热疗后Hela细胞微丝和形态改变关系的研究

目的:用Hela细胞作模型,研究热疗后肿瘤细胞的微丝变化与其形态学上改变的关系。方法:用不同温度(37℃、40℃、43℃和45℃)经不同时间(1h和2h)水浴处理培养的Hela细胞后,倒置显微镜下观察其形态变化,并用考马斯亮蓝R250显示其微丝。结果:37℃和40℃处理后Hela细胞形态和微丝分布均正常;43℃、2h处理后开始有一定程度的形态改变,微丝分布较散乱,变短;45℃处理后有明显形态变化,微丝大多完全解聚成球状,分布极为紊乱。结论:高温引起的Hela细胞微丝的解聚可导致细胞的形态改变,两者之间有着极为密切的联系。     

佛手叶挥发油对HeLa细胞形态与结构的影响

探讨了佛手叶挥发油对HeLa细胞形态与结构的影响.采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力,倒置显微镜、荧光显微镜和电子显微镜观察细胞形态与结构的变化,免疫荧光结合激光共聚焦显微镜观察微管的分布.结果表明:佛手叶挥发油能够抑制HeLa癌细胞的增殖,呈剂量和时间依赖性;不同浓度的佛手叶挥发油处理HeLa癌细胞24 h后,低剂量(200μg/mL)佛手叶挥发油使HeLa细胞皱缩,染色质凝集,出现凋亡小体,微管解聚,表现为典型的凋亡特征;中、高剂量(400和800μg/mL)佛手叶挥发油使HeLa细胞膜裂解,内容物外泄,细胞碎片增多,表明细胞已坏死.     

葡萄糖饥饿对HeLa细胞形态与结构的影响

为了探究葡萄糖饥饿对HeLa细胞形态与结构的影响,采用噻唑蓝法检测了细胞活力;用倒置显微镜、荧光显微镜和电子显微镜观察了细胞形态与结构的变化;采用激光共聚焦免疫荧光技术观察了细胞微丝与微管的分布.结果表明:葡萄糖饥饿能够抑制HeLa细胞增殖,破坏细胞骨架,改变细胞形态;使细胞皱缩、染色质凝集,出现凋亡小体,微丝微管解聚,表现出典型的凋亡特征,且细胞凋亡程度呈葡萄糖浓度依赖性和处理时间依赖性.总之,葡萄糖饥饿能抑制HeLa细胞活性,改变细胞形态,诱导细胞凋亡.     

高温和姜黄素联合作用诱导HeLa细胞周期阻滞和凋亡

目的:研究不同高温和姜黄素联合作用对肿瘤细胞的生长抑制作用.方法:37~43℃与0~40mol/L姜黄素联合作用4~16h后,MTT比色法检测细胞活性,流式细胞仪测定细胞周期时相变化.结果:高温作用后主要引起细胞凋亡和G0/G1期阻滞,姜黄素能抑制HeLa细胞的体外生长,呈时间与剂量依赖性,细胞周期阻滞于G0/G1期.联合作用后表现出了两者作用的双重特点.结论:应用高温和中药联合治疗可能是提高肿瘤治愈率、减少对正常组织细胞损害的有效方式之一.     

云芝多糖影响人宫颈癌HeLa细胞的增殖和凋亡的研究

研究云芝多糖(CVP)对宫颈癌HeLa细胞系的增殖、凋亡及产生途径。采用MTT法测定了CVP对HeLa细胞增殖的体外抑制作用,流式细胞仪检测凋亡细胞的比例,qRT-PCR检测P53、Bcl-2和Fas基因在细胞处理前后表达量的变化。结果显示：CVP以时间和剂量依赖的方式抑制HeLa细胞的生长。作用时间在24 h,48 h和72 h时对细胞抑制的抑制率分别为92%、95%和98%;当CVP浓度达到1.25 mg/L时,作用24 h、48 h和72 h时的IC50值分别为0.2507±0.01 mg/L、0.2720±0.04 mg/L和0.2736±0.03 mg/L;当CVP浓度为0.5 mg/L时,作用24 h和48 h后细胞凋亡率分别为26.36% 和63.81%;CVP处理HeLa细胞24 h后,Bcl-2基因的表达被显著下调。研究表明：CVP促进HeLa细胞凋亡,其作用机制与Bcl-2基因的表达下调有关,推测是通过Bcl-2介导的途径促进细胞凋亡。图4表1参30     

