柔嫩艾美尔球虫厦门株(Eimeria tenella)生物学研究

采用单卵囊分离方法从厦门地区饲养的鸡盲肠中获得艾美尔球虫,经显微观察、测量和感染实验,从寄生部位、卵囊形态、孢子化时间和潜伏期等指标测定,实验结果:采用琼脂板方法分离和挑选单卵囊方法进行感染效果理想,单卵囊感染小鸡成功率为60%.该球虫寄生在鸡盲肠部位,其余部位未发现,卵囊形态长卵圆形,长25.80(23.5～28.5),宽20.86(18.5～23.5),长/宽:1.23(1.21～1.27),27℃条件下孢子化时间为20 h.,潜伏期为146 h.与国内一些株进行比较存在差别,确定该艾美尔球虫为柔嫩艾美尔球虫(Eimeriatenella),并定名为柔嫩艾美尔球虫厦门株.     

口服转胸腺素α1基因聚球藻对小鼠T细胞亚群作用的研究

为探讨口服后转胸腺α1(Tα1)基因聚球藻对T细胞亚群的作用,将小鼠随机分为空白对照组、野生藻组、转化藻(小剂量、中剂量和大剂量)组和日达仙组,用灌服的方式,给予空白对照组20mL·kg~(-1)的生理盐水,野生藻组0.4g·kg~(-1)的野生聚球藻;转化藻小、中、大剂量组,分别0.2g·kg~(-1)、0.4g·kg~(-1)和0.6g·kg~(-1)的转Tα1基因聚球藻;日达仙组则肌注给予3.2mg·kg~(-1)的胸腺素α1(日达仙)。结果表明转Tα1基因藻口服后可显著提高CD3亚群水平,显著提高CD4亚群水平,明显提高CD4/CD8的比值。提示转Tα1基因聚球藻具有增强机体免疫功能的作用。     

加速成果转化打造特色产业

湖南省石门县坚持以科技兴农为重点,加速推进科技成果转化,不断促进特色农业壮大,科技对农业经济的贡献率达到了45%.先后获得"全国农业科技推广先进单位"、"湖南农村技术市场示范县"、"全国科技进步县"等荣誉称号.     

采用PhR-L20C光生物反应器培养转胸腺素α1基因蓝藻的研究

采用PhR L20C光生物反应器对转胸腺素α1基因聚球藻Synechococcussp.PCC7942进行6批次的培养,结果表明,采用本实验室优化后的培养条件,根据该型气升式光生物反应器所具备的各项性能指标和参数条件进行培养,一个培养收获周期为6d,平均生长速率为0.61OD730/d,6d后藻细胞平均终浓度达到OD730=4.27,绘制了转基因藻细胞的光密度与其干质量的标准曲线,通过曲线得出产率平均约为0.36g/(Ld),最高0.40g/(Ld);最终细胞密度平均可达2.52g/L,最高2.84g/L.     

蓝藻基因表达载体系统的构建和应用

蓝藻是一类具植物型放氧光合作物特性的原核生物。多数蓝藻富含营养物质,无毒,是表达外源目的基因的独特受体系统。因此,构建适用于蓝藻表达外源目的基因的载体系统,并用于表达药物活性肽基因,已成为当前蓝藻基因工程研究的热点之一。本课题组10多年来率先在国内开展蓝藻基因工程研究,从蓝藻Plectonema botyanum中分离得到了约1.5kb的小质粒,以此为出发质粒,构建了蓝藻穿梭质粒pPRS-1和穿梭质粒表达载体pPKE2;同时根据DNA片段同源重组的性质,构建了蓝藻Calothrix sp.PCC7601、Synechococcus sp.PCC7942的基因整合平台系统。在国家863项目经费资助下,利用构建的蓝藻质粒载体和基因整合平台系统,把人源胸腺素基因转入蓝藻Calothrix sp.PCC7601和Synechoccus sp.PCC7942,并能高效表达,首次获得了可直接口服的含人源胸腺素的转基因蓝藻,这对研究和开发基因工程口服药物具有重大的科学意义和经济、社会效益。     

