蛹虫草菌株选育及产业化生产技术:蛹虫草生产的新途径

省微生物所研发的蛹虫草菌株选育及产业化生产技术应用研究项目属于农业技术领域的研究范畴。项目广泛收集蛹虫草出发菌株,进行遗传差异分析和优质高产、抗逆及耐高温型菌株选育;筛选富硒培养基及富硒蛹虫草栽培技术研     

硒对蛹虫草生长发育的影响

以蛹虫草作为富集硒的载体，用不同浓度的含硒培养基分别对蛹虫草的子实体进行培养，以研究蛹虫草的耐硒能力．结果表明：采用固体培养基培养蛹虫草子实体，在含硒0．5—20mg／kg的固体培养基上，菌丝均能生长；在含硒0．5—5．0mg／kg范围内，子实体生长速度较其他浓度明显提高；在含硒10．0—20．0mg／kg范围内，子实体生长受到抑制；在含硒30mg／kg以上的培养基上，菌丝不能生长。     

不同添加剂对蛹虫草子实体生长情况及虫草素的影响

为了提高人工栽培过程中蛹虫草的子实体产量以及主要活性成分虫草素的含量,本实验通过分别添加不同剂量的2,4-D、亚硒酸钠、柠檬酸三铵、以及不同的维生素(VB1、VB3、VB6和叶酸),分析其对蛹虫草生长分化及虫草素合成的影响.结果表明:能增加蛹虫草子实体发育和产量的添加剂质量体积比为:2,4-D 0.1 g/L、亚硒酸钠25 mg/L、柠檬酸三铵1.6 g/L,而维生素的影响不大;亚硒酸钠、柠檬酸三铵对虫草素含量影响不明显,但2,4-D 0.4 g/L和VB3 1.0 g/L最能促进虫草素的形成.     

野生蛹虫草与组培蛹虫草子实体的成分测定与分析

本文利用多种现代分析手段,对抚顺地区野生蛹虫草与组培蛹虫草子实体的主要成分进行了测定与分析,结果表明可以利用组培蛹虫草代替野生蛹虫草,即降低了成本,又能大规模生产,为抚顺地区蛹虫草的开发利用提供了诱人的前景。     

富硒虫草菌丝体的发酵培养及其生物学功能研究

采用菌种Cordyceps Sinensis进行液体发酵,在发酵培养基中添加微量Na2SeO3,虫草菌丝体收得率达2.52%,其中硒含量达7.90 mg/kg;经动物试验结果证明发酵法生产的富硒虫草菌丝体安全无毒,并具有延缓衰老之功能;其他生物功能比较研究结果表明,发酵生产的富硒虫草菌丝体在耐缺氧、抗疲劳等功能方面均优于天然虫草,因此完全可以替代天然野生虫草应用.     

蛹虫草的研究Ⅳ．蛹虫草与冬虫夏草化学成分比较

人工蛹虫草与野生冬虫夏草的子实体经测定分析，二者都含有蛋白质、糖、脂肪、多种无机元素和维生素、１８种氨基酸、虫草菌素、虫草酸、虫草多糖和ＳＯＤ等化学成分，在含量上基本相似，有些成分含量高于冬虫夏草．蛹虫草可以替代冬虫夏草食用或药用     

蛹虫草的研究：IV.蛹虫草与冬虫夏草化学成分比较

人工蛹虫草与野生冬虫夏草的子实体经测定分析，二者都含有蛋白质、糖、脂肪、多种无机元素和维生素、１８种氨基酸、虫草菌素、虫草酸、虫草多糖和ＳＯＤ等化学成分，在含量上基本相似，有些成分含量高于冬虫夏草。蛹虫草可以替代冬虫夏草食用或药用。     

蛹虫草SOD酶活力的测定与分析

文章采用改良的邻苯三酚自氧化法，比较了不同种类的蛹虫草样品及相同种类的蛹虫草不同部位之间的SOD酶活力，结果表明不同种类的蛹虫草发酵菌丝体和发酵液之间的SOD酶活力有较大的不同，蛹虫。草发酵液具有良好的发展前景，为蛹虫草SOD的开发和利用提供了科学依据。     

