重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白生物仿制药对大鼠类风湿性关节炎的治疗作用

目的:评价重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白(TNFR-Fc)生物仿制药对大鼠佐剂性关节炎的治疗作用.方法:将大鼠随机分成6组:阴性对照组(生理盐水)、阳性药物组(Enbrel)和TNFR-Fc高、中、低质量分数组,空白组(无炎症),每组6只,弗氏完全佐剂(CFA)建立类风湿性关节炎模型.给药13 d后,分别测量大鼠体重、后足足垫厚度,关节炎指数评分,ELISA法测量细胞因子水平.结果:与阴性对照组相比,Enbrel组和TNFR-Fc大、中、小质量分数组的大鼠体质量明显增加(P0.05)、继发性足肿胀减弱(P0.05)、关节炎评分分值、IL-1β、TNF-α、IL-6含量均减小(P0.05),IL-10含量升高(P0.05).结论:TNFR-Fc通过降低炎性细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α水平以及升高IL-10水平来发挥治疗类风湿性关节炎的作用.     

抗HBsAg单链抗体的等电点测定和结构模拟

应用实验生物学和计算生物学方法对重组人源抗HBsAg单链抗体(HBscFv)的部分理化性质和空间结构进行分析．首先应用蛋白质分析软件包Antheprot预测HBscFv等电点，然后等电聚焦测定HBscFv等电点，在此基础上，用神经网络法预测HBscFv二级结构，然后用同源建模的方法，获得HBscFv三级结构．结果发现，HBscFv等电点理论值为8．51，实验值为7．3～8．1；PHDsec结果表明，HBscFv是一种全β蛋白质；三级结构建模表明，HBscFv的VH结构域由9个片层组成，VL结构域由8个片层组成；由于单链抗体的特殊性，三级结构建模无法给出VH与VL结构域之间进一步折叠后形成的结构。     

兔抗SARS冠状病毒IgG的纯化及鉴定

目的：制备高纯度的兔抗SARS冠状病毒的IgG。方法：采用辛酸-硫酸铵沉淀进行初纯，以及DEAE离子交换层析精纯IgG，利用SDS-PAGE对纯化后的IgG纯度进行测定，利用间接ELISA、病毒中和滴定对IgG进行效价测定。结果：纯化后的IgG相对纯度达到90％以上，ELISA检测效价为1：4800，病毒中和效价为1：640。结论：利用上述纯化工艺能获得高纯度的兔抗SAILS冠状病毒IgG，同时抗体活性损失较小。     

HBscFv毕赤酵母工程菌的中试发酵及产物纯化

中试规模生产可溶性重组人抗HBsAg单链抗体 (HBscFv) ,分泌表达HBscFv的巴氏毕赤酵母 (P .pastoris)工程菌在 30L发酵罐中进行补料分批培养 .上清中的HBscFv以离子交换及免疫亲和层析两步法进行纯化 .发现酵母工程菌经 7d补料分批培养后 ,6 0 0nm波长下的光密度值 (OD6 0 0 )达到 334,目的蛋白表达量为 2 6 0mg/L .纯化后 ,可获得纯度为95 %的HBscFv ,产量为 171mg/L .活性测定结果表明 ,HBscFv制品的比活性为 (2 5 2±0 17) μg- 1,与大肠杆菌来源的HBscFv无明显差异 .     

nm23-H1基因与人早幼粒白血病细胞HL-60增殖的相关性分析

目的探讨nm23-H1基因的表达与白血病细胞HL-60增殖之间的关系。方法：以25ng／mL阿糖胞苷处理HL-60细胞，MTT法测定细胞生长抑制率，NBT还原比色法判断细胞分化状况，RT-PCR检测nm23-H1基因表达的变化；构建nm23-H1基因的真核表达质粒pEGFP-N1-nm23-H1，转染HL-60细胞，通过细胞生长曲线和血清依赖性实验检测nm23-H1基因的过表达对HL-60细胞生长的影响。结果：小剂量Ara-C对HL-60细胞的生长呈时间依赖性抑制，作用4d后细胞NBT还原能力增强且nm23-H1基因的表达下调；转染nm23-H1基因的HL-60细胞生长加快、血清依赖性下降。结论：Ara-C对HL-60细胞增殖的抑制作用与下调nm23-H1基因的表达有-定关系；nm23-H1基因在HL-60细胞中的过表达有促细胞增殖的作用，即增高了HL-60细胞的恶性程度。     

nm23-H1基因对乳腺癌细胞MCF-7S增殖及移动特性的影响

目的：探讨nm23—H1基因转染乳腺癌细胞后对其增殖和转移能力的影响。方法：用人nm23—H1基因与真核表达质粒pcDNA3．1(—)构建成重组表达质粒pcDNA3．1—NMHl，转染人乳腺癌细胞MCF—7S，经G418筛选4周后，筛选出稳定表达nm23—H1的细胞株，绘制其生长曲线，检测其增殖、移动能力，用SPSS统计软件处理实验数据，分析nm23—H1基因对乳腺癌细胞的作用。结果：与对照组相比，转染nm23—H1基因的MCF—7S细胞的对数生长期延长，细胞增殖速度减慢，移动距离缩短，克隆形成率降低。结论：nm23—H1基因在乳腺癌细胞的体外实验中有抑制癌细胞生长、增殖、转移能力的作用。     

重组人源性抗HBsAg单链抗体的纯化与性质鉴定

对大肠杆菌表达的人源性抗乙型肝炎表面抗原（HBsAg)单链抗体（scFv)进行了纯化研究，并对单链抗体活性及其结构进行了鉴定。大肠杆菌表达的单链抗体包涵体，用8mol/L尿素裂解，经过Ni离子螯合亲和层析和凝胶过滤两步纯化后，纯度（ω）达到97％以上，再通过透析复性除去尿素。经间接ELISA和竞争性ELISA证明，复性后的scFv具有与HBsAg结合的活性，而且对鼠源抗HBsAg单克隆抗体的抑制率可达40.3%，基质辅助激光解析飞行时间质谱（matrix assisted laser desorption ionization,MALDI-TOF-MS)的结果证明，重组的scFv分子量与理论值相符，肽质量图谱的结果证明重组单链抗体的一级结构与理论序列是完全相符的，并确定了scFv蛋白中二硫键的位置。     

重组BbFGF工程菌的发酵条件

利用大肠杆菌BL21（DE3）pLysS生产重组牛碱性成纤维细胞生长因子(BbFGF),对此工程菌的发酵条件进行了研究，在前期试验的基础上，重点探索培养基、诱导剂及区葡萄糖添加方式对T7启动子指导下的bFGF合成的影响，根据摇瓶试验和分批发酵试验结果，建立了一套变速加葡萄糖的高密度补料分批发酵工艺，在此工艺下，经11h发酵，可得光密度为30.7、bFGF产量为95mg/L的发酵产物，两步法纯化目的蛋白，得到纯度为95%的重组bFGF，其生物活性和标准品一致。