十种（株）杜氏藻β—胡萝卜素的提取及含量比较

建立了从杜氏藻鲜藻中直接提取，纯化β－胡萝卜素及快速检测其含量的新方法，发现在十种（株）杜氏藻Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａ ｂａｒｄａｕｉｌ中生成β－胡萝卜素的量最高，达藻干重的４．１９％，在最佳条件下可达１３％，经动物急性毒实验测得小鼠对杜氏藻β－胡萝卜素的最大耐受量＞２４０ｍｇ．ｋｇ＾－１．     

氮、磷、硫对盐生杜氏藻色素积累的影响

研究了盐生杜氏藻(Dunaliella salina)在不同浓度氮、磷、硫等营养条件下对细胞积累β-胡萝卜素和叶绿素的影响．发现盐生杜氏藻细胞经过10d生长，在营养缺乏条件下其β-胡萝卜素和叶绿素的比率达到最大，积累β-胡萝卜素的最适条件是无氮、无磷和无硫，但是不利于盐生杜氏藻的生长．讨论了此结果的机理和意义，为利用盐生杜氏藻大规模生产β-胡萝卜素提供了理论依据．     

杜氏藻中多糖的化学研究（Ⅰ）

用０．２％稀碱溶液萃取杜氏藻提取出β－胡萝卜素后的残渣，经浓缩后用乙醇沉淀，得粗多糖，以Ｓｅｖａｇｅ法除去蛋白质，再经ＤＥＡＴ－纤维素及葡聚糖凝胶Ｇ－１００柱层析，得杜氏藻多糖（简称ＰＤＳ）．多糖经薄层层析、纸层析、气相色谱及经甲基化后的色谱／质谱分析，获知有５种糖，即半乳糖、木糖、鼠李糖、葡萄糖、甘露糖，并测得各种糖的可能连接．     

杜氏藻细胞的无性增殖过程

杜氏藻细胞的无性增殖过程刘广发，楼士林（生物学系）由于杜氏藻富含蛋白质、甘油和β－胡萝卜素等物质，美、澳、以等国自７０年代起已竞相投入巨资进行研究和大规模养殖￣［１，２］。杜氏藻通常以细胞纵裂方式进行无性增殖￣［３］。本文借助光学和电子显微镜观察，剖...     

五种(株)杜氏藻β-胡萝卜素含量比较的初析

本文培养了5种(株)杜氏藻,诱导其生成β-胡萝卜素,并测定了这5种(株)杜氏藻中β-胡萝卜素的含量和变化规律.结果表明,在这五种杜氏藻中,D.bardawil var.w-8-1的β-胡萝卜素含量最高,高达藻干重的6.6%;而D.primolecta的β-胡萝卜素含量最低,只占藻干重的0.7%.还发现,在所研究的5种(株)杜氏藻中β-胡萝卜素含量与培养时间均呈对数关系.本研究结果为开发和利用杜氏藻中的β-胡萝卜素资源,提供了理论依据.     

根据β—胡萝卜素合成机制改进盐生杜氏藻(Dunaliella salina)培养方法的研究

根据β-胡萝卜素合成机制,在盐生杜氏藻(Dunaliella Salina)的培养过程中适当加入柠檬酸,Mg~(2+)和间断通CO_2可以提高盐生杜氏藻体内β—胡萝卜素的含量,其含量可达10.2％.     

杜氏藻中β—胡萝卜素的提取分离

从盐生杜氏藻中提取分离得β-胡萝卜素，探讨了不同提取条件对收率的影响．     

不同氮源对盐生杜氏藻生长和β-胡萝卜素积累的影响

研究了 Ｎａ Ｎ Ｏ３、 Ｎ Ｈ４ Ｃｌ和脲 ３ 种不同氮源对盐生杜氏藻生长和 β胡萝卜素积累的影响．结果显示,在０．０５～０．５ ｇ／ Ｌ 浓度范围内,较高浓度 Ｎａ Ｎ Ｏ３ 对杜氏藻生长有利． Ｎ Ｈ４ Ｃｌ对杜氏藻的生长有毒害作用,０．２ ｇ／ Ｌ 的浓度即对杜氏藻生长有明显抑制作用,脲在０．１～１．８ ｇ／ Ｌ 的浓度范围内对杜氏藻的生长有促进作用．但当脲浓度达到 ３．０ ｇ／ Ｌ 时,生长速度又有所下降;杜氏藻细胞中β胡萝卜素积累量与培养基中 Ｎａ Ｎ Ｏ３ 浓度成反比．在室外强光照下,以 ０．１ ｇ／ Ｌ 低浓度脲和 Ｎａ Ｎ Ｏ３ 作为氮源,杜氏藻细胞均可积累较高的 β胡萝卜素含量．本文的实验结果提示,低浓度脲有利于杜氏藻细胞生长和 β胡萝卜素积累,可作为良好的氮源．     

