Plectonema boryanum作为外源质粒受体的筛选及其原生质球的制备与再生

对三种丝状蓝藻株系（ＰｈｏｒｍｉｄｉｕｍＬｕｒｉｄｕｍ，Ｐｈｏｒｍｉｄｉｕｍｆａｖｅｏｌａｒｕｍ和Ｐｌｅｃｔｏｎｅｍａｂｏ－ｒｙａｍｕｍ）的研究结果表明：Ｐ，ｂｏｒｙａｎｕｍ因无明显限制性内切核酸酶活性可作为受体进一步研究，对其原生质球的释出和新细胞再生的最适条件分析表明：０．１％溶菌酶作用的最适时间为２ｈ温度为３５℃，ｐＨ为７．０～７．５（０．８ｍｏｌ／Ｌ的甘露醇为最适渗透稳定剂）。这些条件适合于在ＢＧ－１１液体中释放原生质球及固体培养基上新细胞的再生。     

十种（株）杜氏藻β－胡萝卜素的提取及含量比较

建立了从杜氏藻鲜藻中直接提取、纯化β－胡萝卜素及快速检测其含量的新方法，发现在十种（株）杜氏藻Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａｂａｒｄａｕｉｌ中生成β－胡萝卜素的量最高，达藻干重的４．１９％，在最佳条件下可达１３％，经动物急性毒性实验测得小鼠对杜氏藻β－胡萝卜素的最大耐受量＞２４０ｍｇ·ｋｇ￣（－１）．     

重组质粒pPRS—1超声转化蓝藻Chroococcus sp.的研究

介绍了超声转化蓝藻的方法，并用此方法获得了重组质粒ｐＰＲＳ－１转化Ｃｈｒｏｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐ．的转化藻落。从这些转化藻落中检测到重组质ｐＰＲＳ－１。此结果证明重组质粒ｐＰＲＳ－１是一种Ｅ．ｃｏｌｉ和Ｃｈｒｏｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐ．之间均可转化的穿梭质粒。     

口服转胸腺素α1基因聚球藻对小鼠T细胞亚群作用的研究

为探讨口服后转胸腺α1(Tα1)基因聚球藻对T细胞亚群的作用,将小鼠随机分为空白对照组、野生藻组、转化藻(小剂量、中剂量和大剂量)组和日达仙组,用灌服的方式,给予空白对照组20mL·kg~(-1)的生理盐水,野生藻组0.4g·kg~(-1)的野生聚球藻;转化藻小、中、大剂量组,分别0.2g·kg~(-1)、0.4g·kg~(-1)和0.6g·kg~(-1)的转Tα1基因聚球藻;日达仙组则肌注给予3.2mg·kg~(-1)的胸腺素α1(日达仙)。结果表明转Tα1基因藻口服后可显著提高CD3亚群水平,显著提高CD4亚群水平,明显提高CD4/CD8的比值。提示转Tα1基因聚球藻具有增强机体免疫功能的作用。     

水稻同源重组型质粒载体的构建

根据同源重组机制,以水稻17S-5.8SrDNA 2.5 kb 同源片段和含有MT基因、Km r 基因的外源DNA片段构建了质粒载体pURKMT,并用电激法转化水稻愈伤组织,经Km 筛选,获得了对Km 抗性明显高于基础抗性的愈伤组织.经DNA斑点杂交检测,证实外源基因已整合到水稻基因组DNA中.     

蓝藻基因表达载体系统的构建和应用

蓝藻是一类具植物型放氧光合作物特性的原核生物。多数蓝藻富含营养物质,无毒,是表达外源目的基因的独特受体系统。因此,构建适用于蓝藻表达外源目的基因的载体系统,并用于表达药物活性肽基因,已成为当前蓝藻基因工程研究的热点之一。本课题组10多年来率先在国内开展蓝藻基因工程研究,从蓝藻Plectonema botyanum中分离得到了约1.5kb的小质粒,以此为出发质粒,构建了蓝藻穿梭质粒pPRS-1和穿梭质粒表达载体pPKE2;同时根据DNA片段同源重组的性质,构建了蓝藻Calothrix sp.PCC7601、Synechococcus sp.PCC7942的基因整合平台系统。在国家863项目经费资助下,利用构建的蓝藻质粒载体和基因整合平台系统,把人源胸腺素基因转入蓝藻Calothrix sp.PCC7601和Synechoccus sp.PCC7942,并能高效表达,首次获得了可直接口服的含人源胸腺素的转基因蓝藻,这对研究和开发基因工程口服药物具有重大的科学意义和经济、社会效益。     

植物生长素亏损与雄性不育的发生

本文用水稻三系和籼粳杂种半不育株及其亲本为主要材料,阐明;花药可溶性蛋白的含量随不育度的加深而下降,不育系的蛋白含量仅为保持系的18—24％。不育的花药淀粉积累极低。与小孢子发育有关的α—淀粉酶、β—淀粉酶、磷化酶、ATP酶等的活性均不同程度地随着不育度的加深而下降,结合态吲哚乙酸(IAA)量与可育度平行下降。不育的花药的吲哚乙醇氧化酶、IAA氧化酶、过氧化物酶的活性随着不育度加深而提高几倍至几十倍。据此认为雄性不育的起因在于不育花药的IAA库受有关氧化酶破坏而大大亏损。生长素亏损必然带来花药代谢及小孢子发育的异常,从而导致花粉不育。生长素亏损又能反馈于小孢子的信息系统,引起恶性循环。这些相关联的作用是波动性的,因此不育的花药中可包含部份正常花粉。根据以上结果修订了植物雄性不育发生机制的模型(图4)。     

β-内酰胺酶基因在谷氨酸产生菌T_6-13染色体上的整合与表达

以质粒pUC13编码的β-内酰胺酶基因为外源基因,通过随机连接谷氨酸产生菌T_6-13染色体DNA片段后转化T_6-13原生质体,使其整合到染色体上,得以表达.在实验条件下,所测19株转化子的抗性都有很高的稳定性,其中10株能百分之百地保持抗性.经生物素标记的pUC13为探针的分子杂交实验证实抗性基因已整合到T_6-13菌染色体DNA上。