下期发表论文摘要预报

梧桐花粉主要变应原的分离纯化刘叶青 * ,　崔玉敏 ,　张秀萍 ,　陈国豪(华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室 ,生物工程系 ,上海 2 0 0 2 37)　　摘要 :以离子交换和凝胶过滤层析对梧桐花粉变应原进行分离和纯化。采用生物素 -链霉亲和素酶联免疫吸附分析法 ( BSA- ELISA)测定其抗原活性 ,得到两个具高活性的单一变应原组分 PT13和 PT53 。经 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测得两者的相对分子质量分别为 2 0 ku和 1 8ku乙二胺羟丙基壳聚糖固定化天门冬酰胺酶的研究方　波 ,　王任远 ,　宋道云 ,　周纪宁 ,　江体乾 ,　陈鸿雁(华东理…     

建立离体培养形态发生过程中蛋白质及过氧化物同工酶的研究

比较了建兰（Cymbidium ensfolium)根状茎分化前后可溶性蛋白与过氧化物同工酶的变化。发现可溶性蛋白质23ku,57ku,65ku,93ku含量稳定,21ku,51ku,73ku和81ku只在根状茎时期出现,28ku,30ku在分化中出现。过氧化物同工酶C1、C2,C9、C10在分化前后均有表达,而C3、C4、C5、C6、C7、C8伴随分化而出现。     

毒性与无毒性织纹螺肌肉蛋白的差异分析

通过SDS-PAGE分析毒性和无毒性织纹螺肌肉蛋白的电泳图谱差异,综合比较蛋白条带的迁移率及浓度,得出:毒性织纹螺肌浆蛋白的特征条带主要为23.6 ku和35.0 ku,无毒性织纹螺的特征条带主要为22.8 ku和31.2 ku;毒性织纹螺肌原纤维的特征条带主要为38.0 ku、50.8 ku和135.0 ku,无毒性织纹螺的特征条带主要为36.9 ku和125.8 ku.结合优化样品制备、等电点聚焦程序等条件,初步建立了织纹螺肌肉蛋白的双向电泳条件,并通过双向电泳分析了毒性和无毒性织纹螺肌肉中存在的差异蛋白.     

沙田柚各器官特异蛋白质的研究

利用SDS-PAGE对沙田柚(Citrus grandis var.Shatinyu Hort.)的茎、叶、花萼、花瓣、花药、花柱和子房的可溶性蛋白质进行比较分析,检测到茎中的分子质量31.0 ku,叶中的56.0 ku,花药中的59.0 ku,58.0 ku, 44.0 ku,37.2 ku,36.0 ku,35.5 ku,33.0 ku,21.0 ku,15.4 ku,花柱中的43.0 ku, 38.5 ku,子房中的33.5 ku的蛋白质分别为各器官的特异蛋白质.对茎、叶、花药、花柱的全蛋白质进行IEF-SDS-PAGE双向电泳分析结果也确定了相应于各自SDS-PAGE上特异蛋白质带的特异斑点,而且,SDS-PAGE图谱上的一条蛋白质带在IEF-SDS-PAGE双向图谱上呈现等电点不同而分子质量相同的几个斑点.各器官的蛋白质含量以花药的最高,花萼的为最低.     

蛾类粗制变应原的实验研究

探讨了蛾变应原试剂的制备和临床应用。将 2年 4个季节采集的 62 6.5 g经干燥的蛾粉碎后以可卡氏碱性抗原提取液提取 ,提取液经无菌过滤得变应原原液 ,再以原液和稀释液进行动物试验测定其致敏性。皮试测定蛾类变应原有较强致敏作用 ,原液致敏作用达 1 0 0 % ,其稀释液按稀释度不同致敏作用达 5 0 %— 1 0 0 %不等。蛾类变应原有强烈的致敏作用 ,可用于临床研究     

黑曲霉糖化酶启动子区CCAAT框与反式作用因子AngCP结合的分析

依次通过20%～40%饱和硫酸铵、凝胶过滤、肝素柱层析及DNA亲和层析纯化了黑曲霉糖化酶启动子区CCAAT框DC(-489 bp～-414 bp)结合蛋白(AngCP1)及CCAAT框PC(-390 bp～-345 bp)结合蛋白(AngCP2).凝胶过滤分析和SDS-PAGE结果表明AngCP1和AngCP2的分子质量均约为120 ku,由分子质量为34 ku和50 ku的亚基组成.Western blot显示两者的34 ku亚基均能特异性地与鼠抗AngHapC抗体产生反应,进一步的电泳迁移率实验证实AngCP1和AngCP2为同一蛋白质,称为AngCP.Southwestern blot显示34 ku亚基结合于DC,而50 ku亚基结合于PC,并且34ku亚基与DC的结合能力强于50 ku亚基与PC的结合.上述AngCP具有与DC,PC不等结合强度的特点暗示三者在糖化酶表达调控中有着重要作用.     

