用Asmus法测K_m值

在酶的动力学研究中,K_m能看作为表观电离常数,它在生物化学中是用米氏方程测定,只要酶和底物结合生成一个有色中间络合物,则K_m能用Asmus法测定,本文在酪氨酸酶催化多巴的反应中,用Asmus法计算K_m值,其结果与米氏方程式相一致.     

PNP酶固定化技术探讨

本研究采用活化CH-Sepharose 4B固定化PNP酶,发现其表现米氏常数K_m=5.13×10~(-3)mol/l,比游离酶增大(游离酶K_m=4.44×10~(-3)mol/l);固定化酶和游离酶的最适pH分别为9.6和9.0,固定化后,其酶的稳定性明显提高,半衰期为七个半月。用此酶催化聚合而成的PolyC和PolyI的分子量分别大于5S和9S。     

文昌鱼碱性磷酸酶的动力学初步研究

从厦门文昌鱼中部份提纯一种碱性磷酸酶,并对该酶作用的动力学进行了初步的研究。该酶作用于底物磷酸苯二钠的最适pH为10.1,最适温度为40℃,测得其米氏常数值(K_m)为1.1×10~(-3)M,pH影响K_m值而不影响最大反应速度(V),表现为竞争性类型。Mg~( )有明显的激活作用,而Zn~( ),EDTA,DFP,ME及PCMB等在一定浓度范围内,表现为非竞争抑制类型。ME的抑制作用表明硫硫键是维持酶活力所必需的。从pH对酶的活力影响,测得有关酶活性基团解离的pK值为9.82,在不同温度条件下,测得该酶的活化能为3.16仟卡/克分子,其温度系数为1.15(30—40℃)。     

甘蔗多酚氧化酶酶学特性及应用研究

对甘蔗多酚氧化酶(PPO)进行提取和部分纯化,研究了PPO的酶学特性.结果表明:以邻苯二酚为底物,甘蔗PPO酶促反应米氏常数Km为54.4 mmol/L,米氏方程:V=1250[S]/(54.4+[S]).蔗汁中邻位多酚类物质是甘蔗PPO的最适反应底物.最适反应条件为:pH值6.2,40℃;该酶在pH5.8和温度低于3℃0时较稳定.试验了6种甘蔗PPO抑制剂:单独使用柠檬酸、草酸、乙二胺四乙酸(EDTA)对PPO活力抑制效果不明显;70 mg/L亚硫酸氢钠、110 mg/L抗坏血酸、120 mg/L硫代硫酸钠可完全抑制PPO活力.现行甘蔗提汁的浸渗工艺较适合蔗汁酶促褐变反应,应作相应的调整.     

黑曲霉糖化酶的纯化及特性鉴定

采用硫酸铵高饱和度一步沉淀,Sephadex G-25脱盐,DEAE—Toyopearl离子交换层析,Sepharose S—100 HR凝胶过滤法,从黑曲霉糖化酶粗酶液中纯化出电泳均一的糖化酶。其分子量为73～75Kd,等电点为pH3.3,最适pH为4.2,最适反应温度为60℃,对可溶性淀粉的K_m值为7.56。该糖化酶的含糖量为17.9％,此外还测定了其氨基酸组成及含量。     

偶联酶法检验L-天冬酰胺酶的动力学分析

根据McClure偶联酶反应理论,通过实验对偶联酶法检验L-天冬酰胺酶活力的反应条件进行了动力学分析,确定了合理的附加酶用量,建立了偶联酶法检验此酶活力程序。用该程序测定的底物K_m值和产物的抑制常数K_1值与文献值相符。     

葡萄糖与果糖异构化的酶反应动力学 Ⅰ.实效动力学参数的测求

用国产异构化酶在固定床中研究了D-葡萄糖与D-果糖异构化反应动力学。利用米氏方程测定了60～75℃下正、逆异构化反应的米氏常数、最大反应速度与各机理反应的活化能、指前因子以及相对的速度常数等实效动力学参数与酶中间物的离解常数。利用计算标准摩尔反应焓与预测反应初期产物浓度对测求的实效动力学参数给以验证,计算值与实验值取得很好的吻合。     

