酿酒酵母中D-(-)-扁桃酸脱氢酶性质研究

采用DEAE Sepharose离子交换层析、Butyl Sepharose疏水层析和Blue Sepharose亲和层析等分离方法,从高产D-(-)-扁桃酸的酵母菌株BY1.1b中纯化得到电泳纯的D-(-)-扁桃酸脱氢酶.采用Sephacryl S-200分子筛层析柱测得该酶的相对分子质量约60 kDa,用SDS-PAGE电泳测得该酶亚基分子量为32 kDa,表明该酶属于同型二聚体.该酶的最适反应温度为30℃,最适反应pH为6.0.该酶在低于30℃,pH5.5~8.0较为稳定.以NADH和苯乙酮酸为底物,其Km值分别为Km(NADH)=99.2μmol/L和Km(苯乙酮酸)=263.3μmol/L.     

香葱凝集素的分离纯化及其部分性质的研究

香葱叶片经生理盐水抽提、硫酸铵沉淀、Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－７５和Ｂｏ－ＧｅｌＰ－３０柱层析分离得到香葱凝集素。该凝集经聚丙烯酰胺凝胶电泳、糖蛋白色均显示单一条带。ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳测得两条带相对分子质量分别为２９０００和２３０００，表明该凝集素是由两个不同的亚基组成。     

硫酸软骨素酶的分离纯化及部分性质

通过细胞破碎、硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose FF和Sephacryl S-200柱层析，首次从粘质沙雷氏菌中提取出硫酸软骨素酶.纯化倍数11.46,比活为81.23 U/mg蛋白.提取液经PAGE和SDS-PAGE检测，呈现一条带.该酶相对分子质量为71.2 KD,亚基分子质量为35 KD,该酶为2个相同亚基组成.等电点为7.19，最适pH值7.5，最适温度为40 ℃，以4-硫酸软骨素为底物测得Km值为3.98×10^-4 mol/L.     

花椰菜凝集素的纯化及部分性质的研究

花椰菜凝集素由花蕊组织经生理盐水抽提、硫酸铵沉淀和ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００、Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ－４Ｂ凝胶层析纯化获得．ＰＡＧＥ鉴定和高碘酸－Ｓｃｈｉｆｆ试剂反应均显单一条带，说明该凝集素为纯化的糖蛋白．经ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２００柱过滤分析，其相对分子质量约为９４０００．ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析表明该凝集素含有４个亚基，其相对分子质量分别约为２８０００、２５０００、２２０００和２００００．花椰菜凝集素经５０℃处理５分钟仍保持高的凝集活性，该凝集素对酸处理较碱处理稳定．     

嗜热厌氧乙醇菌JW200中乙醛脱氢酶的纯化

研究了嗜热厌氧乙醇菌(Thermoanaerobacter ethanolicus)JW200中乙醇代谢途径的关键酶之一乙酰CoA依赖型的乙醛脱氢酶(acetaldehyde dehydrogenase, ALDH, EC 1.2.1.10)的纯化.结果表明,经DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换层析、两次为30%与80%硫酸铵盐析和相应盐浓度的Butyl-HIC疏水层析、TOYOPEARL HW-55F分子筛层析等提纯步骤,可得到电泳纯的ALDH,其提纯倍数为910倍,得率为7%.由SDS-PAGE和梯度PAGE测得全酶由4个亚基组成,全酶相对分子质量为360 000,亚基相对分子质量为100 000.     

一种与核黄素合酶α亚基具有结构相似性的板蓝根多肽的分离纯化与表征

利用离子交换色谱SP-5PW和疏水色谱POROS HP2从板蓝根鲜根水相抽提物中分离纯化多肽组分,并对其进行生化表征.获得一种达到电泳纯的多肽RIP2,其相对分子质量约为6.87 ku,等电点约为7.73,N端氨基酸序列依次为QIGEFATAPF.经数据库搜索比对,发现该多肽与核黄素合酶α亚基具有一定的同源性.细胞毒性实验表明该多肽具有一定抗病毒作用.     

