青蒿素衍生物抗癌活性研究

用MTT法检测了新青蒿素衍生物D-21对7种肿瘤细胞株及正常肝上皮细胞的抗增殖效果,并通过观察癌细胞形态、Hoechst 33258染色、Annexin V-FITC and PI染色和线粒体膜电位染色一系列实验,探讨新青蒿素衍生物D-21诱导人急性淋巴细胞白血病细胞凋亡的初步机制。结果表明:新青蒿素衍生物D-21对所选的肿瘤细胞系均有较好抗增殖作用,特别是对白血病细胞株K562,HL-60和CCRF-CEM具有显著细胞活性(IC_(50)分别为2.067±0.494,1.023±0.249,0.602±0.252μmol/L),且对L02的细胞毒性(IC_(50)=5.708±0.713μmol/L)低于阿霉素(IC_(50)=0.900μmol/L);经进一步研究,CCRF-CEM细胞经新青蒿素衍生物D-21处理后,可以通过线粒体膜电位凋亡途径来诱导癌细胞凋亡,并呈浓度和时间依赖性。说明新青蒿素衍生物D-21对癌细胞有极强的杀伤性,且细胞毒性低于现有药物阿霉素,有望成为新型抗癌药物的候选药物。     

雌酚酮-17-杂环取代衍生物的合成及抗肿瘤活性评价

以雌酚酮为原料,合成了7个雌酚酮-17-杂环取代衍生物,经过核磁共振~1H NMR、~(13)C NMR、质谱MS和红外光谱IR确定了目标化合物的化学结构。选用人肝癌细胞(HepG2)、人宫颈癌细胞(Hela)和人肺癌细胞(A549)对化合物进行抗增殖活性评价。结果表明,雌酚酮-17-(5-氯-吲哚)腙(3f)对Hep G2细胞和Hela细胞具有显著抑制活性,其半数抑制浓度(IC_(50))分别为13. 60μmol/L和8. 74μmol/L。     

烯菌酮对小鼠前列腺癌细胞增殖及其脂质过氧化物含量和抗氧化物酶活性的影响

为研究烯菌酮对小鼠前列腺癌(RM-1)细胞增殖及其脂质过氧化物和抗氧化物酶的影响,实验采用了四唑盐法(3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide,MTT)检测了RM-1细胞增殖活力,采用比色法测定了其细胞内抗氧化物酶活性和脂质过氧化物(Maleic Dialdehyde,MDA)含量的改变。结果表明,0.01μmol/L、1μmol/L和100μmol/L三个浓度的烯菌酮作用24和48 h,RM-1细胞增殖活力均明显低于对照组。100μmol/L烯菌酮作用48 h,小鼠前列腺癌细胞中脂质过氧化物含量明显高于对照组及0.01μmol/L和1μmol/L两个浓度组。烯菌酮作用24、48和72 h,RM-1细胞中总超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxidase,GSH-PX)活性随烯菌酮浓度增加而增加,具有浓度依赖性。0.01μmol/L、1μmol/L和100μmol/L烯菌酮作用24 h时,RM-1细胞中过氧化氢酶(Catalase,CAT)活性明显低于对照组,但随着烯菌酮浓度增加,CAT活性明显增加。100μmol/L烯菌酮作用48和72 h时,RM-1细胞中CAT活性明显高于其他三组。这说明,烯菌酮能抑制RM-1细胞增殖活力,促进其细胞内脂质过氧化物的含量和抗氧化物酶的活性。     

南方红豆杉提取物的抗氧化、抗肿瘤活性研究

在超声波辅助和80℃下,以无水乙醇为溶剂对南方红豆杉进行提取,浓缩后得提取物EE,EE通过柱色谱法分离制得紫杉醇,并对EE和紫杉醇的抗氧化、抗肿瘤活性进行研究。结果表明,EE对DPPH·、ABTS~+·、O_2~-·、OH·的清除活性显著优于常用抗氧化剂BHT和紫杉醇,半清除浓度IC_(50)分别为13.19±1.50、2.65±0.35、25.33±1.75和343.00±2.13mg/L,说明EE具有优良的抗氧化活性;紫杉醇对人非小肺癌细胞A549、人乳腺癌细胞MCF-7、人肝癌细胞Bel-7402和子宫颈癌细胞Hela的抑制活性远优于EE,半抑制浓度IC_(50)分别为3.45±1.37、6.20±0.88、1.98±0.49和1.15±0.27mg/L。     

毛柄短肠蕨抗氧化及体外抑制α-葡萄糖苷酶活性研究

用乙醇回流提取法获得毛柄短肠蕨(Allantodia dilatata)的提取物,通过紫外-可见分光光度法对提取物中多酚类化合物含量进行测定,实验结果显示提取物中多酚类化合物含量为16.88%;采用DPPH法和ABTS法对提取物进行抗氧化活性测定,2种方法测得其抗氧化活性的IC_(50)值分别为28.0μg/mL和30.0μg/mL,结果表明提取物具有显著的抗氧化活性;实验测得提取物在体外抑制α-葡萄糖苷酶活性的IC_(50)值为(40.8±5.4)μg/mL,表明毛柄短肠蕨具有良好的降糖活性.     