反胶团体系中酶催化蔗糖水解反应动力学研究

反胶团体系是由表面活性剂和有机溶剂形成的非水体系。在由正戊醇－十六烷基三甲基法律顾问化铵（ＣＴＡＢ）－异辛烷组成的反胶团体系中,对酶催化蔗糖水解反应动力学进行了初步研究,制作了反应进程曲线,测定了最佳ｐＨ条件、酶浓度对反应速度的影响以及米氏常数。结果符合米氏理论,证明了酶催化反应在反胶团体系中可顺利进行。     

文昌鱼酸性磷酸酶的分离提纯及其性质的初步研究

从厦门文昌鱼Branchiostoma belcheri(Gray)体内部分提纯一种酸性磷酸酶制剂。酶液比活力6.467μmole/mg prot/30min,提纯47倍,以等电聚焦法测其等电点为pH4.05。该酶在醋酸盐缓冲系统(37℃)中,以苯磷酸二钠为底物,测得最适pH4.5,K_m值为1.25×10~(-3)M(以对硝基苯磷酸二纳为底物测得最适pH4.5,K_m值为2.08×10~(-4)M)。pH影响K_m值而不影响V_(max),表现为竞争性类型。在不同温度条件下,测其活化能为9.15千卡/克分子。F~-,Hg~(2+),Mo~(6+)表现不同的抑制,PCMB终浓度为5×10~4M时酶活力下降70％。     

球孢白僵菌017壳聚糖酶的研究I酶制剂的基本特征

球孢白僵菌017突变菌株(Beauveria bassiana 017)在CTN培养基(含0.2～1％壳聚糖,0.075％KH_2PO_4,0.05％MgSO_4,0.05％NaCl,0.001％FeSO_4,0.3％KNO_3,0,1％牛肉膏,pH5.0)中,20～30℃,200r·p·m振荡培养7天,可以分泌大量的胞外壳聚糖酶,对底物水解的最适温度为45～50℃,最适pH值为3.8～4.0。K_m值和V_(max)分别为2.17×10~(-6)M和0.45μmol/min,60℃保温1小时,剩余酶活性为10％,Ca~(2+),Mn~(2+)和Mg~(2+)对酶有激活作用,Cu~(2+)和Fe~(3+)对酶有部分抑制作用,Hg~(2+)和Ag~+则强烈抑制酶的活性。     

应用摩尔比法和连续变化法研究混合溶液中形成沉淀的组成

应用摩尔比法确定混合溶液中形成沉淀的组成,和Asmus的等摩尔连续变化方法得到一致的结果.方法较简便些,不需特殊的设备,在一般实验条件下,即可确定溶液中形成沉淀的组成.本文对实验原理、方法、数据处理和实验图形进行了解释和讨论.     

固定化青霉素酰化酶动力学参数测定

本文介绍一种测定固定化酶催化反应动力学参数的新方法。在纤维间扩散阻力和外扩散阻力存在下,改变底物输送流速,测定纤维状固定化酶的一系列对应反应初速度;用双倒数图和Dixon图分别求各种流速下的表观米氏常数(K_m~(?))和表观产物抑制常数,再用所求得的各种表观动力学参数与对应的底物输入酶柱的线速度倒数的线性关系式,两次图解求得本征动力学参数。采用这一方法求得纤维状固定化青霉素酰化酶催化重排酸水解的本征米氏常数(K_m)、产物7-ADCA和苯乙酸抑制常数的本征值(K_p,K_q)分别为6.9,16.8和94.4mmol/L。     

处理污凝水的研究

通过静态实验研究，证明了某硫酸盐纸浆厂污冷凝水的可厌氧降解性；发现了污冷凝水中有机物降解速率与其浓度的一次方成正比，速率常数Ｋｍ为０．２４ｈ~（－１），在１７Ｌ的ＵＡＳＢ反应器内对此废水进行了动态厌氧处理研究，结果表明，ＣＯＤ去除率可达７２％～８５％，还发现了反应器中有颗粒污泥出现．     

