人组织型纤溶酶原激活剂（t—PA）在大肠杆菌中的表达,…

人组织型纤溶酶原激活剂（ｔ－ＰＡ）ｃＤＮＡ重组在表达质粒ｐＤＲ７２０中。在Ｅ．ｃｏｌｉＣ６００中获得了表达，表达水平为２％。以醋酸锌显色ＰＡＧＥ凝胶回收ｔ－ＰＡ表达条带，进行复性处理。复性产物经Ｂｅｎｚａｍｉｄｉｎｅ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ，Ｌｙｓｉｎｅ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和层析，纯化得到ＳＤＳ－ＰＡＧＥ银染一条带纯度，比活为４，０００ｍｏｌ／ｓ·ｇ的人ｔ－ＰＡ。     

蓝细菌新质粒载体pPRS－1的构建

以蓝细菌Ｐｌｅｃｔｃｎｅｍａｂｏｒｙａｎｕｍ内源小质粒ｐＰｂｓ（１．５ｋｂ）和Ｅ。ｃｏｌｉ质粒载体ｐＢＲ３２２（４．３ｋｂ）为材料，用限制性内切核酸酶ＣｌａⅠ分别消化，经Ｔ＿４ＤＮＡ连接酶连接，转化Ｅ．ｃｏｌｉＨＢ１０１感受态细胞，在含Ａｍｐ（Ａｐ）和含Ｔｅｔ（Ｔｃ）的ＬＢ琼脂培养基上筛选出Ａｍｐ￣ｒＴｅｔ￣ｓ的转化子，提取转化子的质粒，用ＣｌａⅠ消化，得１．５ｋｂ和４．３ｋｂ两片段，表明转化子所含质粒是ｐＰｂｓ和ｐＢＲ３２２的重组质粒，定名为ｐＰＲＳ－１。     

赛马红血球钾浓度测定与分析

文内测定了９９ 匹赛马血浆钾（ＰＫ＋ ） 和红血球钾（ＲＢＣＫ＋ ） 的浓度，两指标间相关系数很低（ｒ ＝－ ０ ．２１４０）－ 全体赛马ＲＢＣＫ＋ 均数９９ ．０７ ±７ ．２７ ｍ ｍｏｌ／Ｌ－ 这些临床健康马，ＲＢＣＫ＋ 水平并没有全部分布于正常曲线内（赛马ＲＢＣＫ＋ 正常值９０ ～１０４ｍ ｍｏｌ／Ｌ）－ 进一步分为低钾组１０ 匹（ １０ ．１ ％ ） ，ＲＢＣＫ＋ 均数８７ ．５０ｍ ｍｏｌ／Ｌ；高钾组２１ 匹（２１ ．２ ％ ），ＲＢＣＫ＋ 均数１１０ ．０７ｍ ｍｏｌ／Ｌ；其余６８ 匹（６８ ．７ ％ ） 处于９０ ～１０４ｍ ｍｏｌ／Ｌ之间，均数为９７ ．２２ ％ ｍ ｍｏｌ／Ｌ．其中有１３ 匹马赢得头马，ＲＢＣＫ＋ 均数１００ ．１２ｍ ｍｏｌ／Ｌ，高钾组有２ 匹头马，正常组有１１ 匹头马，低钾组没有１ 匹头马．１３ 匹头马与全体９９ 匹马ＲＢＣＫ＋ 均数间没有显著差异（Ｐ＞ ０ ．０５） ，但是，头马与低钾组和高钾组都存在非常显著差异（Ｐ＜ ０．０１）．     

t-PA在昆虫细胞中的表达

将含完整阅读框架的人ｔ－ＰＡ（ｔｉｓｓｕｅ－ｙｔｐｅ ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ ａｃｔｉｖａｔｏｒ,ｔ－ＰＡ）ｃＤＮＡ克隆至昆虫细胞表达转移载体ｐＢａｃＰＡＫ８中,获得重组质粒ｐＢａｃ－ｔＰＡ。应用脂质体共转染法,将ｐＢａｃ－ｔＰＡ和线性化杆状病毒ＢａｃＰＡＫ６ ＤＮＡ共转染Ｔｎ－５Ｂ－１昆虫细胞。经空斑筛选获得１１株重组病毒。经ＰＣＲ鉴定与生物活性测定,获得一株高效表达ｔ－ＰＡ的重且病毒ＢａｃｔＰ     