钙调素拮抗剂TFP对Hela细胞微丝及波形纤维蛋白分布的影响

利用钙调素拮抗剂三氟拉嗪（ＴＦＰ）及微管的不同聚合状态对Ｈｅｌａ细胞微丝及波形纤维蛋白分布的影响进行了研究。Ｈｅｌａ细胞微丝明显解聚，而波形纤维蛋白则密集分布在细胞核一侧。细胞经ＴＦＰ处理２ｄ后，可见微丝分布的恢复，而波形纤维蛋白分布则变得分散，并向质膜延伸。但对ＴＦＰ处理２ｄ后的细胞用低温（２～４℃）处理，使微管解聚，或以紫杉酚（ｔａｘｏｌ）处理２４ｈ，使微管高度聚集以破坏其微管网络系统时，微丝则随之发生明显的解聚现象，而波形纤维蛋白又恢复为密集分布于细胞核一侧的状态。若在低温处理前加ｔａｘｏｌ预处理１．５ｈ，以稳定微管时，此时在细胞周边仍可见微丝存在，波形纤维蛋白仍保持其分散分布状态。结果表明经ＴＦＰ处理的Ｈｅｌａ细胞微丝及波形纤维蛋白分布的变化可能与微管分布的改变具有一定的联系。     

钙调素拮抗剂TFP对Hela细胞微丝及波形纤维蛋…

利用钙调素拮抗剂三氟拉素（ＴＦＰ）及微管的不同聚合状态对Ｈｅｌａ细胞微细及波形纤维白分布的影响进行了。Ｈｅｌａ细胞微丝明显解聚，而波形纤维蛋白则密集分布在细胞一侧。细胞经ＴＦＰ处理２ｄ后，可见微丝分布的恢复，而波形纤维蛋白分布则变得分散，并向质膜延伸，但对ＴＦＰ处理２ｄ后的细胞用低温（２－４℃）处理，使微管解聚，或以紫杉酚处理２４ｈ，使微管高度聚集以破坏其微客网络系统时，微丝则随之发生明显的解聚现     

动力蛋白轻链亚基LC8在人细胞内的亚细胞定位

动力蛋白是活跃于微管骨架上行使负向运输功能的分子马达.从人类B淋巴细胞cDNA文库中克隆得到动力蛋白轻链亚基的基因LC8,将该基因插入表达绿色荧光蛋白的载体pEGFP-C3,获得的重组DNA成功在两种人源细胞内表达.通过荧光实验对GFP-LC8亚细胞定位进行分析,确定GFP-LC8是典型细胞浆定位,主要分布在细胞外周区和微管组织中心附近.当用药物nocodazole处理细胞使微管解聚时,GFP-LC8的定位发生改变.表明融合蛋白可正确指示LC8的细胞定位,可用于进一步研究病毒感染后的胞内事件.     

PKCθ-EGFP融合蛋白在HeLa细胞中的表达及其对细胞形态的影响

目的:分析增强型绿色荧光蛋白(EGFP)与蛋白激酶C-θ(PKCθ)的融合蛋白(PKCθ-EGFP)在HeLa细胞中的表达、亚细胞定位及其对细胞形态的影响。方法:用脂质转染胺(Lipofec-tAMINE 2000)为载体分别以pPKCθ-EGFP和pEGFP-N1转染HeLa细胞,流式细胞仪分析其表达率,激光共聚焦显微镜分析其亚细胞定位,同时分析二丁酸佛波醇酯(PDB)和小檗碱对其亚细胞定位和细胞形态的影响。结果:转染pEGFP-N1或pPKCθ-EGFP的HeLa细胞48 h后,表达绿色荧光的细胞百分率分别为(70.9±4.4)%和(45.8±2.3)%(P<0.05)。表达的PKCθ-EGFP融合蛋白均匀分布于细胞内,与EGFP蛋白在细胞内的分布相似。PDB刺激30 min后,表达PKCθ-EGFP的HeLa细胞的形态发生显著变化,即由原来的梭形变成圆形,荧光强度增强。但表达EGFP的HeLa细胞的形态及荧光分布均不受影响。小檗碱对PDB诱导的HeLa细胞的形态和EGFP-PKCθ融合蛋白的分布无明显影响。结论:表达PKCθ-EGFP融合蛋白的HeLa细胞在PDB作用下细胞形态发生显著变化。     

