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1.
应用实验生物学和计算生物学方法对重组人源抗HBsAg单链抗体(HBscFv)的部分理化性质和空间结构进行分析.首先应用蛋白质分析软件包Antheprot预测HBscFv等电点,然后等电聚焦测定HBscFv等电点,在此基础上,用神经网络法预测HBscFv二级结构,然后用同源建模的方法,获得HBscFv三级结构.结果发现,HBscFv等电点理论值为8.51,实验值为7.3~8.1;PHDsec结果表明,HBscFv是一种全β蛋白质;三级结构建模表明,HBscFv的VH结构域由9个片层组成,VL结构域由8个片层组成;由于单链抗体的特殊性,三级结构建模无法给出VH与VL结构域之间进一步折叠后形成的结构。  相似文献   
2.
沙田柚花柱S-糖蛋白的纯化和N-端序列测定   总被引:6,自引:3,他引:3  
以人工自花授粉3d后的沙田柚(Citrus grandis var.Shatinyu Hort.)花柱为材料,切取1/2部位处花柱组织,匀浆后,进行抽提和硫酸铵盐析,得到35%级分的蛋白质粗提液,此液经聚丙烯酰胺凝胶电泳检测,显示出9条蛋白质带;经ConA-Sepharose4B亲和柱层析,特异峰(S^#)仅显示1条蛋白质带,恰好是35%级分中近正极端的2种蛋白质中的一种最优势蛋白质;部分生化性质测定结果表明,该蛋白质为碱性糖蛋白,糖含量为9.2%,由2个亚基组成,相对分子质量分别为38.0ku,32.0ku,等电点分别约为7.5,7.2;生物活性测定结果表明,该蛋白质能抑制离体(in vitro)萌发自花花粉花管的生长;氨其酸序列分析表明,32.0ku组分N-端15个氨基酸序列与矮牵牛,花烟草等的N-端相应序列极相似。  相似文献   
3.
沙田柚各器官特异蛋白质的研究   总被引:2,自引:0,他引:2  
利用SDS-PAGE对沙田柚(Citrus grandis var.Shatinyu Hort.)的茎、叶、花萼、花瓣、花药、花柱和子房的可溶性蛋白质进行比较分析,检测到茎中的分子质量31.0 ku,叶中的56.0 ku,花药中的59.0 ku,58.0 ku, 44.0 ku,37.2 ku,36.0 ku,35.5 ku,33.0 ku,21.0 ku,15.4 ku,花柱中的43.0 ku, 38.5 ku,子房中的33.5 ku的蛋白质分别为各器官的特异蛋白质.对茎、叶、花药、花柱的全蛋白质进行IEF-SDS-PAGE双向电泳分析结果也确定了相应于各自SDS-PAGE上特异蛋白质带的特异斑点,而且,SDS-PAGE图谱上的一条蛋白质带在IEF-SDS-PAGE双向图谱上呈现等电点不同而分子质量相同的几个斑点.各器官的蛋白质含量以花药的最高,花萼的为最低.  相似文献   
4.
重组人源性抗HBsAg单链抗体的纯化与性质鉴定   总被引:2,自引:0,他引:2  
对大肠杆菌表达的人源性抗乙型肝炎表面抗原(HBsAg)单链抗体(scFv)进行了纯化研究,并对单链抗体活性及其结构进行了鉴定。大肠杆菌表达的单链抗体包涵体,用8mol/L尿素裂解,经过Ni离子螯合亲和层析和凝胶过滤两步纯化后,纯度(ω)达到97%以上,再通过透析复性除去尿素。经间接ELISA和竞争性ELISA证明,复性后的scFv具有与HBsAg结合的活性,而且对鼠源抗HBsAg单克隆抗体的抑制率可达40.3%,基质辅助激光解析飞行时间质谱(matrix assisted laser desorption ionization,MALDI-TOF-MS)的结果证明,重组的scFv分子量与理论值相符,肽质量图谱的结果证明重组单链抗体的一级结构与理论序列是完全相符的,并确定了scFv蛋白中二硫键的位置。  相似文献   
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