛋白表达活性显著增强,且于1h活化程度达到最高.研究表明,超声激活血卟啉可诱导EAT细胞凋亡,其作用的分子机制可能涉及Caspase-8依赖的膜受体凋亡信号调节通路.     

聚焦超声激活血卟啉对在体S180肿瘤细胞的抑制作用研究

目的 研究频率为2.2MHz的聚焦超声结合血卟啉对在体S180肿瘤组织的杀伤作用.方法 计算不同处理后对肿瘤组织的生长抑制作用,并通过透射电镜观察处理后不同时间段取材S180实体瘤超微结构的变化.结果 单纯血卟啉对在体S180肿瘤细胞几乎没有生长抑制作用;单纯超声对S180肿瘤组织有一定的生长抑制作用,且随着超声强度的增加,抑制效应逐渐显著,而超声结合血卟啉所产生的协同效应对S180肿瘤细胞的生长抑制作用明显高于单纯超声组,电镜下观察到超声激活血卟啉可以破坏肿瘤细胞的超微结构,尤其是对肿瘤细胞膜和膜性细胞器的通透性和结构的损伤,并且随着取材时间的延长,损伤效应进一步加强.结论 超声结合血卟啉能有效地抑制S180肿瘤的生长作用.     

超声波激活血卟啉抗肿瘤效应机理研究

研究了活性净化剂组氨酸和甘露醇对超声波激活血卟啉杀伤人体黑色素瘤细胞LiBr的抑制作用，探讨了声动力学方法抗肿瘤效应的机理，实验结果表明，加强氨酸时，单纯超声对瘤细胞LiBr杀伤率部分被抑制，而超声加血卟啉抗肿瘤效应则几乎全被抑制。甘露醇对超声和超声加血卟啉对细胞杀伤效应均无影响，这说明单线态氧是杀伤肿瘤细胞的主要因素。     

超声激活血卟啉杀伤癌细胞的扫描电镜观察

利用频率为2MHz,强度为0．9W／cm^2的超声(Ultrasound,US)激活血卟啉(Hematoporphyrin deriVatives,HpD)对在体的腹水型艾氏腹水瘤细胞(Ehrlich Ascites Tumor,EAT)和S180(Sarcomal80,S180)细胞进行抑癌作用研究。通过扫描电子显微镜观察处理后细胞形态的变化,结果表明：超声激活血卟琳对艾氏腹水瘤细胞和S180细胞均有明显的杀伤效果,且通过对损伤不同形态的比较,得出S180细胞膜较艾氏腹水瘤细胞膜对于声动力疗法(Sonodynamic Therapy,SDT)更为敏感。     

IL-2联合银耳多糖激活的同种脾细胞对肝癌实验性治疗的研究

目的研究淋巴因子IL-2联合银耳多糖(Tremella Polysaccharide TP)共同激活的小鼠脾细胞对体外肿瘤细胞的杀伤作用及小鼠移植性肝癌的治疗作用.方法将IL-2激活的小鼠脾细胞(即LAK细胞)和IL-2与银耳多糖协同激活的小鼠脾细胞(即TP-LAK细胞)分别作用于体外培养的3H-TdR标记的肿瘤细胞P815,H22和B16,2h后用γ-闪烁计数仪进行检测,并计算杀伤程度.将上述激活的小鼠脾细胞在小鼠荷肝癌局部皮下注射,隔日1次,共5次.检测肿瘤质量、体积、组织学改变和主要脏器的形态学改变.结果 IL-2与银耳多糖激活的小鼠脾细胞对体外培养的肿瘤细胞有明显的杀伤作用,2种效应细胞对B16杀伤作用最强,H22次之,P815最弱,TP-LAK细胞的作用较之LAK细胞更强,P<0.05.治疗组肝肿瘤质量、体积均低于对照组.组织学上肿瘤坏死程度重且范围广,淋巴细胞、单核细胞浸润明显,纤维组织增生明显.银耳多糖协同IL-2实验组较单纯的IL-2实验组表现得更为明显.除脾脏外,其他主要脏器无明显形态学变化.结论 IL-2激活脾LAK细胞是有效的抗肝癌细胞,IL-2 与银耳多糖在活化脾细胞提高抗肿瘤方面具有协同作用.其对体内主要脏器无明显影响.     