牛小肠碱性磷酸酶部分性质研究

摘要：用正丁醇抽提、硫酸铵分级沉淀、EAE-32柱层析和Sephadex G-150 凝胶过滤,从牛小肠中分离纯化出牛小肠碱性磷酸酶（BIAP）.提纯倍数为50.69,比活力为48.87U/mg蛋白.酶液经SDS-PAGE呈现单一条带,且不含DNA核酸酶.该酶催化对硝基苯磷酸二钠（p-NPP）水解反应的最适pH值为9.7,pH小于6.5大于11.5均不稳定;最适温度为45℃,高于50℃不稳定.Km值为0.29mmol/L.45℃,pH9.7时最大反应速度（Vmax）为4.6μmol/(L•min).利用SDS-PAGE测定酶亚基的分子量为66KD. Mg2+、Mn2+和Ca2+对酶有不同程度的激活作用,Zn2+和EDTA对酶有抑制作用。随着Mg2+、Zn2+和EDTA浓度增加,270nm处紫外吸收值增加.     

微量热法研究酪氨酸酶催化氧化反应

在恒温条件下从嗜麦芽假单胞菌中获得酪氨酸酶 ,利用微量热法测定了酪氨酸酶催化氧化酪氨酸反应的动力学性质 ,并得出该反应符合Michaelis -Menten动力学的结论。该方法不需要将酶提纯 ,可以原位测定酶的活性。     

植酸钛纳米材料固定酶制备过氧化氢传感器

利用植酸盐分子中磷酸基团与部分金属离子的强络合能力,通过微波合成法合成植酸钛纳米材料,并运用这种材料结合混合滴涂的方法将辣根过氧化物酶成功修饰到玻碳电极表面.运用紫外-可见光谱和电化学,实验结果证明了这种材料具有良好的生物相容性,有利于防止酶在固定化过程中生物活性的损害.此法制备的生物传感器实现了辣根过氧化物酶(HRP)和玻碳电极之间的直接电子转移,且对过氧化氢呈现出良好的催化还原作用,对H2O2检测的响应电流线性范围是6.67×10-7~4.73×10-5mol·L-1,线性相关系数R=0.9988(n=20),检测限为4.0×10-7mol·L-1(S/N=3),米氏常数(Kapp M)为0.036 mmol·L-1.所制得的生物传感器呈现出良好的重现性和稳定性.     

酪氨酸酶催化的3,4二羟基苯基丙氨酸氧化反应的动力学分析

对酪氨酸酶催化的3，4二羟基苯基丙氨酸氧化反应进行了动力学分析．用L—DOPA和D—DOPA作为底物，对底物浓度和反应速度测量的结果用Lineweaver—Burk法作图，根据计算所得的米氏常数（Km）表明此酪氨酸酶对L—DOPA表现出更高的亲和性，而催化反应的效率也更高．     

离子液体中6-O-(11-十二烯酸)葡萄糖酯的脂肪酶催化合成及其表征

为了探索脂肪酶在离子液体中选择性地催化葡萄糖与11-十二烯酸乙酯的转酯化反应,通过不同脂肪酶在不同离子液体中进行转酯化反应,并用单因素法研究离子液体种类、温度、底物的比例、体系含水量和脂肪酶含量对反应产率的影响,优化反应条件。反应产物的结构通过红外光谱、高效液相色谱、质谱和核磁共振等表征。结果表明:脂肪酶Novozym-435在离子液体1-正丁基-3-甲基咪唑氟硼酸盐[BMIM][BF4]中,当反应温度为55℃、酶浓度20mg/mL、葡萄糖/11-十二烯酸乙酯的摩尔比1∶2、体系的水含量为2%时,获得糖酯的产率最高,Novozym-435可以重复使用7次。脂肪酶Novozym-435在离子液体[BMIM][BF4]中选择性转酯化反应的产物为6-O-(11-十二烯酸)葡萄糖单酯。     

草鱼饲料的酶学基础研究

以BANA为废物,对草鱼胰蛋白酶最适温度、最适pH以及K_m与V_(max)进行了研究,并对这些因素与饲料的关系进行了探讨。