盐生杜氏藻大量培养条件的研究

阐述了大量培养盐生杜氏藻的有关条件：在培养过程中需要间断地通过ＣＯ２１０ｍｌ／ｓ；加入３０μｍｏｌ／ＬＥＤＡＴ、５０μｍｏｌ／ＬＦｅ＾３＋，０．５ｍｍｏｌ／ＬＭｇ＾２＋均可提高藻体的生长，对β－胡萝卜素的积累有利；在培养过程中需加０．３ｍｍｏｌ／／的脲素作为氮源，也有利于藻体的生长。     

β－胡萝卜素在盐生杜氏藻（Dunaliella Salina）中积累机理的研究

以不同光照条件下生长的盐生杜氏藻为材料，通过测定叶绿体基质蛋白的含量发现，在低光照下叶绿体基质蛋白的含量为２６．４０ｇ／Ｌ，而在强光照下叶绿体基质蛋白为１１．５０ｇ／Ｌ。对这两种蛋白进行平板电泳皆为一条带，而在ＳＤＳ－凝胶电泳，低光照下为五条带（五个亚基），其Ｒ＿（ｆ１）值分别为０．４０，０．５０，０．６０，０；７０，０．７８；强光照下有四条带（四个亚基），其Ｒ＿（ｆ２）分别为０．５０，０．５８，０．６８，０．８０。通过改变ｐＨ值、提高温度和紫外线照射等，发现该蛋白具有酶活性并与β－胡萝卜素的合成有关。     

用HPLC法测定红酵母中β-胡萝卜素的含量

对从红酵母中提取β－胡萝卜素的方法进行了初步探讨，并以高压液相色谱（ＨＰＬＣ）方法测定了红酵母中β－胡萝卜素的含量，采用ＯＤＳ为固定相，以甲醇∶氯仿（７０∶３０）为流动相，检测波长为４５０ｎｍ，该方法准确、快速、可靠．平均回收率为９２．０％．     

盐藻尿苷二磷酸葡萄糖脱氢酶(DsUGD)基因的功能预测

盐生杜氏藻（Dunaliella salina）具有极强的耐盐性，藻体含有大量的胡萝卜素、蛋白质以及多糖类化合物．目前，已有研究报道指出蓝藻多糖是其适应高盐、高碱等环境的重要因素；而盐藻多糖的作用尚未见相关研究．尿苷二磷酸葡萄糖脱氢酶（UDP-glucose dehydrogenase，UGD，EC1．1．1．22）是多糖合成中的一个关键酶，它催化产生的UDP-葡萄糖醛酸是多糖合成中的关键前体物质．在微生物中，该酶参与到荚膜多糖的合成，是其致病性原因所在；在高等植物中，UGD参与到半纤维素的合成，与植物细胞壁形成密切相关．盐生杜氏藻是一类低等光合植物，它没有细胞壁和荚膜，因此关于UGD在该物种中的作用有待进一步研究．     

超临界CO2萃取技术在β-胡萝卜素提取中的应用研究

采用超临界CO2萃取技术萃取盐藻粉中的高,萃取率越大。超临界CO2萃取技术萃取盐藻粉中的β-胡萝卜素,结果表明,萃取压力越高、温度越β-胡萝卜素适宜操作条件为：操作压力35MPa．温度50℃。在该条件下得到的萃取物占被萃取藻粉的3．49％,β-胡萝卜素收率在90％以上,β-胡萝卜素含量为14．4％,萃取物呈暗红色膏状,具有盐藻粉本身气味。     

盐生杜氏藻Dunaliella salina的生物学特性与培养研究

盐生杜兵藻富含β－胡萝卜素和蛋白质，适宜在高纬度、光照强的各种咸水环境中生长，对它的生物学特性和培养条件进行了研究，发现适宜于盐生杜氏藻生长的培养基主要成分为：２ｍｏｌ／ＬＮａＣｌ，５ｍｍｏｌ／ＬＫＮＯ３，６．５ｍｍｏｌ／ＬＮａＨＣＯ３，５ｍｍｏｌ／ＬＭｇＳｏｒ，０．３ｍｍｏｌ／ＬＫＨ２ＰＯ４。     