扁桃斑鸠菊抗氧化活性成分的提取与筛选

目的研究提取扁桃斑鸠菊(Vernonia amygdalina Del)叶中抗氧化活性成分的最佳工艺条件,并筛选活性最强的部位.方法以DPPH自由基清除能力为响应值,利用响应面法优化提取条件;用不同极性有机溶剂对扁桃斑鸠菊乙醇提取物进行萃取分离,以DPPH自由基清除能力和还原能力为指标,筛选抗氧化活性最强部位.结果响应面法优化的最优提取条件为:提取温度58.5℃、乙醇体积分数62%和料液比1∶24,在此条件下,获得的提取物DPPH自由基清除能力最强,理论预测值IC_(50)为70.04μg/m L,实际值IC_(50)为(69.20±0.61)μg/m L,说明建立的模型可较好地描述该实验中因素与指标的关系;各萃取部位的抗氧化能力大小依次为:正丁醇部位氯仿部位石油醚部位水相部位,其中正丁醇部位对DPPH自由基清除能力IC50为18.78μg/m L,与乙醇提取物比较提高了2.68倍.结论扁桃斑鸠菊体积分数为62%乙醇提取物的正丁醇萃取部位具有很强的抗氧化活性,值得进一步研究利用.     

白杨素衍生物通过抑制细胞凋亡保护谷氨酸诱导的神经细胞的损伤

研究白杨素衍生物对谷氨酸诱导的神经细胞损伤的保护作用.以谷氨酸构建体外培养SH-SY5Y神经细胞损伤的模型,选择噻唑蓝(MTT)法测定细胞存活率;使用酶标仪,对细胞培养液中过氧化氢酶的活性和超氧化物歧化酶的活性进行检测,并对丙二醛的含量及总抗氧化能力的高低进行检测;使用Annexin V/PI的方法染色,流式细胞术对细胞凋亡率进行检测.结果:不同浓度药物(50、100、200、400μmol/L)处理可显著提高细胞存活比例,药物浓度为200μmol/L时细胞存活比例最高,过氧化氢酶、超氧化物歧化酶的活性也最高,丙二醛的含量最低,总抗氧化达到最大水平.药物浓度为100、200μmol/L,其凋亡率降低到11.39％、5.02％,较模型组的凋亡率28.06％降低了2-5倍多.白杨素衍生物对谷氨酸诱导的SH-SY5 Y神经细胞拥有效果明显的保护作用,它的作用机制或是通过抑制细胞凋亡进而达到保护作用.     

姜黄素对人膀胱癌细胞系T24体外侵袭的作用

目的探讨姜黄素(curcumin)对人膀胱癌细胞系T24体外侵袭能力及其作用机制.方法以不同浓度的姜黄素作用于膀胱癌T24细胞,MTT法检测细胞增殖抑制率,Transwell法实验观察T24侵袭能力的变化,Western blot法检测MMP-2和VEGF蛋白表达的差异.结果姜黄素能有效抑制T24细胞的增殖,并抑制T24细胞的体外侵袭能力,呈时间-剂量依赖性(P0.05).20μmol/L和50μmol/L姜黄素作用细胞24 h后,MMP-2,VEGF蛋白的表达量下降(P0.05).结论姜黄素对T24细胞的增殖和侵袭能力有抑制作用,其机制可能与下调MMP-2和VEGF的蛋白表达有关.     

