用Asmus法测K_m值

在酶的动力学研究中,K_m能看作为表观电离常数,它在生物化学中是用米氏方程测定,只要酶和底物结合生成一个有色中间络合物,则K_m能用Asmus法测定,本文在酪氨酸酶催化多巴的反应中,用Asmus法计算K_m值,其结果与米氏方程式相一致。     

PNP酶固定化技术探讨

本研究采用活化CH-Sepharose 4B固定化PNP酶,发现其表现米氏常数K_m=5.13×10~(-3)mol/l,比游离酶增大(游离酶K_m=4.44×10~(-3)mol/l);固定化酶和游离酶的最适pH分别为9.6和9.0,固定化后,其酶的稳定性明显提高,半衰期为七个半月。用此酶催化聚合而成的PolyC和PolyI的分子量分别大于5S和9S。     

文昌鱼碱性磷酸酶的动力学初步研究

从厦门文昌鱼中部份提纯一种碱性磷酸酶,并对该酶作用的动力学进行了初步的研究。该酶作用于底物磷酸苯二钠的最适pH为10.1,最适温度为40℃,测得其米氏常数值(K_m)为1.1×10~(-3)M,pH影响K_m值而不影响最大反应速度(V),表现为竞争性类型。Mg~( )有明显的激活作用,而Zn~( ),EDTA,DFP,ME及PCMB等在一定浓度范围内,表现为非竞争抑制类型。ME的抑制作用表明硫硫键是维持酶活力所必需的。从pH对酶的活力影响,测得有关酶活性基团解离的pK值为9.82,在不同温度条件下,测得该酶的活化能为3.16仟卡/克分子,其温度系数为1.15(30—40℃)。     

甘蔗多酚氧化酶酶学特性及应用研究

对甘蔗多酚氧化酶(PPO)进行提取和部分纯化,研究了PPO的酶学特性.结果表明:以邻苯二酚为底物,甘蔗PPO酶促反应米氏常数Km为54.4 mmol/L,米氏方程:V=1250[S]/(54.4+[S]).蔗汁中邻位多酚类物质是甘蔗PPO的最适反应底物.最适反应条件为:pH值6.2,40℃;该酶在pH5.8和温度低于3℃0时较稳定.试验了6种甘蔗PPO抑制剂:单独使用柠檬酸、草酸、乙二胺四乙酸(EDTA)对PPO活力抑制效果不明显;70 mg/L亚硫酸氢钠、110 mg/L抗坏血酸、120 mg/L硫代硫酸钠可完全抑制PPO活力.现行甘蔗提汁的浸渗工艺较适合蔗汁酶促褐变反应,应作相应的调整.     

黑曲霉糖化酶的纯化及特性鉴定

采用硫酸铵高饱和度一步沉淀,Sephadex G-25脱盐,DEAE—Toyopearl离子交换层析,Sepharose S—100 HR凝胶过滤法,从黑曲霉糖化酶粗酶液中纯化出电泳均一的糖化酶。其分子量为73～75Kd,等电点为pH3.3,最适pH为4.2,最适反应温度为60℃,对可溶性淀粉的K_m值为7.56。该糖化酶的含糖量为17.9％,此外还测定了其氨基酸组成及含量。     

偶联酶法检验L-天冬酰胺酶的动力学分析

根据McClure偶联酶反应理论,通过实验对偶联酶法检验L-天冬酰胺酶活力的反应条件进行了动力学分析,确定了合理的附加酶用量,建立了偶联酶法检验此酶活力程序。用该程序测定的底物K_m值和产物的抑制常数K_1值与文献值相符。     

葡萄糖与果糖异构化的酶反应动力学 Ⅰ.实效动力学参数的测求

用国产异构化酶在固定床中研究了D-葡萄糖与D-果糖异构化反应动力学。利用米氏方程测定了60～75℃下正、逆异构化反应的米氏常数、最大反应速度与各机理反应的活化能、指前因子以及相对的速度常数等实效动力学参数与酶中间物的离解常数。利用计算标准摩尔反应焓与预测反应初期产物浓度对测求的实效动力学参数给以验证,计算值与实验值取得很好的吻合。     

