一转录因子能够抑制细胞迁移

细胞迁移对胚胎发育的组织、器官形成等有重要贡献。干细胞需要在一些特定的转录因子的作用下才能维持其干性,在细胞分化的过程中这些转录因子的表达会被抑制。细胞分化往往也会伴随细胞迁移能力的变化。最近中国科研人员研究发现,在普通培养细胞内异位表达Nanog、Oct4、Sox2等干细胞转录因子能够显著     

人胚神经干细胞的体外培养

目的　探讨人胚神经干细胞体外培养的条件和分化情况 ,以摸索出一种切实可行的能获得较纯且多潜能人胚神经干细胞的方法 .方法　采用取 3月龄人胎脑 ,用胰蛋白酶消化法分离单个细胞 ,部分冻存 ,另一部分进行细胞培养 ,加EGF ,bFGF刺激生长 ,有限稀释法获得单细胞克隆 ,血清诱导分化 ,并用免疫组化方法进行鉴定 .结果　EGF和bFGF同时存在于无血清培养基中 ,有大量神经干细胞团生成 ,含血清培养基则诱导神经干细胞分化成为神经元、星型胶质细胞、少突胶质细胞 .结论　神经干细胞的存活和分裂有赖于EGF和bFGF的共同作用 .经冻存后的胎脑细胞同样能分离培养出有活性的神经干细胞 .     

日本科学家研究鉴别出一种新型转录因子

日本科学家2006年利用逆转录病毒将4种转录因子：Oct3/4,Sox2,c-Myc,Klf4导入已分化完全的小鼠纤维母细胞中,将其重新编排变成全能性的类胚胎细胞,并将这些＂返老还童＂的重编排细胞命名为诱导多能性干细胞,即iPS细胞。iPS细胞发表后震动了整个生物学界,引发了全世界投入iPS细胞研究的热潮。iPS技术绕开了胚胎干细胞研究面临的伦理和法律等障碍,因而被视为是在医疗领域具有广阔应用前景的资源。然而近年来尽管科学家们对iPS细胞研究不断深入,诱导转化生成iPS效率低下并且c-Myc基因和Klf4基因具有致癌性。这仍然是制约iPS临床应用的最大问题。     

Bmi-1促进人诱导多能干细胞分化的神经元存活的作用与机制研究

在神经退行性疾病的干细胞治疗研究中，人诱导多能干细胞（human induced Pluripotent Stem Cell,hiPSC）体外分化的神经元比较脆弱，移植到体内后容易死亡，是干细胞治疗亟需攻克的难题.条件性表达Bmi-1(BlymphomaMo-MLVinsertionregion1)的hiPSC细胞系（UH10-Dsred+Bmi-1）能够有效抵抗细胞凋亡、显著提高种间嵌合效率，为检测Bmi-1对hiPSC诱导的神经元存活率的影响，本研究在UH10-Dsred+Bmi-1细胞系基础上，转入Tet-on系统调控运动神经元转录因子Ngn2-Isl1-Lhx3(NIL)的表达.在加入强力霉素（Doxycycline,Dox）后，同时诱导Bmi-1和NIL的表达，获得过表达Bmi-1的神经元.研究表明，过表达Bmi-1的神经元能够抵抗传代应激引起的神经元凋亡、降低肌萎缩侧索硬化症（Amyotrophiclateral sclerosis,ALS）基因突变的小鼠神经胶质细胞（Glia）诱导的神经元毒性，从而有效提高神经元的存活率.     

