拟南芥蛋白质激酶CARK7与ABA受体RCAR12相互作用的研究

脱落酸(ABA)受体RCARs在ABA信号传导过程中起关键作用,研究ABA受体的相互作用蛋白质对进一步了解植物抗逆的分子机制有重要的意义.本研究通过酵母双杂交发现CARK7与ABA受体RCAR12共转化酵母能在营养缺陷型平板SD/-Trp-Leu-Ade上生长.将CARK7与RCAR12分别克隆到原核表达载体pET-28a(+)和pGEX-6p-1中,构建融合蛋白表达载体,并进行原核表达和亲和纯化.纯化所得蛋白进行GST-pull down实验,结果表明RCAR12能够把CARK7蛋白拉下来.上述结果说明CARK7与RCAR12在体外存在相互作用.进一步通过双分子荧光互补实验发现CARK7与RCAR12在烟草叶片表皮细胞中能产生荧光信号,说明两者在体内同样具有明显的相互作用.     

人CtBP2与CCNH相互作用的初步研究

CtBP2(E1AC-terminal binding protein 2)作为辅阻遏物与多种转录因子联系而参与到很多生物过程中,如细胞分化、凋亡、发育和肿瘤发生等,然而其中许多作用机制尚不明了.为了对CtBP2进行深入研究,利用高通量酵母双杂交技术,以人CtBP2为诱饵,与含有1000个人肝基因克隆的酵母双杂交文库进行接合筛选获得了一个与它相互作用的猎物蛋白CCNH(Cyclin H).通过GST-pull down、免疫共沉淀和亚细胞共定位等实验进一步证明了这两个蛋白在体外和体内的相互作用.     

拟南芥CARK3与RCAR12相互作用的研究

植物激素ABA是植物应对非生物胁迫的响应因子,广泛参与了植物生长发育的调控.ABA结合其受体后抑制PP2Cs的磷酸酶活性,释放SnRK2s,从而启动ABA信号转导途径.本文采用酵母双杂交系统,GST-pull down技术研究蛋白质激酶CARK3与ABA受体RCAR12在体外的相互作用,结果显示CARK3和RCAR12共转入酵母后,在三缺平板上能够正常生长;经His-Tag抗体检测,CARK3与RCAR12出现明显且单一的条带.同时,采用双分子荧光互补实验研究CARK3与RCAR12在体内的相互作用,结果显示CARK3与RCAR12共转化烟草后能观察到较强的荧光.体内外实验表明,CARK3与RCAR12存在明显的相互作用,CARK3可能通过直接磷酸化ABA受体RCAR12来调控ABA信号途径的生理应答.     

汉滩病毒受体与细胞因子TNFRⅠ真核表达载体的构建及稳定转染细胞系的建立

摘要 目的：构建带有荧光标签的汉滩病毒受体整合素β3与细胞因子TNFRⅠ的稳定转染细胞系。方法：构建目的基因的真核表达载体pIRES2-EGFP-β3和pIRES2-DsRed-TNFRⅠ(EC),并转染CHO细胞,直接荧光观察报告基因和荧光定量RT-PCR检测目的基因mRNA表达。结果：转染重组质粒pIRES2-EGFP-β3的细胞可检测到荧光报告基因和目的基因β3 mRNA的表达,转染pIRES2-DsRed-TNFRⅠ(EC)的细胞可检测到荧光报告基因和目的基因TNFRⅠmRNA的表达。结论：成功构建真核表达整合素β3与TNFRⅠ的稳定细胞系。     

一种检测蛋白质相互作用的双荧光共定位系统

自发荧光蛋白以快捷灵敏、即时检测和无需破坏活细胞的特点在蛋白质相互作用的研究中得到广泛应用.从发光水母Aquoria victoria中分离的绿色荧光蛋白(GFP)和从珊瑚Discosoma sp.中分离的DsRed红色荧光蛋白是自发荧光蛋白的典型代表.本研究开发一种基于GFP和红色荧光蛋白(RFP),并可通过待检测蛋白在细胞内表达的空间位移变化产生共定位的双荧光共定位检测系统.该系统为克服两种荧光蛋白光谱渗漏带来的非特异性结果的干扰,将核仁定位信号(NoLS)和出核信号(ABL)分别连接到RFP和GFP.具有定位信号的GFP和RFP的待检测蛋白对可分别在细胞核内和(或)细胞核外表达,伴随它们的相互作用,荧光共定位的现象会产生在细胞内特定的区域.利用抗凋亡蛋白Bc1-2和Bak-BH3短肽作为蛋白对测试该系统,荧光共定位现象明显,系统灵敏可靠.     