反胶团体系中酶催化蔗糖水解反应动力学研究

反胶团体系是由表面活性剂和有机溶剂形成的非水体系。在由正戊醇－十六烷基三甲基法律顾问化铵（ＣＴＡＢ）－异辛烷组成的反胶团体系中,对酶催化蔗糖水解反应动力学进行了初步研究,制作了反应进程曲线,测定了最佳ｐＨ条件、酶浓度对反应速度的影响以及米氏常数。结果符合米氏理论,证明了酶催化反应在反胶团体系中可顺利进行。     

文昌鱼酸性磷酸酶的分离提纯及其性质的初步研究

从厦门文昌鱼Branchiostoma belcheri(Gray)体内部分提纯一种酸性磷酸酶制剂。酶液比活力6.467μmole/mg prot/30min,提纯47倍,以等电聚焦法测其等电点为pH4.05。该酶在醋酸盐缓冲系统(37℃)中,以苯磷酸二钠为底物,测得最适pH4.5,K_m值为1.25×10~(-3)M(以对硝基苯磷酸二纳为底物测得最适pH4.5,K_m值为2.08×10~(-4)M)。pH影响K_m值而不影响V_(max),表现为竞争性类型。在不同温度条件下,测其活化能为9.15千卡/克分子。F~-,Hg~(2+),Mo~(6+)表现不同的抑制,PCMB终浓度为5×10~4M时酶活力下降70％。     

球孢白僵菌017壳聚糖酶的研究I酶制剂的基本特征

球孢白僵菌017突变菌株(Beauveria bassiana 017)在CTN培养基(含0.2～1％壳聚糖,0.075％KH_2PO_4,0.05％MgSO_4,0.05％NaCl,0.001％FeSO_4,0.3％KNO_3,0,1％牛肉膏,pH5.0)中,20～30℃,200r·p·m振荡培养7天,可以分泌大量的胞外壳聚糖酶,对底物水解的最适温度为45～50℃,最适pH值为3.8～4.0。K_m值和V_(max)分别为2.17×10~(-6)M和0.45μmol/min,60℃保温1小时,剩余酶活性为10％,Ca~(2+),Mn~(2+)和Mg~(2+)对酶有激活作用,Cu~(2+)和Fe~(3+)对酶有部分抑制作用,Hg~(2+)和Ag~+则强烈抑制酶的活性。     

锌离子对酶法测定抑制作用的研究

基于乳酸脱氢酶(LDH)催化乳酸和氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)的反应,在最佳酶反应条件下,研究了金属离子对酶催化的抑制作用.发现Zn2 对LDH的酶促反应有显著的抑制,抑制常数KQS为13mmol/L,属非竞争性抑制.根据在抑制剂作用下的米氏方程,可以利用酶法对锌离子进行定量测定.通过加入金属离子络合剂乙二胺四乙酸(EDTA)进行了干扰消除实验,结果表明:可有效消除一定浓度的Zn2 对LDH酶促反应测定底物的干扰.     

酶促反应动力学米氏常数的意义及在体育中的应用

西方探讨米氏常数对酶研究的重要意义及酶促动力学在体育教学,训练中的应用。     

鸡肝碱性磷酸酶提取及在线固定化研究

分别用有机溶剂沉淀法和盐析法从大骨鸡肝中提取出碱性磷酸酶,并考察了提取酶液的酶促反应动力学性质.在此基础上,利用顺序注射系统将提取酶在线固定于XC—72导电炭黑表面,制备了固定化碱性磷酸酶.结果表明,大骨鸡肝碱性磷酸酶催化磷酸苯二钠分解的最佳pH=10.8,最适温度为50℃,米氏常数为1.62 mmol/L.相比游离酶,所得固定化酶的比活力显著提高.     

