等电沉淀分离酪蛋白方法的探讨--兼对黄石市场鲜牛奶质量分析

牛奶中酪蛋白含量是衡量牛奶质量的一个重要指标，采用蛋白质等电沉淀法可测定其含量。本探讨了等电沉淀法分离酪蛋白的最适pH值、温度以及牛奶中酪蛋白理论含量等问题，报道了对黄石市场鲜牛奶酪蛋白含量的测定结果，并对此法在海关、质检部门的应用进行了讨论。     

液相色谱-高分辨串联质谱法检测牛奶中A1和A2 β-酪蛋白

建立一种基于液相色谱\|高分辨串联质谱（LC-HRMS/MS）方法检测牛奶中A1和A2 β-酪蛋白. 采用等电点沉淀法从牛奶中提取酪蛋白, 经胰蛋白酶酶解后, 将酶解产物进行LC-HRMS/MS分析, 选择含有差异氨基酸残基（第67位）的肽段作为特征肽段对A1和A2 β-酪蛋白进行区分. 采用Tris-HCl缓冲溶液充分溶解酪蛋白, 在酶解反应体系中添加乙腈以提高酶解效率. 采用高分辨质谱和串联质谱技术, 进一步排除杂质产生的干扰信号. 采用该方法对市售4种普通牛奶和2种A2牛奶进行检测, 结果表明， 普通牛奶中A1 β-酪蛋白的含量约为A2 β-酪蛋白含量的2~4倍, 个别A2牛奶样品含微量A1 β-酪蛋白. 该方法可检测牛奶中的A1和A2 β-酪蛋白, 具有高可靠性、 高灵敏度等优点, 为A2奶源筛选和质量控制提供支持.     

酪蛋白的提取及检测

在基础生物化学酶学部分的实验中，多以酪蛋白作为酶的反应底物。本实验应用等电沉淀法从牛奶中分离酪蛋白，并对其与标准酪蛋白试剂进行水分、酸度、脂肪、灰分的测定比较，希望用其代替标准酪蛋白试剂，降低实验费用。     

牛奶子叶黄酮类化合物含量的地域性和季节性变化分析

牛奶子(Elaeagnus umbellata Thunb)由于其果实可食性强,并具有水土保持功能和药用特性而受到重视.本研究采用超声波震荡提取方法,对牛奶子叶片黄酮类化合物提取进行了单因素实验,结果表明:影响牛奶子叶总黄酮提取的四个因素的顺序,从大到小依次为料液比、乙醇浓度、提取温度和提取时间.在此基础上,设计了4因素3水平的正交试验,最终确定了牛奶子叶提取总黄酮的优化方案.最佳提取方案为:60℃条件下,1∶20的料液比,60%浓度的乙醇,提取60 min.采用该最佳方案测定牛奶子叶黄酮类化合物不同地区在不同时间的含量,结果表明:不同地点的类黄酮含量在同一时期含量没有显著性差别,而在不同时间的叶黄酮类化合物中含量有显著差别(P0.01),其中9月1日的含量显著高于10月1日,说明在8月~9月积累多,后期明显减少.该结果可为进一步开发利用牛奶子提供参考价值.     

牛奶中过敏原组分的分离纯化及主要过敏原的鉴定

目的:分离纯化并鉴定牛奶中引起过敏反应的主要致敏原组分,并分析其与组胺释放的关系.方法:等电点沉淀、Sephadex G-50凝胶层析和DEAE-Sepharose离子交换层析等技术分离纯化牛奶过敏原组分.脱脂乳浸液免疫C57/BL6小鼠制备抗血清.Western-Blotting分析脱脂乳致敏原组分.间接ELISA检测抗血清中slgE和sIgG;同时荧光法检测各致敏组分体外诱发免疫小鼠腹腔肥大细胞组胺释放率.结果:分离纯化出酪蛋白、β-乳球蛋白、α-乳白蛋白等致敏组分(纯度>90%).免疫印迹表明酪蛋白是主要致敏原组分.抗血清sIgG水平差异显著,sIgE水平没有大的变化;组胺释放率与sIgG水平是一致的,而与sIgE水平没有明显相关性.酪蛋白抗血清sIgG效价最高为1:25 600,组胺释放率高达(73.28±9.31)%.结论:牛奶中主要过敏原组分鉴定为酪蛋白,对牛奶过敏症的体外诊断治疗以及低/无过敏原配方奶的研制有一定的意义.     