神经元素3蛋白(Ngn3)诱导大鼠骨髓间充质干细胞向胰岛素表达细胞分化的初步研究

胰腺发育相关基因神经元素3（neurogenin3,Ngn3）,属于碱性螺旋-环-螺旋（basichelix-loop-helix,bHLH）家族的转录因子,对胰腺内分泌细胞的发育及分化至关重要,且被认为是胰腺祖细胞的标志蛋白质．之前的研究发现,全长Ngn3蛋白具有蛋白质转导功能,可以高效进入多种真核细胞系．近年来多项研究显示,骨髓间充质干细胞是一种具有多向分化潜能的多能干细胞．利用蛋白质转导技术,将体外表达纯化的胰腺发育重要因子Ngn3蛋白导人体外分离培养的大鼠骨髓间充质干细胞中,诱导其向胰岛素表达细胞分化．结果显示,经Ngn3蛋白诱导的大鼠骨髓间充质干细胞出现细胞聚集生长现象,并有形状类似胰岛的细胞团出现．RT-PCR结果显示经Ngn3蛋白诱导的大鼠骨髓间充质干细胞可以有效表达胰岛素,并且一些β细胞相关基因如胰十二指肠同源盒基因-1（pancreatic-duodenal homeoboxl,Pdx-1）,神经分化因子（neurogenic differentiation,NeuroD）,同源结构域基因4（pairedboxgene4,Pax4）,葡萄糖转运体-2（gluoase transporter2,Glut-2）都有表达．细胞免疫荧光也可检测到胰岛素的表达．通过Ngn3蛋白质诱导分化大鼠骨髓间充质干细胞的初步研究,探索了应用骨髓间充质干细胞体外诱导分化获得胰岛素表达细胞的可行性,为糖尿病治疗提供一定的实验依据．     

人和小鼠神经干细胞的体外培养的分化研究

首次克隆了小鼠神经元标志性微管蛋白βⅢ基因，从核苷酸序列推导出小鼠与人两者之间在其羧基端有相同的EAQGPK六肽，进一步证实用抗人微管蛋白βⅢ单抗可检测小鼠神经干细胞分化成的神经元细胞，免疫组化鉴定显示小鼠神经干细胞在体积分数为1％胎牛血清（FBS）诱导下，可分化成神经元，星形胶质细胞，少突胶质细胞，同时培养了13周龄胎儿脑来源的人类神经干细胞，用特异性的抗人nestin抗体鉴定，全部为阳性细胞，但它们经诱导分化产生较不同寻常的细胞分化细胞和分化程度，在生长因子减半和1％FBS诱导条件下可分化为神经元和星形胶质细胞，而无少突胶质细胞分化，NF单抗检测证实为早期分化的神经元。     

异源四倍体鲫鲤Sox4基因部分序列及其5′端调控区启动子片段的克隆与分析

通过PCR技术从异源四倍体鲫鲤基因组DNA中分离到Sox4基因部分基序.序列分析表明,其5′端调控区具有多种启动子所特有的序列元件,如TATA框,CAAT框等,据此推测,它具有启动子活性.采用高保真PCR方法克隆了异源四倍体鱼Sox4基因5′端调控区600bp启动子片段,将其插入启动子缺失的增强绿色荧光蛋白(EGFP)表达载体pEGFP-1中,构建重组载体pAtsox4EGFP-1.通过瞬时转染HeLa细胞,在倒置荧光显微镜下可检测到绿色荧光.结果表明,克隆的Atsox4基因5′端调控区具有启动子活性,并成功构建了含四倍体鱼Sox4基因启动子片段的报告基因载体,为以后研究Sox4基因表达调控的分子机制奠定了基础.     

人骨髓间充质干细胞体外扩增和向神经细胞定向诱导分化的研究

骨髓间充质干细胞(MSC)是一类存在于骨髓中的具有多向分化潜能的干细胞,在体外不仅可以分化为间充质类细胞,而且可以分化为非间充质类细胞.研究了人骨髓间充质干细胞的体外分离、扩增和向神经细胞的定向诱导分化条件.从骨髓中分离MSC,用MesenCult培养基进行纯化和扩增培养.每扩增一代,细胞数量增加约2～3倍,在体外扩增12代后扩增约4.6×10 4 倍;诱导不同扩增代数的MSC向神经细胞分化,诱导后的细胞平均有80%以上呈现典型的神经元样表型.免疫组化法检测发现,神经元样细胞强表达神经丝蛋白和神经元特异性烯醇化酶,组织化学法检测观察到神经元特有结构尼氏体,表明MSC在体外具有向神经细胞分化的潜能.     