2,4-噻唑烷二酮衍生物抑制酪氨酸酶活性研究

以2,4-噻唑烷二酮和取代芳香醛为起始原料,反应得到一系列2,4-噻唑烷二酮衍生物,并对所合成化合物进行了抑制酪氨酸酶活性测试,结果表明化合物均有一定的抑制酪氨酸酶活性,化合物1((E)-5-(3-氯苯亚甲基)噻唑烷-2,4-二酮)和化合物2((E)-5-(2,4-二氯苯亚甲基)噻唑烷-2,4-二酮)活性强于阳性对照曲酸,其中化合物1表现出最好的抑制酪氨酸酶活性,其IC_(50)值为18. 43μmol/L。优选化合物1进行了抑制机理探讨,结果表明其为不可逆抑制剂,同时对化合物1进行了分子对接研究。     

针毛鳞盖蕨不同溶剂萃取物抗氧化及其抑制α-葡萄糖苷酶活性研究

以针毛鳞盖蕨为研究对象,用体积分数95%乙醇提取后,依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇3种有机溶剂萃取得各萃取物,分别测定其多酚含量,通过DPPH·和ABTS~+·清除法及PNPG法评价针毛鳞盖蕨乙醇粗提物及不同溶剂萃取物的体外抗氧化活性及降血糖活性.实验结果表明,在各萃取物中,乙酸乙酯萃取物的多酚含量最高(34.8%);针毛鳞盖蕨乙醇粗提物及各萃取物均具有一定的抗氧化和抑制α-葡萄糖苷酶活性.其中,乙酸乙酯萃取物具有显著的DPPH·清除能力、ABTS~+·清除能力及α-葡萄糖苷酶活性抑制能力,且其α-葡萄糖苷酶抑制活性IC_(50)=(5.3±0.8)μg/mL高于阳性对照阿卡波糖IC_(50)=(103.7±5.1)μg/mL.     

裙带菜多糖的结构及抗氧化、免疫调节活性

采用水提醇沉法制备裙带菜多糖(UPP),提取率为11.00%±0.25%,UPP由葡萄糖、木糖、甘露糖、阿拉伯糖、岩藻糖、半乳糖、鼠李糖组成,分子质量为691.05 ku.体外抗氧化实验测得UPP的氧自由基吸收(ORAC)能力、ABTS自由基清除能力和DPPH自由基清除能力分别为164.54±4.85μmol/g(以Trolox为标准品计)、64.93±4.76和46.80±6.06μmol/g(后两者均以Trolox为阳性对照).选用RAW264.7细胞对UPP的体外免疫调节活性进行研究,发现UPP在50～1 500 mg/L质量浓度范围内对该细胞无明显毒性,且可显著增强该细胞的吞噬能力,当UPP质量浓度为600 mg/L时,相对细胞吞噬能力达113.22%±2.75%.当UPP质量浓度为600 mg/L时,促RAW264.7细胞释放NO量达12.60±1.01μmol/L;UPP在100～800 mg/L的质量浓度范围内可显著上调诱导性一氧化氮合酶(iNOS)的mRNA表达量.以上研究结果表明,裙带菜多糖具有良好的体外抗氧化能力和免疫调节活性,可应用于保健食品的工业生产中.     

脱氢姜酮对人肺癌细胞A549细胞毒活性的研究

对生姜中有效成分脱氢姜酮对人肺癌细胞A549细胞(简称A549细胞)毒活性进行研究,同时考察其氢化产物姜酮的细胞毒活性,研究其构效关系.实验利用MTT法测定脱氢姜酮和姜酮对A549细胞的生长抑制作用,DNA电泳研究脱氢姜酮和姜酮对DNA切割作用,免疫印迹实验检测相关蛋白的表达.实验结果表明:脱氢姜酮对A549细胞增殖具有一定的抑制作用,在40~300μmol/L之间呈剂量依赖性;脱氢姜酮抑制A549细胞增殖的能力和对DNA的切割能力大于姜酮;N-乙酰基-L-半胱氨酸(NAC)明显抑制脱氢姜酮的活性,对姜酮没有影响.免疫印迹结果显示脱氢姜酮可诱导CHOP蛋白的表达,表明脱氢姜酮通过内质网应急途径发挥作用.     

长春碱C-28'位点的结构改造及其抗肿瘤活性研究

探讨长春碱在C-28'位点的结构修饰,并研究衍生物的抗肿瘤活性.在长春碱的C-28'位使用钯催化偶联的方法合成衍生物,所得化合物经~1H NMR和HRMS-ESI进行了结构表征.进一步以长春碱为对照组,并将其用MTT法在MCF7细胞进行抗肿瘤活性的研究.本试验共6个新颖的长春碱类似物,其中化合物10的活性优于对照品长春碱,两者的IC_(50)分别为0.22μmol/L和0.43μmol/L.     