攀枝花芒果中微量硒的测定

利用AFS-203E原子荧光分光光度计，找出测定硒的最佳消解条件，并测定了攀枝花市盐边县吉禄、瓦橙、金白花、凯特4种芒果中硒的含量．得出了攀枝花市盐边县的4种芒果是天然的富硒水果的结论．为人们科学补硒提供了依据．     

HPLC法测定人工蛹虫草子实体中虫草素

为测定人工蛹虫草子实体及培养基中的虫草素，采用高效液相色谱法(HPLC)，以十八烷基硅烷键合相硅胶为固定相；磷酸盐缓冲溶液(pH6．5)-甲醇(85：15)为流动相；检测波长260nm；其流速为lmL／min。结果是人工蛹虫草子实体中虫革素含量在1．1l％～1．44％之间，平均值为1．29％，RSD为9．6％。天然冬虫夏草中仅测得痕量虫草素。结果表明：不同的人工蛹虫草样品中虫草素含量有一定差异，且高于天然冬虫夏草。     

冬虫夏草人工培育初探

通过采用周期性变压固态发酵技术来探讨其在人工培育冬虫夏草工艺中的可行性。实验中通过正交对比实验确定了最佳实验条件 :固体培养基为大米或大米 +麸皮 ,固液比为1∶ 1～ 1.3,温度为 2 8℃ ,p H值 7.5～ 8,时间为 (15～ 2 0 ) d。周期变压条件为 :高压 0 .15MPa(表压 )时间 :10 min,低压 :0 .0 0 MPa(表压 )时间 :10 min,菌丝体的生长时间缩短了 (5～ 10 ) d,虫草多糖的得率明显的提高。     

冬虫夏草体外溶出度研究

依据《药典》中的溶出度测定法进行冬虫夏草纳米粉胶囊、冬虫夏草粗粉胶囊及冬虫夏草药材的体外溶出实验.实验显示,冬虫夏草药材在10 min时溶出最多,冬虫夏草纳米粉胶囊及冬虫夏草粗粉胶囊都在40min时达到溶出最高点,而纳米粉溶出度高达100%.结果表明,装入胶囊的冬虫夏草粉比未装入胶囊的冬虫夏草药材,溶出度稳定,且冬虫夏草纳米粉溶出度最高.     

高产D-甘露醇虫草菌种分离纯化的研究

本试验系用生物工程技术分离纯化虫草菌种的研究。先用组织分离法从野生虫草整体组织上分离出虫草菌种 ,再用平板稀释法将菌种纯化 ,获得一株高产D -甘露醇 (虫草酸 )的优良菌种。该菌种被鉴定为蝙蝠蛾拟青霉。使用该菌种经一级种子培养和发酵培养 ,获得含D -甘露醇 9 9% (野生虫草约 7% )、总氮 5 1% (野生虫草约 4% )的虫草菌丝体。原种斜面培养基组成 (% ) :琼脂 2、葡萄糖 2、蛋白胨 0 2、磷酸二氢钾 0 1、硫酸镁 0 0 3、麦麸 5。种子培养基组成 (% ) ;葡萄糖 2、蛋白胨 0 5、磷酸二氢钾 0 1、硫酸镁 0 0 3、麦麸 5。原种培养温度 2 3- 2 4℃、培养时间 4- 5天 ;平均稀释纯化所用稀释菌液为 10 -1、 10 -2 、 10 -3 、 10 -4 、 10 -5、 10 -6,挑菌培养温度分别为 2 3- 2 4℃、 2 8℃、 37℃。种子培养条件 :一级种子培养 :摇床转速 180r/min ,培养温度 2 4- 2 5℃ ,时间 2 - 3天 ;二级种子培养 ;摇床转速 90r/min ,培养温度 2 4- 2 5℃ ,时间 2天。发酵培养条件 ;接种量 5 - 10 % ,温度 2 4- 2 6℃ ,搅拌速度 15 0 - 180r/min ,通气培养 ,时间 5 - 6天 ,PH4 5 ,残糖量降至 0 3%。     