含白血病抑制因子条件培养液对于小鼠iPS细胞多能性维持的影响

白血病抑制因子(Leukemia inhibitory factor,LIF)在维持小鼠胚胎干细胞(Embryonic stem cells,ES cells)和诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cells,iPS cells)体外长期培养和多能性方面具有重要作用,但在专利权的保护下,商品化的LIF始终维持较高的价格,给干细胞相关研究带来了高昂经费支出.因此,寻找商品LIF的替代品用于小鼠iPS细胞培养,将对于降低研发成本具有重要意义.本研究使用一种可分泌小鼠LIF的永生化细胞,利用其条件培养液进行iPS细胞的培养,探讨了不同稀释比对于小鼠iPS细胞体外培养及多能性的影响.将条件培养液分别稀释10倍、20倍、40倍和80倍加入培养基中培养iPS细胞,以商品化LIF作为对照组.结果显示,在不同稀释比的培养条件下,iPS细胞均可以保持典型的胚胎干细胞样克隆,且均能在稀释10倍、20倍、40倍、80倍条件下稳定传代20代以上,其中在稀释40倍条件下iPS细胞的克隆形态最好,细胞克隆较大,呈典型的隆起状,克隆周边折光较好;免疫荧光染色显示,各实验组细胞均表达多能性蛋白,Oct4、Sox2、Nanog、SSEA1.定量PCR分析显示,与在商品化LIF培养液中培养的iPS细胞相比,在40倍稀释的条件培养液内培养的细胞,在第12代的多能基因Oct4、Sox2、Nanog、AKP和CD31的表达量均显著高于对照组.此外,在10、20和80倍稀释培养条件下,Nanog的表达量高于对照,差异显著.体外分化结果显示,不同浓度LIF条件培养液和商品化LIF培养的iPS细胞均能形成类胚体,并分化为三个胚层的细胞.当将细胞注入免疫缺陷小鼠皮下,仅40倍稀释和商品化LIF培养的iPS细胞能够形成畸胎瘤,并分化为外、中、内三胚层组织.本研究优化获得了一个能够在体外长期维持iPS细胞多能性的LIF条件培养系统.     

纹状体神经干细胞的分离培养及其鉴定

胎脑内存在有能分化为神经元和神经胶质细胞的神经干细胞 .在表皮生长因子 (EGF)或碱性成纤维细胞生长因子 (b FGF)存在的条件下 ,从 14d胎鼠纹状体分离培养神经干细胞 ,并通过间接免疫荧光细胞化学法对其鉴定 ,发现大量呈 Nestin抗原阳性的干细胞团的形成 ,EGF和 b FGF对神经干细胞的增殖及分化能产生一定的影响 ,但它们对增殖及分化的影响是有差别的 .     

CdTe量子点对HeLa细胞的初步标记

采用巯基丙酸作为稳定剂在水相中合成了水溶性的CdTe量子点,并通过量子点外层包被的羧基实现了量子点与兔抗人癌胚抗原抗体和山羊抗兔免疫球蛋白的链接.把链接了兔抗人癌胚抗原抗体的量子点溶液和链接山羊抗兔免疫球蛋白的量子点溶液作为荧光探针,利用直接法和间接法分别对HeLa活细胞和固定细胞进行了标记.通过荧光显微镜成像观察到直接法和间接法均可以对HeLa细胞进行标记,但间接法具有更好的特异性,表明可以通过癌细胞表面的癌胚抗原与抗体之间的免疫反应实现对癌细胞的荧光标记.     

