EL-4荷瘤鼠单链噬菌体抗体库的构建

目的:构建一个EL-4荷瘤鼠的单链噬菌体抗体库,为筛选高特异性和高亲和力的单链抗体做准备.方法:于C57小鼠腋区接种EL-4细胞,待肿瘤长大后,从脾细胞中提取总RNA,RT-PCR技术扩增小鼠抗体重、轻链可变区基因(VH、VL),用Linker奖VH和VL基因连成单链抗体可变区片段(scFv).双酶切后(Not Ⅰ、Sfi Ⅰ)与预备好的pCANTAB5E噬粒载体连接,转化入感受态TG1,构建EL-4荷瘤鼠的单链噬茵体抗体库.随机抽取转化后的20个克隆,用以检测外源DNA的转入情况.结果:PCR扩增出的VH约有340bp和VL约有320bp,scFv的长度约有750bp.转化后的TG1约有1.67×107个茵落,随机挑取20个克隆,双酶切显示五分之一的茵落转化了外源DNA片段,有效库容为3.34×106.结论:成功构建了EL-4荷瘤鼠的单链噬茵体抗体库.     

两种抗α毒素单链抗体基因的序列分析

应用RT－PCR技术,从两株分泌具有中和活性的抗A型产气荚膜酸菌α毒素单克隆抗体（McAb)的杂交瘤细胞株2E3和1A8中,分别扩增出抗体VH和VL基因,用Linker(Gly4Ser）3基因,将VH和VL基因连接成ScFv基因2E3－ScFv和1A8－ScFv,并将其克隆至pGEM-T载体中,经核苷酸序列分析证实,VH和VL基因以及Linker基因拼接正确,2E3－ScFv基因全长为729bp,经计算机分析,VH和VL基因均为新发现的基因序列,符合功能性重排的鼠抗体可燮区基因特征,2E3－ScFv的VH和VL基因分别属于鼠免疫球蛋白重链Ⅱ（B）和轻链kⅢ家簇;而1A8－ScFv的VH和VL基因分别属于鼠免疫球蛋白重链Ⅱ（A）和轻链кⅥ家簇。     

鼠源抗AFB1噬菌体单链抗体库的构建与鉴定

研究以AFB1-BSA免疫的小鼠脾脏细胞为试验材料,利用RT-PCR技术,克隆了抗AFB1抗体重链和轻链可变区基因VH和VL,利用连接肽(Gly4Ser)3将VH和VL链接成单链抗体基因scFv,通过噬菌体展示载体pCANTAB-5E携带将其电转化E.coli TG1,经氨苄青霉素平板筛选,构建了库容为2.13×109 cfu/μg DNA的噬菌体单链抗体库,抗体库的克隆阳性率达到100%,且多样性良好,为高活性抗AFB1单链抗体的筛选提供了材料基础。     

人源性抗HBc单链噬菌体抗体库的构建

利用RT－PCR和噬菌体表面展示技术，直接从乙肝病毒核心抗体（抗HBc）阳性患淋巴细胞中提取总RNA，反转录成cDNA；合成全套人抗体可变区引物扩增抗体可变区基因，并将重、轻链可变区基因进行拼接装配成单链抗体（ScFv）基因，重组于噬菌粒载体pHEN1，转化抑制型大肠杆菌E.coliTG1，以辅助噬菌体援救后，构建成人源性单链噬菌体库。库容量达106。     

鼠源单抗3G1单链抗体基因的构建及序列分析

利用Rr—PCR方法，从分泌抗汉滩病毒mAb的杂交瘤细胞系3Gl中扩增出抗体VH和VL基因，通过PCR方法获得1inker—VL基因，进而利用加端PCR技术，在扩增出的单抗体VH和1inker—VL基因两端加上限制性酶切位点，分别克隆入pUCl8中并测序．3Gl VH基因长360bp，编码120个氨基酸；VL基因长324bp，编码108个氨基酸．在pUCl8载体中将VH和1inker—VL基因连接成ScFv基因．     

DNA免疫制备抗人CD154单克隆抗体及其轻链可变区基因序列分析

采用pcDNA3 1 hCD15 4重组质粒DNA免疫BALB c小鼠 ,制备抗人CD15 4单克隆抗体 ,得到了能分泌针对人T细胞表面CD15 4分子的特异性单抗的杂交瘤细胞株 (7E8)。通过RT_PCR扩增 7E8单抗轻链可变区基因 ,并对其进行克隆、测序、DNA序列分析和氨基酸推导 ,结果显示轻链可变区基因和氨基酸序列完全符合小鼠Ig轻链的结构特征 ,为制备基因工程抗体并应用于临床打下了基础。     

丙溴磷人源ScFv抗体的筛选与鉴定

采用菌噬体表面展示技术,以丙溴磷（profenofos）为固相包被抗原,从半合成的菌噬体单链可变区抗体库中经过3轮“吸附-洗脱-扩增”筛选过程,获得抗原特异性和结合性较强的丙溴磷人源单链可变区抗体（ScFv）片段,片段为780 bp,免疫学检测结果表明阳性克隆株具有特异结合丙溴磷抗原的生物学活性.并对6株编码ScFv的序列进行了基因组序列测定及BLA ST分析,结果表明该抗体基因序列VH属于IGHV 1、VL属于IGLV 3,证明是新的抗体基因序列.     

