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1.
本研究利用逆转录PCR技术和家族特异性引物,先后从9株分泌不同特异性单抗杂交瘤细胞株中扩增出了轻、重链可变区基因,并经克隆和序列测定。其中利用轻链引物(VL5.1和VL3.1)从分泌抗转铁蛋白受体(anti-transferrlin receptor)单抗的杂交瘤细胞株(7579)中扩增出了无功能的V_k序列。经分析和与GenBank数据库比较,该序列虽与BALB/cV_k21-E细胞株分泌的抗体轻链有98%同源性,但是在其V/J连接区内有4个碱基对缺失,导致后续阅读框架移位,因而出现终止密码子而致翻译停止。当改变引物(VL5.2和VL3(JK1/2))之后,又分别从该种杂交瘤细胞株中扩增出有功能的V_k基因序列。说明同种杂交瘤细胞中,部分细胞出现基因异常性重排(aberrant rearrangement),而这种重排的V-J基因片段来源于原融合细胞MOPC-21骨髓瘤细胞系。  相似文献   
2.
目的:制备基因工程抗体,减少或消除鼠源性单抗在人体内的免疫原性,保留其对人体抗原配体的高度特异性,发展临床导向诊断和治疗。方法:从体外分泌抗转铁蛋白受体单抗杂交瘤细胞系7579中,对其单抗可变区基因进行克隆和序列分析。利用逆转录PRG技术扩增轻、重链可变区基因,再分别与pGEM-T载体连接、并克隆于JM109受体菌之中。利用荧光染色链终止法测定其序列,采用DNASIS7分析软件和与NIH基因库比较分析。结果:轻、重链可变区分别由139和128氨基酸残基组成,包括信号作、互补决定区和骨架氨基酸残基等功能序列。分别属于鼠免疫球蛋白重连Ⅱc和k链Ⅵ家族。结论:来自单抗的可变区的基因是完整的和具有潜在功能性的,为体外获得抗转铁蛋白受体基因工程抗体奠定了基础。  相似文献   
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