拟南芥AtDWD与ABI2相互作用的初步研究

本文以RCAR1为诱饵蛋白通过酵母双杂交（Y2H）技术筛选出了DWD基因编码的蛋白,同时在用ABI2参与筛选的过程中,同样得到了DWD这个基因. 进行了pull down 实验验证它们之间的相互作用,实验结果显示：在体外,RCAR1、RCAR3与DWD之间确实存在相互作用,同时ABI2与DWD也存在相互作用. 其后对DWD结构的进行分析和实验,发现ABI2和DWD的相互作用区域集中在AtDWDC端,大概是145~350位氨基酸之间的WD40结构域里.     

拟南芥E3泛素连接酶AtARRE与ABI5相互作用分析

为了阐述AtARRE与ABA信号通路关键转录因子ABI5的作用,本研究采用原生质体瞬间表达系统探究了AtARRE蛋白的亚细胞定位,证明AtARRE蛋白定位于细胞核.随后,采用酵母双杂交和GST-Pull down技术分析了AtARRE与ABI5在体外的相互作用,证明AtARRE与ABI5在体外存在相互作用.最后,本研究采用双分子荧光互补实验进一步分析AtARRE与ABI5在体内的相互作用,结果表明共表达AtARRE与ABI5在植物体内存在相互作用.这些结果共同表明AtARRE可能参与了ABI5介导的植物对逆境的响应.     

ZP2蛋白在小鼠卵巢颗粒细胞中的表达

目的:在蛋白质水平确定小鼠卵巢的颗粒细胞内是否表达透明带蛋白.方法:制作小鼠卵巢组织的冰冻切片,免疫荧光实验用抗ZP2抗体检测小鼠卵巢颗粒细胞中是否存在ZP2蛋白,荧光显微镜下对卵巢切片的荧光信号拍照,通过灰度分析评估小鼠卵巢的颗粒细胞中的荧光信号,检测小鼠卵巢颗粒细胞内的ZP2蛋白.结果:实验组卵巢切片颗粒细胞区抗透明带ZP2抗体标记的荧光信号灰度值(1. 88±0. 57)明显比对照组(1. 20±0. 11)强.结论:小鼠卵巢颗粒细胞也表达透明带ZP2蛋白.     

GFP报告因子结合流式细胞术的蛋白-蛋白相互作用单细菌水平分析

在基于腺苷酸环化酶功能重构的细菌双杂交(BACTH)系统中引入lac启动子控制的gfp基因作为蛋白质相互作用的报告基因,采用实验室自行研制的超高灵敏流式检测装置(HSFCM)建立了一种单细菌水平的、简单、快速、高通量的蛋白-蛋白相互作用分析方法.将分别携带有相互作用蛋白对编码基因和gfp报告基因的质粒共转化至报告菌株,利用HSFCM对单个细菌的散射光和荧光同时进行检测.结果表明蛋白-蛋白相互作用激活了gfp报告基因的表达,并存在双稳态现象:即一部分细菌的gfp报告基因被激活,细菌荧光信号强度明显高于阴性对照组,而另一部分细菌的gfp报告基因未被激活,细菌荧光信号分布与阴性对照组重叠.利用HSFCM在单细菌水平对荧光信号强度和表达GFP报告因子的细菌比例进行分析,能有效地区分表达GFP报告因子的阳性菌和报告基因未被激活表达的阴性菌,揭示了细菌个体蛋白的异质性表达.这将为相互作用蛋白对的检测及筛选提供一种快速的分析方法.     