磁场影响枯草杆菌蛋白酶催化活性的研究

以DHT一酪蛋白为底物用分光光度法研究了磁场对枯草杆菌蛋白酶催化活性的影响。磁场分别作用于酶液,底物溶液均能不同程度地提高酶的催化活性,磁场作用时间和作用时的温度也对酶的催化活性有影响,磁场并不改变酶促反应的米氏常数Km,Vmax则有不同程度地增加。     

静磁场对猪胰脏脂肪酶催化活性和结构的影响研究

将来源于猪胰脏的脂肪酶置于0.45 T强度的静磁场中,在不同温度、不同p H值条件下测定脂肪酶的催化活性,并且对米氏常数、酶蛋白二次结构进行测定,探索低成本方法以提高生物酶的催化活性.实验发现,在磁场存在的情况下,磁化2 h后的脂肪酶的催化活性明显提高.脂肪酶的最佳反应温度和最佳p H值没有因为磁化处理而改变.米氏常数Km和酶促反应最大速度Vmax均发生变化,磁化处理后的酶催化效率高于空白对照组.脂肪酶的构象在经过磁场处理后发生明显变化.     

双波长分光光度法同时测定微量金和银的研究

本文提出用硫代米氏酮(TMK)双波长分光光度法同时测定金和银的新方法。该法选择性。灵敏度及稳定性均较好,对Au(111)和Ag(1)的表观摩尔吸光系数分别为,同时在0—60.0μgAu/25ml和0—8.1μgAg/25ml范围内符合比耳定律。     

CTAB对血红蛋白仿过氧化物酶催化活性的影响

本文研究了表面活性剂介质存在下,血红蛋白作为过氧化物模拟酶,以邻苯二酚供氢体底物的催化特性和反应条件,并探讨了表面活性剂对酶催化反应的影响及可能机理,稳态速率法测定了米氏常数（Km）、米氏速率（Vm）及反应级数等动力学参数。试验表明本体系在阳离子表面活性剂CTAB存在和pH10.3的条件下形成的产物在258nm处有最大的吸收峰。     

多酚氧化酶在逆向胶团中的动力学性质与稳定性

本文研究了马铃薯多酚氧化酶在AOT/正己烷和Triton Χ-100/环己烷-正丁醇两种逆向胶团中的动力学性质和稳定性。研究表明,酶在AOT/正己烷中有较高的活性和很低的稳定性,而在Triton Χ-100/环己烷-正丁醇中有较低的活性和较高的稳定性。酶的活性和稳定性与胶团中水的体积分数（θ）相关。其动力学常数K_m则与水相接近。     

固定化青霉素酰化酶动力学参数测定

本文介绍一种测定固定化酶催化反应动力学参数的新方法。在纤维间扩散阻力和外扩散阻力存在下,改变底物输送流速,测定纤维状固定化酶的一系列对应反应初速度;用双倒数图和Dixon图分别求各种流速下的表观米氏常数(K_m~(?))和表观产物抑制常数,再用所求得的各种表观动力学参数与对应的底物输入酶柱的线速度倒数的线性关系式,两次图解求得本征动力学参数。采用这一方法求得纤维状固定化青霉素酰化酶催化重排酸水解的本征米氏常数(K_m)、产物7-ADCA和苯乙酸抑制常数的本征值(K_p,K_q)分别为6.9,16.8和94.4mmol/L。     

包衣酶在油/水两相体系中催化水解橄榄油反应

用合成的谷氨酸十二烷基酯核糖醇对来源于Candidarugosa的脂肪酶包衣后在油/水两相体系中水解橄榄油为反应模型.确定了最佳水油比范围为1～3,最适pH值为7.0左右,温度为30℃,油相有机溶剂为异辛烷.包衣酶的最大活性达到48.8mmol·min-1·g-1蛋白质,是天然酶活性的1.8倍.对底物选择性研究表明:包衣酶和天然酶的最适底物均为橄榄油,酰基链越长,酶活越高.包衣酶的米氏常数只有天然酶的一半,最大反应速度是天然酶的1.4倍.