酸/碱溶解-等电点沉淀法回收罗非鱼蛋白的工艺优化及蛋白组成分析

以罗非鱼(Oreochromis niloticus)肉为原料,采用酸/碱溶解-等电点沉淀法回收罗非鱼肌肉蛋白,主要探讨溶解p H值、料液比和溶解时间对可溶性蛋白得率以及沉淀p H值对可溶性蛋白沉淀得率及蛋白亚基组成的影响.结果表明,酸/碱溶解回收罗非鱼肉可溶性蛋白的最佳p H值为p H2.0、3.0、11.0和12.0,料液比1∶9(ω/v),溶解时间10 min,可溶性蛋白种类齐全,包含了典型的鱼蛋白电泳条带;酸/碱可溶性蛋白的最佳沉淀条件为p H 5.5,在此条件下,溶解-沉淀过程的蛋白得率分别为61.59%-64.95%.与鱼肉蛋白相比,四种分离蛋白中盐溶性蛋白的比例均升高,水溶性蛋白的比例均降低(p0.05).比较而言,碱溶-等电点沉淀过程中鱼蛋白的变性程度较小,其水溶性组分和盐溶性组分所占的比例均较高,组成相对比较齐全,而酸提蛋白中肌球蛋白重链部分降解,少量肌浆蛋白损失.因此,碱溶-等电点沉淀法更有利于回收鱼肉分离蛋白.     

木棉花超氧化物歧化酶分离工艺的研究

探究优化木棉花超氧化物歧化酶(SOD)的提取条件,建立木棉花SOD生产工艺.以木棉花花瓣为原料,采用正交实验优化超声波提取的技术参数,结合丙酮等电点沉淀和葡聚糖凝胶层析提取纯化SOD,经真空冷冻干燥获得SOD成品.超声波提取的最佳工艺为料液比1∶30,功率180 w,超声波处理总时间9 min,浸提时间8 h.沉淀杂蛋白条件为2 mol/L的HCl将粗提液调节至pH为5.0,提纯SOD条件为pH 4.0丙酮等电点沉淀法,纯化倍数达到5.59,经Sephadex G-75纯化,获得SOD成品,纯化倍数达到18.46.为木棉花SOD的规模化生产提供理论依据.     

柚子皮中果胶的提取研究

用单因素和正交实验探讨乙醇沉淀法对提取柚皮中果胶的工艺条件。考察了酸度、温度、时间及料液比对果胶提取率的影响。实验结果表明:PH为2.0,温度为85℃,液料比为1:20,时间为80min的条件下提取效果最佳。果胶提取率可达到15.9%。     

碱溶法提取葡萄籽中蛋白质的工艺

采用碱溶酸沉法对从葡萄籽中提取蛋白质的工艺进行了试验研究,分别进行了碱液浓度、碱液温度、浸提时间和料液比对蛋白质萃取量的单因素试验,在此基础上进行了L9(45)正交试验。结果表明:浸提的最佳工艺条件为:NaOH溶液浓度1×10-5mol/L,温度40℃,浸提时间40min,料液比1∶15,葡萄籽蛋白质得率为6.2g/L,提取率为60.78%。并测定了葡萄籽蛋白质的等电点(PI)为3.8。     

龙葵多糖提取分离工艺研究

采用水浴法设计三因素三水平正交试验,对龙葵多糖提取工艺进行研究;采用乙醇沉淀法设计三因素三水平正交试验对其分离工艺进行探索.正交试验结果表明:水浴法提取中三因素对龙葵多糖提取的影响顺序为:提取温度>料液比>提取时间,最佳提取工艺为:料液比1∶10,提取时间30 m in,提取温度80℃;乙醇沉淀法分离龙葵多糖中三因素的影响顺序为:乙醇浓度>沉淀时间>乙醇加入量,最佳分离工艺为:乙醇浓度90%,沉淀时间8 h,乙醇加入量3倍体积,这些条件的确定为龙葵的大规模开发和应用奠定了基础.     

正交设计太白贝母粗多糖的不同提取工艺

对太白贝母粗多糖提取工艺进行了研究。采用水浴、超声波和煎煮提取,经蒽酮比色法进行含量的确定,通过正交实验确定最佳提取条件。水浴法:提取温度70℃,时间1 h,料液比1∶15,采用其最佳提取工艺条件提取贝母多糖提取含量为0.65 mg/g;超声波法:提取温度80℃,时间15 min,料液比1∶15,采用其最佳提取工艺条件提取贝母多糖提取含量为0.99 mg/g;煎煮法:提取温度90℃,时间3 h,料液比1∶20,采用其最佳提取工艺条件提取贝母多糖含量为0.38mg/g。     

Study on extraction of polysaccharose in basil and deterination of its content

实验采用传统的碱提取多糖方法,并设计了4因素3水平正交试验对罗勒中多糖的得率进行了对比研究。考察了不同提取温度、料液比、提取时间等对多糖含量的影响,得到最佳的提取工艺是碱浓度1．0mol·L^-1,温度70℃,提取时间60min以及料液比1：60,在此条件下测得罗勒中多糖含量为26．87％。     