蝉花提取物通过促进HeLa细胞氧化胁迫应答抑制H_2O_2诱导的细胞衰老

本实验探究蝉花提取物(CCE)通过促进HeLa细胞的氧化胁迫应答抑制H_2O_2诱导的细胞衰老.在实验中,使用不同浓度的CCE处理HeLa细胞48h或72h,检测细胞的存活率.然后使用H_2O_2在HeLa细胞中诱导氧化胁迫,检测CCE处理组和对照组细胞的β-半乳糖苷酶活性和ROS水平的变化.HeLa细胞经CCE处理72h之后,提取RNA,通过实时荧光定量实验检测CAT、SOD1、SOD2、GPX1等抗氧化基因的表达量.结果表明:CCE抑制HeLa细胞的增殖,且呈剂量依赖效应,较低浓度的CCE(≦0.100mg/mL)对细胞生长无明显抑制作用.0.100mg/mL的CCE处理HeLa细胞72h后能够显著地促进CAT和SOD1等基因的转录,从而降低H_2O_2产生的过量ROS,抑制细胞衰老.     

不同高温对HepA细胞的杀伤作用

目的 :研究不同温度对肿瘤细胞的杀伤作用。方法 :将肝癌腹水型瘤株HepA细胞分为 37℃、4 0℃、4 5℃和 5 0℃ 4个温度组 ,每组又分为 15min、30min、1h和 2h 4个时间亚组。经相应的温度和时间处理后 ,以MTT比色法检测细胞活性。结果 :不同温度对HepA细胞的杀伤作用有所不同。在一定的温度下 ,伴随作用时间的延长 ,细胞死亡率也随之增加。结论 :随着温度的增高和作用时间的延长 ,其对HepA细胞的杀伤作用逐渐增强。4 0℃作用较长时间后 ,细胞的死亡率明显升高     

Synapsin I is a microtubule-bundling protein

Synapsin I, a synaptic vesicle protein, is thought to be involved in the regulation of neurotransmission through its phosphorylation by the cyclic AMP-dependent and Ca2+/calmodulin-dependent protein kinases which become activated upon depolarization of nerve endings. However, despite its recent characterization as a spectrin-binding protein immunologically related to erythrocyte protein 4.1, other interactions of synapsin I with structural proteins remain unknown. We report here that synapsin I can co-cycle with microtubules through three cycles of warm polymerization and cold depolymerization. Synapsin I binds saturably to microtubules stabilized by taxol, with an estimated dissociation constant (Kd) of 4.5 microM and a stoichiometry of 1.2 mol of synapsin binding sites per mol tubulin dimer. Synapsin I also increases the turbidity of tubulin solutions at 37 degrees C, but without causing detectable alterations in the critical concentration required for polymerization. Mixtures of synapsin I and tubulin observed by negative stain electron microscopy contain bundles of microtubules, accounting for the effect of synapsin I on tubulin turbidity. Synapsin I is thus a candidate to mediate or regulate the interaction of synaptic vesicles with microtubules.     