爪哇黄芩二氢黄酮对HepG-2细胞增殖的影响

为研究爪哇黄芩二氢黄酮活性成分的抗肿瘤作用,筛选了爪哇黄芩活性部位和敏感细胞株,并研究了爪哇黄芩活性二氢黄酮对敏感细胞株HepG-2细胞增殖的影响,为开发天然药物奠定了实验基础.选取体外培养的人肝癌细胞HepG-2、胃癌细胞SGC-7901、肺癌细胞A549、乳腺癌细胞MCF-7及神经胶质瘤细胞C6为模型,以半数抑制浓度(IC50)为指标,采用MTT法测定爪哇黄芩石油醚、二氯甲烷、正丁醇提取部位对5种肿瘤细胞的增殖抑制作用,结果表明,爪哇黄芩二氯甲烷部位为其活性部位,人肝癌细胞HepG-2为其敏感细胞株.然后,采用MTT法测定活性部位分离的二氢黄酮单体对HepG-2的抑制作用,进行活性单体的筛选.结果显示,爪哇黄芩5,6,2'-三羟基-7-甲氧基二氢黄酮IC_(50)为110.3μmol/L,爪哇黄芩5-羟基-6,7,2',6'-四甲氧基二氢黄酮IC_(50)为747.21μmol/L.实验数据表明,爪哇黄芩5,6,2'-三羟基-7-甲氧基二氢黄酮为爪哇黄芩活性二氢黄酮单体成分.     

苯胺类毒物在非小细胞肺癌细胞中诱导肺耐药蛋白表达和抗肿瘤药物耐受

苯胺类毒物(aniline poison)是一类常用化工原料和环境污染物,通过食物或饮水污染进入体内后能够干扰人体正常内分泌系统(endocrinium)稳态,影响细胞遗传物质的稳定最终导致细胞DNA突变增加癌变或畸变的风险。最近的研究表明,苯胺类毒物还有可能影响恶性肿瘤的治疗效果。选取代表性的三个苯胺类毒物:对苯二胺(p-phenylene diamine,p-PDA)、间苯二胺(m-phenylene diamine,m-PDA)、邻苯二胺(o-phenylene diamine,o-PDA),考察其在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中诱导肺耐药蛋白(human lung resistance protein,LRP)表达及其可能的分子机制。培养NSCLC细胞系A549,使用系列浓度梯度的对苯二胺(p-phenylene diamine,p-PDA)、间苯二胺(m-phenylene diamine,m-PDA)、邻苯二胺(o-phenylene diamine,o-PDA)处理细胞后,使用实时荧光定量PCR(q PCR)检测LRP的mRNA表达;蛋白印记实验(Western bolt,WB)检测LRP的蛋白表达;进一步使用芳香烃受体(aryl hydrocarbon receptor,AhR)的小干扰RNA(siRNA)抑制A549细胞中AHR的表达,确定对苯二胺、间苯二胺、邻苯二胺对LRP的诱导作用是否依赖于AhR;在此基础上,使用对苯二胺、间苯二胺、邻苯二胺预处理A549细胞后,再分别使用抗肿瘤药物吉非替尼(Gefitinib)、吉西他滨(Gemcitabine)处理A549细胞,利用MTT实验检测上述抗肿瘤药物对A549细胞存活的抑制率(inhibitory rate,IR),并计算药物作用的半数抑制率(IC50值)。q PCR实验与WB实验结果显示,对苯二胺、间苯二胺、邻苯二胺刺激A549细胞能够剂量依赖地诱导LRP的mRNA、蛋白表达水平。干扰AhR表达后,该三种苯胺类毒物不能诱导LRP的mRNA与蛋白表达。MTT实验结果表明,对苯二胺、间苯二胺、邻苯二胺能够下调抗肿瘤药物吉非替尼、吉西他滨对A549细胞的杀伤作用:吉非替尼作用于A549细胞的IC50值从(1.20±0.25)μmol/L上调为(5.67±0.44)μmol/L、(6.07±0.30)μmol/L与(7.51±0.28)μmol/L,其耐药指数(resistance folds)分别为4.73、5.06与6.26;吉西他滨作用于A549细胞的IC_(50)值从(0.44±0.10)μmol/L上调至(1.55±0.25)μmol/L、(1.88±0.19)μmol/L与(2.33±0.40)μmol/L,其耐药指数分别为3.52、4.27与5.30。3种代表性苯胺类毒物能够在肺癌细胞中通过AhR诱导LRP表达,并且能够引起A549对抗肿瘤药物耐受。     