壳聚糖相对分子质量对黄瓜幼苗生长及抗性诱导的作用

壳聚糖经α-淀粉酶水解并用乙醇溶液纯化可得到不同相对分子质量的壳聚糖。用重均分子量为20ku和1ku的壳聚糖处理黄瓜种子和幼苗可以诱导黄瓜植株产生过氧化物酶和β-1,3-葡聚糖酶。壳聚糖的这种诱导效应对剂量和相对分子质量都有依赖,并有一定的滞后期。壳聚糖对黄瓜菌核病的抗病性随喷施次数增加而增加。在对黄瓜种子进行浸种处理时,重均分子量为20ku的壳聚糖诱导效果更为明显;在对黄瓜叶片喷洒处理时,1ku的壳聚糖的诱导效应更为明显。     

螅状独缩虫(Carchesium polypinum)类中间纤维的初步研究

利用间接免疫荧光和免疫印迹发现螅状独缩虫中存在两种分子质量为58ku和66ku的蛋白。这两种蛋白能分别与抗波形蛋白和抗核纤层蛋白B的抗体反应。分子质量66ku的蛋白位于大核边缘。另外,细胞经分级抽提后大核周围存在核纤层样结构。基于上述结果,可以认为螅状独缩虫中存在类中间纤维。     

腐食酪螨和粉尘螨的共同抗原

目的：探讨腐食酪螨和粉尘螨之间是否存在共同抗原.方法：对粉螨过敏患者进行腐食酪螨和粉尘螨特异性IgE相关性分析，用SDS-PAGE分析腐食酪螨和粉尘螨变应原，并对螨特异性IgE阳性血清进行免疫印迹试验及抑制试验.结果：42例粉螨过敏患者血清粉尘螨和腐食酪螨特异性IgE光密度值相关性较高（r=0.641 5，P＜0.01）.SDS-PAGE分析知腐食酪螨和粉尘螨变应原分子量均为10 kD～110 kD.免疫印迹抑制试验表明，腐食酪螨变应原可与粉尘螨变应原发生交叉反应.结论：腐食酪螨和粉尘螨间存在共同抗原.     

对称量子理论的计算

根据[WTHX]PT 对称量子系统中PT 内积和原内积之间的关系, 给出PT 对称量子理论中纯态的刻画以及PT 对称量子系统中混合态的一个刻画, 研究PT对称量子系统中态的演化, 并给出其为酉演化的充要条件.     

小白芸豆凝集素的分离纯化及性质研究

从小白芸豆中分离纯化出一种新的凝集素,对其部分理化性质和生物活性进行研究.小白芸豆经过去皮粉碎、浸提、硫酸铵分段盐析、SP Sepharose阳离子交换、Q Sepharose阴离子交换和Superdex 200凝胶过滤层析后可得到小白芸豆凝集素(Phaseolus vulgaris var.albuslectin,PVAL)纯品.测定了PVAL的表观分子质量、亚基分子质量、糖含量、等电点、氨基酸组成、酸碱稳定性以及抗癌性.PVAL的表观分子质量为136 ku,是由2种分子质量分别为36.2 ku和32.2 ku的亚基组成的四聚体,糖含量为4.93%,等电点分布在pH5.3~6.0之间.PVAL分子无半胱氨酸,也无二硫键,疏水性氨基酸质量分数约为37%.PVAL对酸碱的耐受性比较好,并且对肿瘤细胞MDA-MB-435S有较好的抗性.     

克氏原螯虾(Procambius clarkii)卵黄蛋白的部分生化性质

通过电泳回收的方法对克氏原螯虾(Procambius clarkii)的卵黄蛋白进行了纯化,鉴定结果显示总分子质量为481 ku,具有6个亚基(198,176,132,111,92,82 ku);染色分析表明该蛋白是一种糖脂磷类胡萝卜素蛋白,亚基之间有1个二硫键交联.     

瑞氏木霉β-内切葡聚糖酶的纯化及其部分酶学性质研究

 利用盐析、SephadexG-75和DEAE-SephadexA50层析,从瑞氏木霉TrichodermareeseiQM9414发酵液中纯化了2个具有β-内切葡聚糖酶活性的组分Eg1和Eg2,分子质量分别为65.47ku和57.04ku.其最适温度分别为50℃和55℃,最适pH分别为4.8和5.0,米氏常数Km分别为3.76×10^-2g/L和4.20×10^-2g/L.根据其酶学性质,这是一类不同于已有的β-内切葡聚糖酶,为瑞氏木霉T.reeseiQM9414所产β-内切葡聚糖酶的进一步研究奠定了基础.     

东海原甲藻钙调蛋白的分离纯化及鉴定

以东海原甲藻(Prorocentrum donghaiense Lu)为材料,经热变性、离心处理,上清液依次经DEAE纤维素阴离子交换层析和苯基-Sepharose CL- 4B疏水层析分离纯化钙调蛋白(CaM).SDS-PAGE和Western blot检测结果显示:东海原甲藻中CaM的相对分子质量为16 ku.采用该实验方法首次有效地从海洋浮游植物东海原甲藻中分离纯化出钙调蛋白.     