水稻脱落酸受体PYL2与mNeonGreen融合蛋白的原核表达及纯化

目的:为建立脱落酸的荧光检测方法.方法:通过重叠PCR技术,在水稻脱落酸受体PYL2蛋白的C-端融合一种新型黄绿色荧光蛋白mNeonGreen,并对融合蛋白进行原核表达和纯化.结果:获得了高纯度的融合蛋白PYL2-mNeonGreen,加入脱落酸后,该融合蛋白黄绿色荧光强度逐步降低,表明融合蛋白PYL2-mNeonGreen能特异性识别脱落酸.结论:该研究为后续脱落酸的原位检测奠定了基础.     

教学评估与图书馆文献资源建设及利用的探索与实践

分析了当前高校图书馆文献资源建设普遍存在的问题,提出了文献资源建设的发展策略,阐述了教学评估为图书馆文献资源建设及利用带来的发展契机和促进作用。     

试析人的年龄与企业业绩之间的关系及规律

人的年龄是一个公开显示的客观数据。在企业人事管理中,不仅要注意体力劳动、脑力劳动与年龄的关系,还要考虑年龄对创造性的影响。分析其中的关系,找出其中的规律,能有效地提高企业的业绩。     

存在与人性--《裸者与死者》的主题阐释

从《裸者与死者》中几个主要人物来分析，小说具有双重主题：其一是存在主义主题，小说具体表现了在诸多异己力量危及之下人的挣扎与无奈，并着重描述了权力的毁灭性作用；其二是人性主题，小说深刻地揭示出兽性与人性在人类心灵中的搏斗。     

主辅分离与辅业改制的实践与思考

通过主辅分离、辅业改制的实践，阐明了主辅分离、辅业改制是做强做大国有企业的必由之路，而因企制宜与稳步推进是做好国有企业主辅分离、辅业改制的重要手段，霍州煤电集团实现了改制企业的完全自主经营与较好的社会与经济效益。     

浅谈教师的情感与体育教学的关系

体育教师是学校体育工作的组织实施者,如何提高体育教学质量,体育教师起着主导作用本文从心理学角度简述了体育教师的情感因素与体育教学的内在关系．     

试论科学技术在当代世界资本主义经济形成和发展过程中的地位和作用

通过对当今世界几个主要发达资本主义国家经济的形成和发展过程的探索，特别对第二次世界大战以来这些国家经济发展的轨迹进行研究，论述了科学技术在其发展过程中的巨大作用，从而对我国今后的发展提供了一个有益的启示。     

切值与奇点的拓扑结构及系统的有界性

利用广义Poincar啨指标定理和三角剖分方法 ,结合两个例子 ,证实了切值对奇点拓扑结构产生了约束作用以及在一定条件下 ,奇点的分布及切值将导致系统无界     

浅谈思想政治教育者的主体性与教育的有效性

在新的历史条件下，思想政治教育内容发生了很大的变化，而如何提高思想政治教育的有效性，现己成为思想政治教育工作者探讨的热点话题。目前，从受教育者的主体性角度探讨这一问题的较多，而从教育者的主体性角度涉猎的则较少。故此，本人尝试从后者探讨之。     

圆环和轮缘的变形及内力计算

本文运用材料力学假设求出小曲率圆环挠曲线微分方程的通解，并以实例说明如何利用此通解计算圆环的位移及内力。最后将飞轮轮缘作为一个特殊圆环，建立轮缘位移及内力的计算公式。     

历史真实的建构与图解--《竹林中》与《青黄》比较研究

芥川龙之介是日本大正时代新技巧派重要作家,他的《竹林中》由七人讲述案件来串联故事;格非是中国20世纪末新思潮派代表作家,他的《青黄》讲述“我”收集“青黄”一词意义的经过。两篇文章均不约而同地亲临历史真实,但前者在人物自足的讲述中注重建构一个真实世界,后者由于主体的质疑倾向图解历史真实。两部作品分别呈现出20世纪初、末小说写作的不同价值取向。