蓝细菌新质粒载体pPRS—1的构建

以蓝细胞Ｐｌｅｃｔｏｎｅｍａ ｂｏｒｙａｎｕｍ内源小质粒ｐＰｂｓ（１．５ｋｂ）和Ｅ．ｃａｌｉ质粒载体ｐＢＲ３２２（４．３ｋｂ）为材料，用限制性内切核酸酶ＣｌａＩ分别消化，经Ｔ４ＤＮＡ连接酶连接，转化Ｅ．ｃｏｌｉ ＨＢ１０１感受态细胞，在含Ａｍｐ（Ａｐ）和含Ｔｅｔ（Ｔｃ）的ＬＢ琼脂培养基上筛选出Ａｍｐ＾ｒＴｅｔ＾ｓ的转化子，提取转化子的质粒，用ＣｌａＩ消化，得１．５ｋｂ和４．３ｋｂ两片段，表明转化子     

马铃薯叶肉细胞感染Phytophthorainfestans（Mont.）dby的变化

Ｐ．ｉｎｆｅｓｔａｎｓ游动孢子在０．４ｍｏｌ／Ｌ甘露醇溶液的Ｒｏｓｓ原生质体培养基中生长表明。在最初几小时生长的差别不大，只有经过２０ｈ之后，在培养基中游动孢了孢芽长度比对照（水中）较长。在液体培养基中共同培养原生质体和孢芽，没有发现游动孢子孢芽营养趋向。同时，Ｐ．ｉｎｆｅｓｔａｎｓ不同生理小种菌丝体潜育的原生质体的存活率，经过５－６ｈ有显著差别。贝拉（Ｂｅｅｌｌａ）（Ｒ１）品种原生质体在生理小种     

酵母人工染色体DNA的大尺度物理图谱分析

以不同ＰＢＲ３２２质粒ＤＮＡ片段作为ＹＡＣＤＮＡ左右臂探针，使用稀切点限制性内切酶和脉冲电泳技术对含有２ｂＡ３的８００ｋｂ ＹＡＣ作了４种限制酶大尺度物理图谱分析。     

人组织型纤溶酶原激活剂（t—PA）在大肠杆菌中的表达、复性及分离纯化

人组织型纤溶酶原激活剂（ｔ—ＰＡ）。ＤＮＡ重组在表达质粒ｐＤＲ７２０中，在Ｅ．ｃｏｌｉＣ６００中获得了表达，表达水平为２％．以醋酸钟显色ＰＡＧＥ凝胶回收ｔ—ＰＡ表达条带，进行复性处理．Ｒ性产物经Ｂｅｎｚａｍｉｄｉｎｅ—Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ，Ｌｙｓｉｎｅ—Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和层析，纯化得到ＳＤＳ—ＰＡＧＥ银染一条带纯度，比活为为４，０００ｍｏｌ／ｓ·ｇ的人ｔ—ＰＡ．     

3,5—二溴水杨醛缩4—氨基安替比林与铜的荧光猝灭反应？…

研究了新荧光试剂３,５－二溴水杨醛缩４－氨基安替比林（简称：３,５－ＤＢＳＡＡＰ）与铜的荧光猝灭反应体系的最适宜的条件。３,５－ＤＢＳＡＡＰ发射强的荧光,λｅｘ／ｅｎ＝３９３ｎｍ／５１０ｎｍ。在ｐＨ９．０的ＮＨ３－ＮＨ４Ｃｌ缓冲介质中,Ｃｕ（Ⅱ）与３,５－ＤＢＳＡＡＰ在室温反应使其荧光猝灭。据此建立了铜的分析方法,线性范围为１．６×１０＾－５ｍｏｌ／Ｌ￣１．２×１０＾－７ｍｏｌ／Ｌ。用于测定人发中     