亚香棒虫草菌的纯培养分离和鉴定

亚香棒虫草(Cordyceps hawkesii Gray)的活体材料采自湖南省桃江县。用虫草的虫体、菌柄、子座、及子囊孢子进行了纯培养分离,结果获得了分生孢子阶段的真菌的纯培养物。经鉴定分离到的菌体为亚香棒虫草的无性阶段。亚香棒虫草的寄主昆虫为蝙蝠蛾科的湖南棒蝠蛾(Napialus hunanensis)。     

高效液相色谱法测定蛹虫草中腺苷的含量

建立了反相高效液相色谱法测定蛹虫草中腺苷含量的方法.在选定条件下,测定腺苷的线性范围为1.27～50.5μg/mL,检出限量为0.18ng.回收率平均值为103.4%,RSD为0.367%.该方法灵敏、快速、准确,对人工培植虫草中腺苷的进行了检测,结果满意.     

1株蛹虫草的液体发酵试验及蛹虫草多糖的提取

冬虫夏草是一种名贵的强壮滋补中药,但由于其严格的寄生性和特殊的生长地理环境,天然虫草资源越来越少,冬虫夏草的开发利用只有走人工培养之路.经研究蛹虫草的培养时间与菌丝体生产量的关系,虫草多糖的提取以及虫草多糖的测定,结果显示培养6d的菌丝产量最高,发酵时间对菌丝生长量的研究有重要意义,它可以控制大规模发酵生产大周期.多糖含量的测定用硫酸-苯酚法.经实验显示2次浸提比1次浸提的得率要高,摇瓶菌丝体的粗多糖得率为25.0%,精多糖得率为10.15%,均比已报道的虫草多糖得率高,这为人工控制大规模发酵生产大周期提供科学依据.     

中药蛹虫草的抗肿瘤活性及机制研究

中药治疗肿瘤越来越受到医学界的重视,研究了中药蛹虫草及其人工培植品的主要抗肿瘤相关活性成分的特点及药理作用,探讨了蛹虫草及其人工培植品的抗肿瘤作用及其抗肿瘤机制.随着研究的深入,中药蛹虫草及其人工培植品对人类抗肿瘤将发挥重要作用.     

微波辅助萃取腺苷技术的研究

研究了微波提取蛹虫草固体培养物中腺苷的条件.用HPLC法测定提取液中的腺苷含量,通过正交试验,确定了微波提取腺苷的最佳条件.结果表明,在提取液用量10 mL,固液比1∶200,微波强度为中火,处理时间2 min,样品中腺苷的测定值达0.50 mg/g时,微波提取时间仅为超声波提取的1/45,且提取率高于超声波提取.     

Phylogenetic relationships of host insects of Cordyceps sinensis inferred from mitochondrial Cytochrome b sequences

This study used the sequence of the mitochondrial Cytochrome b(Cytb)to estimate phylogenetic relationships among host Hepialidae insects of Cordyceps sinensis.Genome DNA of host insect was extracted from the dead larva head part of 18 cordyceps populations and 2 species of Hepialus,and the Cytb fragment of host insect was amplified with PCR technique.The nucleotide sequence alignments and their homologous sequences of 24 species host Hepialidae insects of Cordyceps sinensis were obtained from GenBank and were used to construct phylogenetic trees based on neighbor-joining method.The results showed that genus Bipectilus diverged earlier than genus Hepialus and Hepialiscus.Hepialus host insects of Cordyceps sinensis have multitudinous species with different morphological characteristics and geographical distributions.The interspecific genetic differentiations are obvious in Hepialus.Thus,the genus Hepialus might be considered as polyphyletic origin.Cytb sequences have abundant variations among the host insects of Cordyceps sinensis on spe- cific and generic level.The divergence rate of Cytb sequences among the species in Hepialus ranged from 0.23% to 9.24%,except that Hepialus pratensis and Hepialus jinshaensis have the same sequence.Cytb sequence can be used for species identification of host insects of Cordyceps sinensis,but further confirmation in more host insect species is needed.To obtain the Cytb sequence of host insect by ampli- fying DNA extracted from the head part of dead larva in cordyceps turns out to be an effective and accurate approach,which will be useful for studies on phylogeny and genetic structure of host insects of cordyceps populations,especially for analyzing relationships between C. sinensis and its host insects.