抗转铁蛋白受体单抗可变区基因克隆和序列分析

目的:制备基因工程抗体,减少或消除鼠源性单抗在人体内的免疫原性,保留其对人体抗原配体的高度特异性,发展临床导向诊断和治疗。方法:从体外分泌抗转铁蛋白受体单抗杂交瘤细胞系7579中,对其单抗可变区基因进行克隆和序列分析。利用逆转录PRG技术扩增轻、重链可变区基因,再分别与pGEM-T载体连接、并克隆于JM109受体菌之中。利用荧光染色链终止法测定其序列,采用DNASIS7分析软件和与NIH基因库比较分析。结果:轻、重链可变区分别由139和128氨基酸残基组成,包括信号作、互补决定区和骨架氨基酸残基等功能序列。分别属于鼠免疫球蛋白重连Ⅱc和k链Ⅵ家族。结论:来自单抗的可变区的基因是完整的和具有潜在功能性的,为体外获得抗转铁蛋白受体基因工程抗体奠定了基础。     

抗HBsAg单链抗体的等电点测定和结构模拟

应用实验生物学和计算生物学方法对重组人源抗HBsAg单链抗体(HBscFv)的部分理化性质和空间结构进行分析．首先应用蛋白质分析软件包Antheprot预测HBscFv等电点，然后等电聚焦测定HBscFv等电点，在此基础上，用神经网络法预测HBscFv二级结构，然后用同源建模的方法，获得HBscFv三级结构．结果发现，HBscFv等电点理论值为8．51，实验值为7．3～8．1；PHDsec结果表明，HBscFv是一种全β蛋白质；三级结构建模表明，HBscFv的VH结构域由9个片层组成，VL结构域由8个片层组成；由于单链抗体的特殊性，三级结构建模无法给出VH与VL结构域之间进一步折叠后形成的结构。     

抗弓形虫噬菌体单链抗体库的构建及筛选

采用弓形虫可溶性抗原攻击的小鼠,取小鼠脾脏从中提取细胞总RNA,通过RT-PCR扩增鼠源抗体VH和VL基因,并采用重叠PCR (SOE-PCR)方法构建ScFv基因,将其克隆入噬粒载体pCANTAB5E中,转化于感受态大肠杆菌TG1,通过辅助噬菌体M13K07援救构建噬菌体单链抗体库.从20个噬菌体克隆中筛选到15个具...     

基因工程抗体研究进展及其临床应用

基因工程抗体是继多克隆抗体和单克隆抗体之后的第三代抗体.近年来随着生物工程技术的发展,许多基因工程抗体陆续问世,本文详细介绍了基因工程抗体的研究进展,概述了基因工程抗体在临床方面的明显优势和应用潜力.     

噬菌体抗体库的构建

噬菌体抗体库技术是近年来非常活跃的一个研究领域,本文主要讨论噬菌体抗体库构建中一些关键的问题。     

噬菌体抗体库的构建

噬菌体抗体库技术是近年来非常活跃的一个研究领域．本文主要讨论噬菌体抗体库构建中一些关键的问题．     

基因工程抗体与制备技术的研究及应用

介绍了天然抗体的分子结构,对基因工程抗体的发展过程进行了回顾,陈述了各种基因工程抗体的设计思路、方法的特点,并在此基础上分析了当前基因工程抗体在临床上的应用前景。     

Effects of interlinker sequences on the biological properties of bispecific single-chain antibodies

Single-chain bispecific antibody (scBsAb) is one of the promising genetic engineering antibody formats for clinical application. But the effects of interlinker sequenees on the biological properties of bispecific single-chain antibodies have not been studied in detail. Three interlinker sequences were designed and synthesized, and denominatedas Fc, HSA, 205C‘, respectively. Universal vectors with these different interlinker sequences for scBsAb expression in E.coli were constructed. A model scBsAb based on a reshaped single-chain antibody (scFv) against human CD3 and a scFv directed against human ovarian carcinoma were generated and expressed in E. coli. The results of SDS-PAGE and Western blot showed that the different interlinker sequences did not affect the expression level of scBsAb. However, as demonstrated by ELISA and pharmacokinetics studies performed in mice, scBsAbs with different interlinker sequenees had difference in the antigen-binding activities and terminal haw-life time (T1/2β) in vivo, the interlinker HSA could remarkably prolong the retention time of scBsAb in blood. These results indicated that the peptide sequence of intertinker could affect important biological properties of scBsAb, such as antigen-binding properties and stability in vivo. So, selection of an appropriate interlinker sequence is very important for scBsAb construction. Optimal interlinker can bring scBsAb biological properties more suitable for clinical application.     