热处理对HeLa细胞微管影响的研究

目的:用HeLa细胞作模型,研究热处理对肿瘤细胞微管的影响.方法:用不同温度(37°C、、40°C43°C和45°C)经不同时间(1h和2h)水浴处理培养的HeLa细胞后,分别即时用SABC法显示其微管.结果:与37°C相比,40°C处理后的HeLa细胞微管变化不大,43°C处理后,微管开始解聚,并随着作用时间的延长而加剧,45°C处理2h,微管组织中心消失.结论:高温能引起HeLa细胞微管呈现渐进式的解聚变化,微管组织中心具有较强的保护作用.     

脉冲电磁辐射对癌细胞的影响

通过对Hela细胞及艾氏腹水癌细胞进行电磁脉冲鼾，可以看到照射后HELA细胞较对照组有明显变化，且变化随照射时间的增加逐步显现、加强。艾氏腹水癌细胞经脉冲电磁场照射后摄取^3H-Td的量明显高于对照组，而且照射时间不同，对3h-tdr摄取量也不等。从而为电化学治疗癌病的理论研究提供科学的依据。     

全反式维甲酸对小鼠胚胎不同阶段神经干细胞诱导作用研究

目的:探讨全反式维甲酸对小鼠胚胎不同阶段神经干细胞(NSCs)的诱导分化情况.方法:分离孕12.5d及15.5d的胚胎小鼠脑皮质.取第3代NSCs,用含1μmol·L-1的全反式维甲酸在体外诱导小鼠胚胎不同阶段的NSCs.诱导5d后,通过神经元微管相关蛋白2(MAP2)免疫荧光染色和Westernblots检测NSCs分化为神经元的比例.结果:与对照组相比,全反式维甲酸可明显提高神经元分化的比例.E12.5干细胞和E15.5胚胎干细胞分化为神经元的比例分别为30%±1.47%和16.21%±1.36%.结论全反式维甲酸具有显著的促神经干细胞分化成神经元的效应,并对胚胎不同阶段神经干细胞的诱导作用有所不同.     

神经干细胞的诱导分化

目的：探讨神经干细胞（NSCs）的诱导分化机制。方法：本文就Nscs的来源、分布、诱导分化的调控机制和因素以及其应用前景作一综述。结果：神经干细胞可从鼠、人的胚胎和成年中枢神经系统（CNS）成功分离并培养，具有自我更新和多分化潜能，经体外诱导或植入体内后均能分化为成熟神经元和神经胶质细胞。结论：神经干细胞的发现和研究的深入为神经发育研究及中枢神经功能重建提供了新的思路。     

单加成C60衍生物对HeLa细胞生长的影响

研究单加成Ｃ６衍生物对人宫颈癌ＨｅＬａ细胞生长的影响,合成了Ｃ６０羧酸酯（Ｃ１）和Ｃ６０甘氨酸酯（Ｃ２）两个单加成的Ｃ６０衍生物;制备了Ｃ６０及两个衍生物的聚乙烯基吡咯烷酮水溶液,并利用ＭＴＴ法研究了它们以人宫颈癌ＨｅＬａ细胞的作用。Ｃ６０,Ｃ１在不光照及两种光照条件下对ＨｅＬａ细胞的生长均不起作用,而Ｃ２在功率为３００Ｗ的碘钨灯光照时则表现出明显的抑制作用。该结果提示Ｃ６０衍生物对细胞生长的作用     

空间环境对离体动物细胞的影响

空间环境是指远离地球表面的宇宙环境,它与地球表面环境有所不同,处于其中的动物细胞可能受到各种影响。空间环境中的主要因素包括空间辐射、极端温度、高真空、微磁场以及搭载动物细胞的航天器中的特殊环境——微重力环境。其中,对动物细胞影响最大的是空间辐射和微重力环境。空间辐射作用于动物细胞将直接造成其损伤,影响它的结构和功能;空间微重力条件下,动物细胞的结构、增殖和基因及蛋白质表达均发生明显变异,这些变化大多是适应性的,返回地球表面后能够很快恢复正常。