齐墩果酸联合放疗对HepG2细胞周期和凋亡作用的体外研究

目的体外观察齐墩果酸(oleanolic acid,OA)联合放疗对肝癌HepG2细胞周期和凋亡的影响,探讨OA的放射增敏作用及其机制.方法对数生长期HepG2细胞分为对照组、单纯给药组(OA组)、单纯照射组(IR组)、照射与药物联合作用组(IR+OA组).MTT法检测细胞活力,Hoechst33258染色观察细胞凋亡形态学变化,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡,Western blotting检测细胞周期相关蛋白表达.结果 OA显著增加射线的杀伤作用,联合组细胞的活力明显下降,凋亡率增高,细胞周期蛋白CyclinB1和Cdk1的降低,p-Cdk1表达量上升更明显,细胞G2/M期阻滞明显高于对照组(P0.05).结论 OA显著增加射线对肝癌细胞的杀伤作用,其机制可能与CyclinB1-Cdk1复合物的表达量减少和活性抑制、诱导细胞阻滞G2/M期有关.     

血卟啉单甲醚介导的声动力对U937细胞增殖影响

研究了聚焦超声激活血卟啉单甲醚对人髓系白血病细胞株U937细胞的增殖抑制作用.通过MTT法检测了频率为1.1MHz的聚焦超声激活血卟啉单甲醚作用于U937肿瘤细胞的存活率.MTT实验结果显示:声照辐射60s、强度为2~7 W/cm2的超声对U937细胞的抑制作用呈强度依赖性;单纯血卟啉单甲醚组与对照组相比无显著性差异(P0.05);同等条件下,2 W/cm2超声结合10ng/L血卟啉单甲醚组对U937肿瘤细胞有明显的协同杀伤作用,与对照组相比有极显著性差异(P0.01).这些结果表明,超声联合血卟啉单甲醚声动力能够特异性抑制U937细胞生长,血卟啉单甲醚有望成为一种新型声敏剂应用于白血病的声动力治疗.     

超声激活血卟啉对SW-480癌细胞的杀伤作用

采用1．1MHz,0．9W／cm^2低强度超声,结合血卟啉对体外培养的人肿瘤细胞SW—480进行声照处理,通过噻唑蓝(MTT)法、PI,HO双荧光染色等方法,根据癌细胞形态结构和功能的变化,探讨超声激活血卟啉对肿瘤细胞的杀伤作用。结果表明：血卟啉对癌细胞无明显的损伤,超声加血卟啉处理30s是引起SW—480细胞受损的敏感位点,90s为杀伤癌细胞的优选时间段;杀伤作用呈癌细胞显微结构逐步破坏的变化,并随声照时间的延长而加剧;声照时间在30s至90s区间细胞具有明显凋亡特征,提示超声激活血卟啉杀伤癌细胞机制中可能存在诱导肿瘤细胞凋亡的作用。     

超声激活血卟啉对K_(562)肿瘤作用的研究

研究了超声激活血卟啉对人体肿瘤细胞Ｋ５６２的作用,以及声参量和血卟啉浓度对瘤细胞杀伤率的影响．结果表明,声参量和血卟啉浓度与瘤细胞杀伤率呈正相关．当频率为１．８ＭＨｚ,声强度为１．５Ｗ／ｃｍ２,作用时间为６０ｓ,血卟啉浓度为２００μｇ／ｍＬ时,超声激活血卟啉对Ｋ５６２肿瘤作用效果较佳,杀伤率达９８％,超声单独作用,杀伤率仅为４２％．单纯血卟啉无抗肿瘤效应．     

DC-CTL体外杀伤人胰腺癌细胞效应研究

研究胰腺癌患者外周血分离培养而来的树突状细胞体外对人胰腺癌细胞BXPC-3、Capan-2的抑制作用.应用各种细胞因子诱导培养从胰腺癌患者外周血分离的单核细胞,获得成熟DC及CIK.胰腺癌组织来源抗原致敏DC,激活T细胞增殖分化为CTL.MTT法检测抗原致敏的DC激活的CTL及单独的CIK对BXPC-3细胞和Capan-2 细胞的杀伤效应.结果显示:胰腺癌抗原致敏的DC,激活肿瘤抗原特异性CTL,体外对BXPC-3和Capan-2胰腺癌细胞产生杀伤作用,分别为75.85%和50.34%;CIK对BXPC-3和Capan-2胰腺癌细胞也有杀伤作用,分别达到62.06%和40.92%,但比抗原致敏的DC激活的CTL的杀伤效应低(P<0.05).胰腺癌患者外周血来源DC在体外能诱导高效的抗胰腺癌细胞免疫反应,提示肿瘤抗原激活的DC作为肿瘤疫苗在胰腺癌的免疫治疗中具有重要价值.     