3,5-二溴水杨醛缩4-氨基安替比林与铜的荧光猝灭反应及其应用

研究了新荧光试剂３ ,５ － 二溴水杨醛缩４ － 氨基安替比林（ 简称：３ ,５ － ＤＢＳＡＡＰ） 与铜的荧光猝灭反应体系的最适宜的条件。３ ,５ － ＤＢＳＡＡＰ 发射强的荧光,λｅｘ／ｅｍ ＝ ３９３ｎｍ／５１０ｎｍ 。在ｐＨ９ ．０ 的ＮＨ３ － ＮＨ４Ｃｌ 缓冲介质中,Ｃｕ（ Ⅱ） 与３ ,５ － ＤＢＳＡＡＰ在室温反应使其荧光猝灭。据此建立了铜的分析方法,线性范围为１ ．６ ×１０ － ５ ｍｏｌ／Ｌ～１ ．２ ×１０ － ７ ｍｏｌ／Ｌ。用于测定人发中的铜,结果满意。     

多能硫杆菌RubisCO基因的亚克隆及各种启动子对其表达的影响

将多能硫杆菌（Ｔｈｉｏｂａｃｉｌｕｓｖｅｒｓｕｔｕｓ）ＲｕｂｉｓＣＯ基因从两个方向亚克隆到ｐＢＲ３２２和ｐＫＫ２２３－３载体上,通过酶切的方法对各种质粒的插入方向进行了确证．并进一步对这两种插入方向的质粒在大肠杆菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ）中的表达情况进行了酶活性的测定,该基因片段在ｐＫＫ２２３－３载体的ｔａｃ启动子的启动下,表达活性比ｌａｃ启动子以及ｐＢＲ３２２载体上的Ｐ１和Ｐ２启动子高．     

卤代烃对唑化合物荧光猝灭机理

测试了１×１０－５ｍｏｌ／Ｌ５，５－二苯基－２，２－联唑（ＰＯＯＰ）、反－１，２－双［２－（５－苯基唑基）］乙烯（ＰＯＥＯＰ）、４，４－双［２－（５－苯基唑基）］－１，１－联苯（ＰＯＢＯＰ）在含不同浓度卤代烃的１，４－二氧六环溶液中的荧光量子产率，讨论了荧光猝灭机理，计算出ＣＨ３Ｉ、ＰｈＩ、ＰｈＢｒ对ＰＯＥＯＰ、ＰＯＯＰ、ＰＯＢＯＰ的荧光猝灭速率常数．研究发现，卤代烃分子越小，卤原子核电荷数越高，其猝灭荧光能力越强     

带有绿色荧光蛋白基因（gfp）的植物重组表达质料 …

利用ＤＮＡ重组技术,将经定点突变改造的绿色荧光蛋白基因（ｇｆｐ）克隆到植物表达载体ｐＢＩ－１２１中,成功地构建了植物重组表达质粒ｐＢＩ－ＧＦＰ。     

多能硫杆菌RubisCO基因的亚克隆及各种启动子对其表达的影响

将多能硫杆菌ＲｕｂｉｓＣＯ基因从两个方向亚克隆到ｐＢＲ３２２和ｐＫＫ２２３－３载体上，通过酶切的方法对各种质粒的插入方向进行了确证。并进一步对这两种插入方向的质粒在大肠杆菌中的表达情况进行了酶活性的测定，该基因片段在ｐＫＫ２２３－３载体的ｔａｃ启动子的启动下，表达活性比ｌａｃ妄动子以及ｐＢＲ３２２载体上的Ｐ１和Ｐ２启动子高。     

限制性内切酶Bsp78I的化学修饰与动力学研究

从Ｂａｃｉｌｕｓｓｐｈａｅｒｉｃｕｓ７８菌中将Ｂｓｐ７８Ｉ纯化到均一程度。测得该酶对ｐＢＲ３２２ＤＮＡ的Ｋｍ值为２．６７×１０＾－８ｍｏｌ．Ｌ＾－１。用对氯汞苯甲酸、磷酸吡哆醛、２，３－丁二酮修饰该酶巯基、赖氨酸、精氨酸残基，结果表明这些基因均与该酶活性有关。     