MAP2c confers drug stability to microtubulesin vivo

Microtubules in the axons of nerve cells have unusual stability. To investigate the role of MAP2c in the stabilization of microtubules in neurites, a baculovirus vector has been used to express high levels of MAP2c in insect ovarian Sf9 cells. The cells respond by extending neu-rite-like processes that contain dense bundles of microtubules. The infected cells have been treated with cold, colchicine and nocodazole, respectively. Results showed that all of the polymers were depolymerized within the first 30 min in cold, while no MT depolymerization was detected after 12 h in colchicine or 6 h in nocodazole. The findings strongly suggest that MAP2c is a factor in conferring drug stability to microtubules in neurons, but factors other than MAP2c or in addition to MAP2c are required for cold stability.     

Fibrillarin redistributes to the spindle poles and partially colocalizes with NuMA during mitosis

Fibrillarin, a major protein in the nucleolus, is known to redistribute during mitosis from the nucleolus to the cytosol, and is related to the dynamics of post-mitotic reassembly of the nucleolus. To better understand the dynamic behavior and the relationship with other cytoplasmic structures, we have now expressed fibrillarin-pDsRed1 fusion protein in HeLa cells. The results showed that a part of fibrillarin was associated with mitotic spindle poles in the mitotic cells. Nocodazole-induced microtubule depolymerization resulted in fibrillarin redistribution throughout the cytoplasm, and removal of nocodazole resulted in relocalization of fibrillarin at the polar region during the mitotic spindles reassembly. In a mitotic cell free system, fibrillarin was found in the center of taxol-induced microtubule asters. Moreover, fibrillarin was found to colocalize with the nuclear mitotic apparatus protein (NuMA) at the poles of mitotic cells. Therefore, it is postulated that the polar redistribution of fibrillarin is mediated by microtubules.     

小眼虫(Euglena gracilis)中微管组织中心与微管体系的构建

利用电镜观察小眼虫(Euglena gracilis)微管组织中心和口咽部位的精细结构。发现小眼虫微管体系是以鞭毛根为微管组织中心,从微管组织中心(Microtubule organizing center, MTOC)的外围区域呈排状向上发出,逐步添加微管至40对止,并通过储蓄泡逐步形成环绕沟道(Canal)的微管支撑层。支撑层两根一组的微管单位向外延伸形成细胞表面的沟嵴结构。     

Thermal ablation versus conventional regional hyperthermia has greater anti-tumor activity against melanoma in mice by upregulating CD4~+ cells and enhancing IL-2 secretion

To determine whether conventional hyperthermia (42-45℃) or ablation therapy (＞50℃) achieves better synergistic effects on direct cytotoxicity and anti-tumor immunity,we compared the therapeutic effects of two hyperthermia temperatures,43 and 55℃,in terms of cytotoxicity and upregulation of immune functions in a mouse malignant melanoma model.Melanoma-bearing mice were treated by directly applying regional hyperthermia to the tumor nodule with a heating light at a temperature of 43℃ for 30 min or 55℃ for 10 min.The tumor growth curve and mice survival rate were observed.To investigate the hyperthermia-induced immunological response,peripheral blood CD4~+ and CD8~+ T cells and the serum IL-2 level were determined.Our results indicated that application of regional hyperthermia at the ablation temperature (such as 55℃) achieved better synergistic anti-tumor effects than did conventional hyperthermia (43℃).Significant increases in the number of peripheral blood CD4~+ T cells and the serum IL-2 level likely contributed to the underlying mechanism.     

一株来源于酒曲的纤溶酶产生菌的鉴定及其酶学性质

从酒曲中分离到一株纤溶酶产生菌,经形态及ITS序列分析鉴定为菊芋小孢根霉(Rhizopus microsporus var.tuberosus).酶学性质研究表明,该纤溶酶的最适作用温度为37,℃,最适作用pH为7.0.在37,℃保温4,h酶活力仍保存95%,57,℃下保温4,h后仍有一定酶活.该酶具有广泛的酸碱适应性,在pH<3.4时仍残留部分活性;最稳定的pH范围是6～8.Zn2+、Cu2+对酶活有抑制作用,Na+、Ca2+、Mn2+对酶活具有明显的促进作用.该酶在人工肠液中具有较好的稳定性,37℃保温4 h后残余酶活仍然保持在80%以上,有望制成注射剂应用于临床.