蛹虫草多糖分离纯化及性质的研究

以蛹虫草菌丝体粗多糖为材料进行分离纯化及性质的研究.提取液浓缩用3倍体积乙醇沉淀,等电点Sevag法除蛋白,10%H2O2脱色,得到的粗多糖经DEAE-DE52纤维素柱层析,用0～0.2mol/L的NaCl洗脱,可以得到未完全分离的多糖.将此多糖经Sephadex-G200柱层析,用蒸馏水洗脱.将多糖用Sepharose CL-6B柱层析进行纯度鉴定,经验证是单一多糖.对多糖进行纸层析,证明组分是D-葡萄糖和D-半乳糖.用高效液相色谱法测定多糖分子质量为3.76×104ku.以昆明种小鼠对多糖进行生物活性研究,多糖对小鼠S180肉瘤抑制率达到71.92%.     

Purification and characterization of myosin from wheat mitochondria

Myosin was purified from wheat mitochondria using DE-52 anion exchange chromatography and Sephacryl S-300 gel filtration. The molecular weight of its heavy chain is about 210 ku, similar to that of muscle myosin Ⅱ(205 ku), and it could be recognized by the polyclonal antibodies against human skeletal muscle myosin Ⅱ. The ATPase activity of the mitochondrial myosin stimulated by F-actin from chicken muscle is 202.5 nmoles Pi/min·mg. The mitochondrial myosin could be activated by Ca²⁺ and was not inhibited by Ca²⁺ at high concentration. The results demonstrate that the myosin of wheat mitochondria shares some similarities with the skeletal muscle myosin Ⅱ.     

沙田柚花柱S-糖蛋白的纯化和N-端序列测定

以人工自花授粉3d后的沙田柚（Citrus grandis var.Shatinyu Hort.）花柱为材料,切取1/2部位处花柱组织,匀浆后,进行抽提和硫酸铵盐析,得到35%级分的蛋白质粗提液,此液经聚丙烯酰胺凝胶电泳检测,显示出9条蛋白质带;经ConA-Sepharose4B亲和柱层析,特异峰（S^#）仅显示1条蛋白质带,恰好是35%级分中近正极端的2种蛋白质中的一种最优势蛋白质;部分生化性质测定结果表明,该蛋白质为碱性糖蛋白,糖含量为9.2%,由2个亚基组成,相对分子质量分别为38.0ku,32.0ku,等电点分别约为7.5,7.2;生物活性测定结果表明,该蛋白质能抑制离体（in vitro)萌发自花花粉花管的生长;氨其酸序列分析表明,32.0ku组分N-端15个氨基酸序列与矮牵牛,花烟草等的N-端相应序列极相似。     

基因工程血管抑素3A蛋白的分离纯化

在8mol／mL尿素溶液中,以二硫苏糖醇(DTT)为还原剂,对基因工程血管抑素3A包涵体进行溶解实验。结果发现：1．5h后溶解的上清液蛋白浓度达26．2mg／mL。SDS-PAGE电泳扫描结果显示,3A蛋白经过Sephadex G75分离后PAGE电泳纯达到100％,该步收率达85．82％,相对分子质量为10ku。采用分步稀释法对其进行复性,所获复性3A蛋白经MTT法检测表明：3A蛋白浓度为0．1μg／mL时,对内皮细胞的生长抑制率为93．4％。     

人肿瘤坏死因子受体Ⅰ(hTNFRⅠ)基因死亡域在大肠杆菌中的表达

将人肿瘤坏死因子受体Ⅰ（ｈＴＮＦＲＩ）死亡域基因克隆在氯霉素乙酰转移酶（ＣＡＴ）的后面,构建成重组表达质粒ｐＬＴ１０ ＣＡＴＬＤｄ．该融合蛋白基因转化大肠杆菌后发酵,ＩＰＴＧ诱导２ ｈ,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测定ＣＡＴＬＤｄ 蛋白质的分子质量为３９ ｋｕ．Ｗｅｓｔｅｒｎ 印迹实验进一步作了鉴定．表达产物为包涵体．ＣＡＴＬＤｄ 蛋白质经Ｑ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ 柱层析后纯度大于９５％ ．     

纸层析分离鉴定氨基酸实验的改进

采用纸层析分离鉴定5种不同的氨基酸,对传统《基础生物化学实验》中的"氨基酸的分离鉴定——纸层析法"进行了改进,同时又与薄层层析分离鉴定氨基酸进行比较.结果表明,在进行氨基酸的分离鉴定时,改进的纸层析法比传统的纸层析法具有耗材少,时间短等优点;而薄层层析法又比纸层析法有更多的优越性,具有速度更快、斑点更集中、显色灵敏度更高等优点.