西瓜种植物RAPD分析影响因子的研究

以西瓜种内的１２个品种（系）为模板ＤＮＡ,研究了影响ＲＡＰＤ扩增效果的因素。结果表明,模板ＤＮＡ、Ｔａｑ酶、随机引物、Ｍｇ２＋浓度以及ＰＣＲ反应程序在ＲＡＰＤ分析中都具有重要的作用。根据以上因子的研究结果,建立了适合西瓜种植物的ＲＡＰＤ分析的技术体系：１０μＬ反应液中,模板１０ｎｇ／１０μＬ,引物０５μｍｏｌ／Ｌ,ＴｒｉｓＨＣｌ（ｐＨ８３）５０ｍｍｏｌ／Ｌ,ＢＳＡ５００μｇ／ｍＬ,ＭｇＣｌ２２５ｍｍｏｌ／Ｌ,ＴａｑＤＮＡ０６Ｕ／１０μＬ,ｄＮＴＰｓ２００μｍｏｌ／Ｌ,１０％蔗糖４００和１ｍｍｏｌ／Ｌ甲酚红。     

人红细胞生成素受体膜外结构域在大肠杆菌中的融合表达及其纯化

将插入ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｂｅ的人红细胞生成素受体ｃＤＮＡ,用ＥｃｏＲＩ和ＢａｍＨＩ酶解,分离得到的基因片段,插入到经ＥｃｏＲＩ和ＲａｍＨＩ消解的表达载体ｐＧＥＸ－３Ｘ中,得到重组表达质粒ｐＧＥＸ－３Ｘ／ｈＥＰＯＲ。重组质粒ｐＧＥＸ－３Ｘ／ｈＥＰＯＲ含有ｔａｃ启动子,ＥＰＯＲ膜外结构域基因５端与谷胱甘肽转移酶（ＧＳＴ）编码基因融合,阳性重组子在大肠杆菌中经ＩＰＴＧ诱导表达ＧＳＴ－ｈＥＰＯＲ,重组表达菌裂解上清液经ＧＳＨ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和柱一步纯化,能除去绝大部分杂蛋白,基本达到纯化的效果。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和免疫杂交分析显示,重组表达产物确系人红细胞生成素受体     

基于含蒽荧光共聚物膜的四环素荧光光纤传感器

甲基丙烯酸甲酯和丙烯酸丁酯与荧光单体甲基丙烯酸［９蒽］甲基酯共聚得一种含蒽荧光共聚物（ＰＡＭＢ）．基于四环素对ＰＡＭＢ膜荧光的可逆猝灭，研制了一种新的四环素荧光光纤传感器．传感器具有好的可逆性，重现性及选择性，在３０ｓ内对四环素的线性响应为２．０２×１０－７～２．０２×１０－４ｍｏｌ／Ｌ．由于蒽被共价键合在ＰＡＭＢ上，传感器显示出好的长期稳定性．该传感器已被用于四环素药片和尿中四环素的直接测定．     

天花粉蛋白与腺嘌呤、单磷酸腺苷、三磷酸腺苷之间的相互作用

利用荧光光谱和透析平衡法研究了腺嘌呤、单磷酸腺苷（ＡＭＰ）、三磷酸腺苷（ＡＴＰ）与天花粉蛋白之间的相互作用。荧光光谱揭示腺嘌呤与天花粉蛋白结合后对其荧光强度影响较小，但使蛋白的荧光峰位红移，而ＡＭＰ和ＡＴＰ只引起蛋白荧光强度下降而不改变峰位。ＡＭＰ，ＡＴＰ引起的荧光强度下降包含着快慢两个过程。透析平衡法测得ＡＭＰ，ＡＴＰ与天花粉蛋白相互作用的结合常数分别为１．２×１０￣（－１）ｍｏｌ／Ｌ和４．５×１０￣（－５）ｍｏｌ／Ｌ，二者自由能之差为－２．２６ｋＪ／ｍｏｌ。     

乙型肝为病毒（HBV）DNA免疫的初步研究

用聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增了编码ＨＢＶｓＡｇ的基因序列,将其插入到ｐｃＤＮＡ３载体中,位于人巨细胞病毒（ＣＭＶ）早期启动子下游,重组质粒ｐｃＤＮＡ３－ｓＡｇ转染细胞后检测到ＨＢｓＡｇ表达,用纯化后的重组质粒直接注射用ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠骨骼细内,诱发实验小鼠产生了抗ＨＢｓＡｇ特异性抗体,ＰＣＲ扩增未检测到注射部位及肝脏细胞染色体中有外源ＨＢＶＤＮＡ整合。