两种检测方法在甲状腺疾病自身抗体中的应用

目的 对甲状腺疾病患者进行抗甲状腺球蛋白抗体和抗甲状腺过氧化物酶抗体的电化学发光法和免疫荧光法分析.方法 应用甲状腺自身抗体检测试剂盒作抗甲状腺球蛋白抗体和抗甲状腺过氧化物酶抗体检测,在荧光显微镜下观察荧光模型,同时作滴度分析,对每一滴度做电化学发光法定量检测.结果 应用免疫荧光法检测滴度＜1∶20的标本TGAb为42.33 μg/L,TPOAb为19.81 IU/mL,1∶40为阳性的标本TGAb为102.55 μg/L,TPOAb为62.74 IU/mL等.结论 本实验所用的免疫荧光法与电化学发光法检测TGAb与TPOAb相关性甚好,可用于临床疾病诊断的相关替代方法.     

Monoclonal Anti-CD4 Antibody MT310 Binds HIV-1 gp120 Binding Site on CD4

IntroductionHuman immunodeficiency virus type1 ( HIV- 1 ) ,after binding by the envelope protein gp1 2 0 to itscellular receptor CD4,enters susceptible cellsthrough p H- independent fusion[1,2 ] . The sitewhich HIV- 1 gp1 2 0 binds is located in the firstdomain on the CD4molecule[3 5] .The anti- CD4m Ab Leu3a recognizes the gp1 2 0 binding site onCD4[6] and the anti- CD4m Ab MT31 0 stronglyinhibits HIV- 1 infection of CD4+ T cells,while theanti- CD4 m Ab MT1 5 1 weakly inhibitsinf…     

鸡禽流感母源抗体的消长规律及其免疫效果研究

为探讨科学的鸡禽流感免疫程序,对1～28日龄的土杂肉鸡和罗曼蛋鸡进行禽流感母源抗体检测,以及对雏鸡接种禽流感油乳剂疫苗后的HI抗体水平变化进行了监测。结果表明,两种雏鸡的母源抗体水平在1日龄时均达最高值,然后逐渐下降;肉鸡11日龄后H5、H9抗体滴度分别降低到4.2log2和4.3log2以下;蛋鸡28日龄后H5、H9...     

猪瘟母源抗体消长规律的测定和免疫效果观察试验

本试验测定了6窝母猪免疫后产小猪0、1、7、14、21、28、35、42日龄猪瘟母源抗体消长情况和28～35日龄首免及二免后免疫效果观察。结果:未吃初乳的0日龄仔猪无母源抗体,1日龄仔猪母源抗体滴度达到高峰,以后逐渐降低;猪瘟母源抗体对1～28日龄的仔猪有保护,少部分仔猪在35日龄还有保护。28～35日龄首免后21日达到73.3%免疫保护,28日则达到93.3%;首免后1个月加强免疫一次,其较高的免疫抗体水平可以维持到二免后4个月,到5个月还能产生免疫保护,免疫合格率为73.3%,但6个月后免疫合格率降至46.7%;因此建议生产实际中,商品猪进行两次免疫即可,种猪以后每6个月免疫一次。     

57例不规则抗体干扰ABO血型鉴定分析

通过研究干扰血型鉴定的不规则抗体的特异性及类型,为正确的进行血型鉴定提供实验参考依据。2013年7月至2014年7月对22 558例患者进行血型及不规则抗体筛查检测,对因不规则抗体干扰血型鉴定患者进行抗体鉴定,明确抗体特异性及类型,并选择与抗体对应抗原阴性的红细胞制备反定型细胞进行血型鉴定,以排除干扰明确血型。结果:发现57名患者因MNS、Rh、Lewis、Duffy、P血型系统产生的不规则抗体干扰血型鉴定,其中抗-M最多,共37例,占64.91%,其次为抗-E和抗-e相关抗体,均为5例,分别占8.77%;抗-Lea3例,占5.26%;Ig G与Ig M类混合抗体37例,单纯Ig G类抗体14例,单纯Ig M类抗体6例。研究结果表明,Ig M和Ig G类不规则抗体均可干扰血型鉴定,以Ig M类为主。