酶水解法调整牛乳中清蛋白与酪蛋白的比例提高乳粉营养价值的研究

本研究采用固定化胰酶水解法，将牛乳中部分酪蛋白水解成小分子肽和氨基酸，降低酪蛋白的含量，调整清蛋白与酪蛋白的比例，再用此牛奶制成配方乳粉。通过６０例婴幼儿３个月的喂养试验结果表明，用改性后牛乳制成的乳粉营养价值明显高于普通乳粉，身高、胸围、腹壁皮脂厚度、血红蛋白、血清总蛋白、发锌和发铁的增长都显著大于普通对照乳粉喂养组。     

2种棉花叶片总蛋白质纯化方法比较研究

以三氯乙酸—丙酮沉淀法粗提的棉花总蛋白为材料,比较了丙酮沉淀法、醋酸铵沉淀法纯化棉花总蛋白的效果.结果显示:与三氯乙酸—丙酮沉淀法提取的棉花总蛋白干粉加入裂解液后直接电泳相比较,经丙酮沉淀法和醋酸铵沉淀法处理后的总蛋白杂质干扰少、电泳结果蛋白条带清晰,蛋白含量较高,相比醋酸铵沉淀法丙酮沉淀法效果较好,适合于棉花蛋白质组学研究中纯化总蛋白质.     

罗勒多糖的提取及含量测定

实验采用传统的碱提取多糖方法,并设计了4因素3水平正交试验对罗勒中多糖的得率进行了对比研究。考察了不同提取温度、料液比、提取时间等对多糖含量的影响,得到最佳的提取工艺是碱浓度1.0 mol.L-1,温度70℃,提取时间60 min以及料液比160,在此条件下测得罗勒中多糖含量为26.87%。     

麻黄草中黄酮的超声波提取工艺研究

采用了超声波法从青海产麻黄草中提取黄酮,并从料液比,乙醇浓度,提取时间三个方面进行了对麻黄草提取效率进行了研究,通过紫外分光光度法测定了黄酮的含量.分析结果表明,最佳的提取工艺为乙醇浓度90%,料液比为1∶9,提取时间为90min.     

酚硫酸法测定灵芝多糖的研究

目的：从灵芝中提取多糖，并测定其含量．方法：灵芝多糖的提取一般方法为醇析沉淀法，本实验为找出该方法的最佳工艺条件，结果表明：灵芝多糖提取的最佳工艺条件为：乙醇浓度85％，乙醇：料液为2：1，pH为6．5．结果：用酚-硫酸比色法测定多糖的含量，测得灵芝多糖含量6．55％，平均回收率99．05％，RSD=1．02％（n=3）．结论：该法操作简便，重现性好，实验结果令人满意．     

姜汁凝乳的研究进展

姜汁凝乳作为传统甜品得到众多消费者的青睐,但其凝乳机理仍存在争议。对此,在剖析生姜组分及姜醇、姜酚、姜烯等主要活性成分的基础上,结合姜汁凝乳的制备工艺,综述分析姜汁添加量、温度等关键影响因素:姜汁添加量会影响牛奶中κ-酪蛋白的分解程度,温度会影响分子运动,进而影响牛奶凝乳状况;并最终总结得到生姜的主要凝乳成分是生姜蛋白酶,生姜是通过水解作为牛奶中酪蛋白胶束外壳的κ-酪蛋白使其失去稳定性形成凝胶的凝乳机理。     

超声波法提取金针菇多糖工艺参数的优化及其保健酸奶的研制

本文研究用超声波技术提取金针菇多糖,以单因素试验和正交试验设计优化提取工艺条件,以金针菇多糖和牛奶为主要原料,对凝固型金针菇多糖保健酸奶的制作进行研究。以酸奶感官评分为指标,通过单因素试验和正交试验确定最佳稳定剂并对酸奶的制作工艺参数进行优化。结果表明:影响金针菇多糖提取率因素的主次关系是超声功率>料液比>超声时间。最佳工艺条件为:超声功率100w,料液比1:40,超声时间50min,在此工艺条件下,金针菇多糖的提取率为2.70%。保健酸奶的最佳工艺参数为:金针菇多糖与牛奶的比例为0.5:100,蔗糖含量为6%,复合稳定剂为0.01%黄原胶+0.01%明胶+0.01%羧甲基纤维素钠,接种量为5%,发酵温度为42℃,即制得营养丰富,具有抗肿瘤、抗癌等功效的凝固型金针菇多糖保健酸奶。     

正交试验法优选铃兰总黄酮的提取工艺

采用正交试验法研究铃兰中总黄酮的提取工艺,考察了乙醇含量、提取时间、提取次数、以及料液比等5个因素对铃兰总黄酮含量的影响.确立了铃兰总黄酮最佳提取条件为:70%的乙醇,提取时间为0.5h,提取次数为3次,料液比为1∶15.