7-二氟甲氧基-5,4′-二甲氧基金雀异黄素对卵巢上皮性癌细胞增值与迁移侵袭作用机制

目的:探讨7-二氟甲氧基-5,4′-二甲氧基金雀异黄素(7-difluoromethoxy-5,4′-dimethoxygenistein, DFMG)对卵巢上皮性癌细胞(skov3)增值、迁移和侵袭能力的影响,并初步探讨其机制.方法:采用CCK-8法检测不同浓度DFMG对skov3增殖的影响和计算半数药物抑制浓度(IC_(50)),并以IC_(50)结果将不同药物浓度处理分为空白组、溶剂组、DFMG组;应用划痕实验检测各组细胞迁移能力,统计各组的迁移面积,比较迁移率;采用Transwell侵袭实验分析各组细胞侵袭能力,记录、比较各组侵袭入小室的细胞数,应用蛋白免疫印迹(Western blot)、细胞免疫荧光和实时荧光定量PCR技术分别检测各组细胞的钙粘附蛋白E(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)的蛋白和mRNA表达变化.结果:浓度为40μmol/L的DFMG开始显著抑制skov3的增殖能力,IC_(50)为(113.1±12.1)μmol/L;DFMG能降低细胞迁移及侵袭能力,减少vimentin蛋白及mRNA的表达,增加E-cadherin蛋白及mRNA的表达.结论:DFMG可明显抑制skov3的体外增殖、迁移和侵袭能力,可能与其抑制细胞上皮间质转化有关.     

靶向于胶原蛋白的血栓抑制剂LERNSTY开发

通过荷电氨基酸残基替换LWWNSYY中的疏水性氨基酸残基W以优化其组成,设计获得血栓抑制剂LERNSTY.研究发现,LERNSTY溶解度好,能够有效结合胶原蛋白,K_d为(1.647±0.303)μmol/L,有效半抑制浓度(IC_(50))为(2.73±0.48)μg/m L,优于LWWNSYY.因此,通过荷电氨基酸的引入优化获得有效的血栓抑制剂LERNSTY,将促进疗效显著而副作用小的抗血栓药物开发.     

铁或铜胁迫下小麦幼苗根抗氧化体系的响应

为揭示小麦幼苗在Fe或Cu胁迫下的抗氧化反应机制,以宁春4号小麦为材料,比较了不同浓度(0,100,300,500μmol/L)Fe Cl3或Cu Cl2处理下幼苗根羟自由基(·OH)含量、抗氧化酶活性和多胺降解酶活性的变化.结果显示:Fe或Cu处理诱导小麦根·OH含量升高,且高浓度Cu处理下样品·OH含量高于相同浓度Fe处理的样品的.Fe或Cu处理对各种抗氧化酶活性有不同的影响:Fe诱导超氧化物歧化酶活性升高,而Cu抑制该酶活性;Fe处理不影响过氧化物酶活性,而Cu诱导该酶活性升高;过氧化氢酶活性在Fe或Cu处理下均受到明显的抑制;Fe或Cu处理抑制谷胱甘肽还原酶活性;300,500μmol/L的Fe和100,300μmol/L的Cu诱导抗坏血酸过氧化物酶活性的升高.此外,不同浓度的Fe或Cu对多胺氧化酶(PAO)、二胺氧化酶(DAO)和细胞壁过氧化物酶(cw-POD)活性均有明显的抑制作用.结果表明:Fe或Cu胁迫诱导对小麦根不同抗氧化酶产生不同的影响,最终导致小麦根·OH积累;PAO,DAO和cw-POD可能不参与Fe或Cu胁迫诱导的ROS积累.     

5,6-二取代苯并氧化呋咱类似物的合成与体外抗肿瘤活性研究

2,4-二氯硝基苯经硝化、胺基取代、叠氮取代和环合四步反应,合成了15个5,6-二取代苯并氧化呋咱类似物,结构均经~1H NMR和HRMS确证.采用SRB法评价了目标物对人非小细胞肺癌细胞NCI H460、结肠癌细胞HCT-116和乳腺癌细胞MCF-7的抑制作用.结果表明,多数目标物(浓度5μmol/L)具有一定的体外抗肿瘤活性,4k、4l和4o对HCT-116的细胞抑制率大于60%,4a、4d、4k、4l和4o对MCF-7细胞的抑制率大于85%.4 o对MCF-7具有显著的抑制活性,IC_(50)为1.6μmol/L.     

小花忍冬叶提取物的抗氧化活性

通过T-AOC法、DPPH法、Fenton法体外抗氧化试验,对小花忍冬叶乙醇提取物的各个萃取部位进行抗氧化活性研究.结果表明,小花忍冬叶5种提取物均具有不同程度的抗氧化活性,乙酸乙酯部分羟自由基清除活性最强,IC_(50)值为67.0μg/mL;清除DPPH·自由基IC_(50)为7.2μg/mL,均高于对照Vc.研究结果提示小花忍冬叶乙醇提取物乙酸乙酯萃取部分具有很强的抗氧化活性,可作为一种新型的天然抗氧化剂和自由基清除剂,具有良好的开发前景.