免疫组化方法研究胸腺素α1在小鼠肉瘤S180细胞中的表达

探讨了胸腺素α1在小鼠S180肉瘤中的表达及其临床意义．以小鼠肉瘤S180组织和正常小鼠组织为材料，福马林固定和石蜡包埋．运用兔抗胸腺素α1多克隆抗体，按常规免疫组织化学方法检测接种在小鼠皮下的小鼠肉瘤组织以及正常小鼠皮下肌肉组织细胞中胸腺素α1的表达状况．研究结果发现胸腺素α1定位表达在小鼠肉瘤组织细胞的胞浆和细胞核中。免疫组化呈现强阳性．而正常组织细胞内基本无显色，呈阴性．试验结果表明：胸腺素α1在恶性肿瘤细胞小鼠肉瘤组织细胞中高表达．而正常小鼠组织则低表达或不表达．细胞内胸腺素α1蛋白的高表达与肿瘤具有明显相关性，该研究成果可能使胸腺素α1作为一个新的和有价值的肿瘤标记物在临床诊断中得到应用，也为进一步探索胸腺素α1与肿瘤之间相互关系的分子机理研究奠定基础，并通过抑制胸腺素α1这条途径达到控制肿瘤生长的效果．     

钝顶螺旋藻不同形态藻丝体的蛋白质表达和生理差异的比较研究

无论是在生产还是在实验室培养条件下,螺旋藻多形性变异现象普遍存在.本研究从钝顶螺旋藻(Spirulina platensis)中分离纯化获得了4种不同形态的藻丝体,分别是直线形藻丝体(spL)、低度螺旋形藻丝体(sps-L)、中度螺旋形藻丝体(sps-M)和高度螺旋形藻丝体(sps-H).对这4种不同形态螺旋藻的生长速率、光合作用、叶绿素a(Chl a)含量分别进行研究,发现这4种不同形态藻丝体在生长和光合生理上存在明显的差异.而总蛋白的SDS-PAGE分析也表明,不同形态藻丝体在蛋白的表达上也有差异,其中34 ku的蛋白只在直线形藻丝体spL中大量表达.     

外源基因的导入对Synechococcus sp.PCC7942 SOD活性和同工酶谱的影响

外源DNA导入Synechococcus sp．PCC7942后．通过NBT光化还原和PAGE电泳检测发现转基因藻Synechococcus sp．PCC7942的SOD活性和同工酶谱发生了改变．若外源基因整合在受体细胞染色体DNA上，根据整合位点的不同则能提高或减弱Synechococcus sp．PCC7942的SOD活性，同时增加同工酶谱带．若外源基因不是整合在染色体上而是以质粒的形式存在，则只改变Synechococcus sp．PCC7942 SOD活性而不影响其同工酶谱．     

柔嫩艾美尔球虫厦门株生物学（Eimeria tenella）研究

采用单卵囊分离方法从厦门地区饲养的鸡盲肠中获得艾美尔球虫．经显微观察、测量和感染实验．从寄生部位、卵囊形态、孢子化时间和潜伏期等指标测定．实验结果：采用琼脂板方法分离和挑选单卵囊方法进行感染效果理想。单卵囊感染小鸡成功率为60％．该球虫寄生在鸡盲肠部位．其余部位未发现．卵囊形态长卵圆形．长25．80(23．5～28．5)．宽20．86(18．5～23．5)．长／宽：1．23(1．21～1．27)．27℃条件下孢子化时间为20h．．潜伏期为146h．与国内一些株进行比较存在差别．确定该艾美尔球虫为柔嫩艾美尔球虫(Eimeria tenella)，并定名为柔嫩艾美尔球虫厦门株．     

抗胸腺素α1(Tα1)多克隆抗体的纯化及转基因藻中Tα1的检测

采用不同浓度的硫酸铵分级盐析纯化抗Tα1多克隆抗体,然后用不同量的牛血清白蛋白(BSA)与兔抗Tα1抗体进行中和,以去除血清中的抗BSA抗体,并利用纯化后的抗Tα1多克隆抗体检测转基因藻中Tα1.结果表明:采用25%(NH4)2SO4进行分离纯化,并将BSA加入到血清中进行中和,37℃处理30min,BSA的量与血清的比例以1μL血清 15μgBSA可达到中和血清中的抗BSA抗体的目的.获得的抗Tα1抗体效价与未进行分离前基本相同,并且阴性本底低.采用ELISA方法检测野生藻和转基因藻中的Tα1,转基因藻的Tα1OD450值比野生藻的高2.1倍以上,提示Tα1在转基因藻中成功表达.实验证明,此方法能有效纯化抗胸腺素α1多克隆抗体,获得特异性强的抗胸腺素Tα1抗体,并且效价不受影响.