β-胡萝卜素原料筛选及其超临界二氧化碳萃取

建立了柱层析／分光光度计法测定β－胡萝卜素的分析方法。筛选出富含β－胡萝卜素的螺旋藻做为原料。分别以石油醚和超临界二氧化碳萃取螺旋藻中β－胡萝卜素。结果表明,超临界二氧化碳萃取藻粉中β－胡萝卜素与石油醚萃取相比具有萃取效率高、速度快、工艺简单、萃取物色味纯正、藻粉可以进一步利用和再出售的优点。     

螺旋藻粉β-胡萝卜素含量测定方法的优化

采用可见分光光度法测定螺旋藻藻粉中β-胡萝b素含量,并对测定过程中有关β-胡萝卜素的提取工艺进行了优化,确定了最佳工艺参数为：提取剂为y（正庚烷）：V（丙酮）：V（无水乙醇）：V（甲苯）=10：7：6：7,提取剂体积为30mL,浸提时间为12h,浸提温度为35℃．在该工艺下测得螺旋藻藻粉的β-胡萝卜素含量为134．15mg／100g．     

30株海洋绿藻的总脂含量和脂肪酸组成

对１１属（小球藻属、绿囊藻属、策绿球藻属、卵胞藻属、原球藻属、咸胞灌属、杜氏藻属、裂丝藻属、塔胞藻属和衣藻属）的３０株海洋藻进行特定条件下的一次性培养,在指数生长收获,进行了总脂含量和脂肪酸组成的分析。２１株海洋绿藻的总脂含量超过干重的１０％,达１１．６１％～３４．４９％,其它９株在４．２５％～９．４８％之间,绿藻的１６碳和１８碳脂肪酸最为丰富,有着含量较高的１６：０、１６：（ｎ－３）、１８：２（     

富含β-胡萝卜素杜氏藻的紫外线诱变筛选

以本实验室保存的7种(13株)杜氏藻为材料,筛选出β-胡萝卜素含量较高的藻株Dunaliella.bardawil(1-7)进行紫外线诱变.以橙-红色藻落为初筛标志,再经高盐、强光、低氮诱导,检测其β-胡萝卜素含量,即复筛.发现突变株11-1具有高产β-胡萝卜素的能力,其β-胡萝卜素含量高达干质量的9.48%,显著高于原出发株.此外11-1的细胞体积是原出发株的5倍多,有利于养殖和收集.     

钝顶螺旋藻中蛋白质结合硒的研究

目的：研究富硒培养的印顶螺旋藻干藻（含硒：462.6μg.g^-1）中蛋白质含硒量及差异。方法：采用硫酸铵分经,DEAE-52纤维素及SephadexG-100柱层分离纯化蛋白质,经紫外吸收光谱和SDS梯度凝胶电泳检测白质纯度及基组成,以2,3－二氨基萘（DAN）荧光分光光度法测定含硒量。结果：蛋白质结合的硒占藻体总硒的58．7％,不同饱和度（25％,50％,100％）硫酸铵分级沉淀蛋白质中的硒占总硒情况分别为4．6％,18．7％,6．5％,DEAE－52柱层析蛋白洗脱峰蛋白含硒量依次为258,431,204,484μg.g^-1,分离纯化的含硒藻蓝蛋白有较高的含硒量（267μg.g^-1）,两个亚基相对分子质量为α＝19500,β＝21500,两亚基含硒量相对之比为1．65。结论：藻体蛋白及藻蓝蛋中结合硒并有明显差异。     

雨生红球藻β-胡萝卜素酮化酶cDNA的克隆与序列分析

参照Kajiwara等人获得的β-胡萝卜素酮化酶cDNA序列设计引物，利用RT-PCR技术扩增雨生红球藻的β-胡萝卜素酮化酶cDNA的完整编码片段并进行了序列测定与分析．结果表明，所获得cDNA序列与Kajiwara等人报道序列具有96．4％的相似性，蛋白序列具有98．3％的相似性，说明所获得的cDNA序列确为β-胡萝卜素酮化酶的cDNA序列．