硒对NO诱导的内皮细胞损伤

用外源性NO供体S-亚硝基谷胱甘肽(GSNO)处理人脐静脉内皮细胞系ECV-304细胞,研究其对细胞的损伤机制,并探讨硒在这一过程中的保护作用.通过MTT法测定细胞存活率、分光光度法测定细胞LDH漏出率及细胞脂质过氧化水平,采用荧光标记技术研究细胞膜流动性变化.结果表明,NO可引起细胞脂质过氧化水平升高,细胞膜流动性下降,导致ECV-304细胞损伤,其作用具有浓度效应;细胞内硒可通过抑制细胞脂质过氧化水平及细胞膜流动性变化从而抑制NO诱导的细胞损伤.     

胶质瘤Hsp70-肽复合物激活T淋巴细胞抗肿瘤研究

目的 研究胶质瘤Hsp70-肽复合物激活的T淋巴细胞抗肿瘤效应、探讨其用于临床治疗的可行性.方法 取胶质瘤手术标本,经组织块法培养、建株胶质瘤细胞,冻融法获取胶质瘤细胞抗原,抗原与Hsp70体外构建Hsp70-肽复合物并激活T淋巴细胞,制备特异性CTL,MTT法检测对胶质瘤细胞的体外杀伤作用.结果 Hsp70-肽复合物激活CTL对胶质瘤细胞的杀伤活性明显高于未经胶质瘤抗原激活的CTL对胶质瘤细胞的杀伤作用( P ＜ 0.01).结论 肿瘤组织中或细胞中提取的Hsp70-肽复合物作用于T淋巴细胞,能诱导CTL在体外对胶质瘤细胞能产生高效而特异杀伤作用,为临床制备肿瘤疫苗奠定理论基础.     

超声处理对酵母细胞的致死及相关影响

超声处理作为新兴的非热杀菌技术,由于对超声处理条件的作用规律和对微生物细胞的影响研究不足,在实际应用中还不成熟.文中以酿酒酵母为对象,考察超声杀菌处理效果的三个主要影响因素(即超声功率、时间和脉冲占空比)对细胞致死作用的影响规律,并采用选择性平板法对超声引起的细胞亚致死效应进行检测,采用TEM对细胞超微结构变化进行检测.结果表明:超声功率及时间对细胞的致死作用影响显著;超声处理后细胞未检出显著的亚致死损伤;超声处理对细胞的超微结构破坏大,表明结构完整性的破坏可能是细胞死亡的直接原因.     

H13诱导人卵巢癌A2780细胞凋亡及其机制的研究

探讨新型Topo I抑制剂H13对人卵巢癌A2780的杀伤和诱导凋亡的作用机制.MTT法对人卵巢癌A2780的杀伤作用;流式细胞仪研究H13对A2780细胞的凋亡诱导作用;Western Blot法检测H13对A2780细胞内caspase-3和p53蛋白表达的影响.H13对人卵巢癌A2780有明显细胞毒性作用,并且有剂量依赖性;A2780细胞在H13作用后出现特征性凋亡形态特征,且凋亡率由5.7%上升为20.6%;H13明显增加p53蛋白的表达和caspase-3蛋白的表达.H13对人卵巢癌A2780有明显的杀伤和促凋亡作用,其机制可能依赖于细胞内p53蛋白和caspase-3蛋白表达增高.     

Rac1突变重组体的构建及对JAK/STAT信号通路的影响

通过构建Rac1突变体，研究Rac1激活对肾小球系膜细胞(MES)JAK2/STAT3信号通路的影响.以Rac1目的基因为模板，在引物中设计突变，扩增突变体Rac1(G12V)的目的基因，与PiggyBac(PB-FLAG)载体质粒连接，构建突变重组体PB-Rac1(G12V),并运用脂质体核酸试剂转染系膜细胞.比较正常组、Rac1(G12V)突变组中系膜细胞的ROS含量及NADPH氧化酶活性；Elisa法检测细胞因子TGF-β表达水平；Western blot法检测系膜细胞中JAK2/STAT3信号及FN蛋白的表达.结果表明，成功构建了Rac1(G12V)持续磷酸化突变体并在MES细胞中表达，与正常组相比，Rac1(G12V)激活突变MES细胞NADPH氧化酶的活性和ROS含量明显增加；JAK2/STAT3信号通路激活，TGF-β和FN表达明显增加.Rac1能激活系膜细胞氧化应激和JAK2/STAT3信号通路，并促进TGF-β及FN的表达.     

IL-2联合银耳多糖激活的脾细胞对体外肿瘤细胞杀伤作用的研究

目的研究淋巴因子IL-2联合银耳多糖(Tremella Polysaccharide TP)共同激活的小鼠脾细胞对肿瘤细胞的体外杀伤作用.方法用甲基-3氢胸腺嘧啶核苷标记肿瘤细胞H22,B16,p815,将标记的靶细胞悬液调至1×105/mL,分别以效靶比40∶1,20∶1和10∶1加入效应细胞,混匀后置37℃5%CO2培养箱内培养2h,2h后用γ-闪烁记数仪对上述细胞悬液进行检测.结果 2种效应细胞对B16杀伤作用最强,H22次之,p815最弱,TP-LAK细胞的作用较之LAK细胞更强(P<0.05),且效靶比越高,杀伤作用越强.结论 IL-2激活脾LAK细胞是有效的抗肿瘤细胞,IL-2与银耳多糖在活化脾细胞提高抗肿瘤方面具有协同作用.     

超声激活血卟啉对在体艾氏腹水瘤杀伤效应的研究初报

利用超声激活血卟啉，研究对在体艾氏腹水瘤癌细胞的杀伤作用．实验分别选择不同的超声时间及取材时间．结果表明，单纯超声及血卟啉加超声组对肿瘤细胞均有杀伤作用．强度为0．9W／cm^2，声照3min，6h取材，为艾氏腹水瘤的杀伤效应最佳参数．     

胎儿生长受限的孕妇脂质过氧化与脐动脉血流相关性探讨

目的:探讨脂质过氧化作用在胎儿生长受限(FGR)发病机制中可能发挥的作用以及FGR孕妇脂质过氧化作用与脐动脉血流阻力变化的相关性.方法:以正常孕妇为对照,选择孕32周后诊断为FGR,经应用L-精氨酸和扩容等治疗后超声多普勒脐动脉血流S/D比值恢复正常的足月分娩的单胎妊娠孕妇38例为研究对象,分别对孕晚期治疗前和孕足月临产前的经抹洗新鲜中段尿液进行抗原标记酶联免疫法测定8-异前列腺素F2α( 8-iso-PGF2α)的水平,并分析相关的临床指标和妊娠结局.结果:FGR组孕晚期尿液8-iso-PGF2α水平显著高于正常妊娠组,差异有统计学意义(P ＜0.05);FGR孕妇经临床治疗后,孕足月时尿液8-iso-PGF2α水平仍显著高于正常妊娠组,且显著高于自身对照的孕晚期组,差异有统计学意义(P＜0.05);FGR组孕晚期在治疗前血细胞比容(HCT)、脐动脉血流收缩期峰值与舒张期峰值的比值(S/D)、血流阻力指数(RI)和血流脉动指数(PI)明显高于正常妊娠组(P＜0.05),但分别与尿液8-iso-PGF2α水平无显著相关性(P＞0.05).结论:FGR孕妇孕期体内的脂质过氧化作用明显增强;FGR孕妇脐动脉血流阻力明显增高,可能与脂质过氧化作用增强无关.     

黄芪提取物对人皮肤表皮细胞抗衰老的研究

本文报道以人皮肤表皮细胞体外培养的方法,研究中药黄芪抗人体皮肤表皮细胞衰老的效应,发现黄芪提取物能促进体外培养人表皮细胞的分裂能力,并可显著延长表皮细胞的寿命。此外,本文还以人表皮细胞悬液和人红细胞膜为材料,检测其经γ-射线辐射后,丙二醛和脂褐素含量的变化,发现黄芪提取物具有明显抑制因辐射引起的脂质过氧化和脂褐素含量增加的作用。从而首次证明黄芪对人皮肤表皮细胞具有明显的抗衰老作用。