产朊圆酵母尿酸酶的分离纯化及其部分性质研究

产朊圆酵母Y0401经尿酸诱导培养,菌体采用超声波处理,依次经过DEAE-Sepharose离子交换层析、Phenyl Sepharose CL-4B疏水层析和Xanthine-agarose亲和层析,尿酸酶比活力达到18U/mg,纯化倍数为409倍,回收率为19.2%.纯化后的酶经还原、非还原SDS-PAGE分析为单一蛋白染色带,HPLC显示纯度为98%以上.用HPLC和Superdex 200分子筛层析两种方法测得该酶的相对分子质量为127kDa,在还原条件下进行SDS-PAGE,测得表观分子质量为33kDa,综上结果推测该酶是由分子量相同的4个亚基组成的四聚体蛋白.等电聚焦显示其等电点在6.8~7.5之间.该酶具有较强的酸碱稳定性和热稳定性.最适pH为8.5,最适温度为40.0℃.在最适pH和温度条件下测得该酶Km值为3.34×10-5mol/L.对某些金属离子和有机物对酶活性的影响也进行了研究.     

豇豆幼叶多胺氧化酶的分离纯化

依次经粗提、φ为３５ ％ ～６０％ 硫酸铵分步沉淀、φ为７０ ％ 丙酮沉淀、ＤＥＡＥＣｅｌｌｕｌｏｓｅ柱层析、Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ Ｃｌ４Ｂ柱层析和羟基磷灰石柱层析等步骤后首次从豇豆幼叶得到电泳均一的、亚基相对分子质量约为７０ ０００ 的多胺氧化酶． 纯化倍数为４７３３, 产率为１３１ ％ ． 该酶在０１ ｍｏｌ／ＬＰＢＳ（ｐＨ７０ ～７５） 中较为稳定, 冷冻（ － １５ ℃） 贮存则可保持２０ ｄ 内不失活     

韭菜凝集素的纯化及部分性质的研究

用葡聚糖凝胶柱层析法从韭菜的叶片组织分离出一种对新鲜兔红细胞有强烈凝集作用的凝集素，ＰＡＧＥ鉴定和高碘酸－Ｓｃｈｉｆｆ试剂反应均显单一条带。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析表明该凝集素含有３个亚基，其相对分子质量分别约为３１０００、２４０００和２１０００。韭菜凝集素具有一定的热稳定性，在酸、碱处理中该凝集素对碱处理较酸处理稳定，氨基酸组成分析表明韭菜凝集素含有１４种氨基酸，其中半胱氨酸含量较高。     

枯草杆菌6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶的分离纯化及部分性质研究

采用DEAE—Sephaurose离子交换层析，Blue-Seplaarose CL-6B特异结合层析和Sephadex G-200凝胶过滤技术，对枯草芽孢杆菌中的6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶进行了分离纯化，纯化倍数为112．3倍，比活为1．46U／mg，回收率为8．2％，纯化酶液经聚丙烯酰胺凝胶电泳检验为单一带，测得全酶相对分子质量为107kD，具有两个分子量相同的亚基，亚基相对分子质量为51kD，最适pH值为8．0，最适温度为30℃，对热不稳定，以6-磷酸葡萄糖酸和NADP^ 为底物，其Km值分别为Km1(NADP^ )=19．8μmol／L和Km2(6-GPA)=22．6μmol／L，在5mmol／L～50mmol／L浓度范围内，Mg^ ，Ca^2 和Mn^2 对酶有激活作用，Fe^3 和Cu^2 对酶有抑制作用，K^ ，Na^ ，Cl^-，NO^-3，SO^-4对酶几乎没有影响，用PMSF，TNBS，NBS，DTT和BrAc对酶进行修饰，实验结果表明，丝氨酸、苏氨酸、赖氨酸和组氨酸残基可能是该酶活性中心的功能基团。     

北京鸭红细胞超氧化物歧化酶—分离纯化和性质

采用氯仿—乙醇分级分离,丙酮沉淀以及DE-32纤维素柱层析的方法,从北京鸭红细胞中分离得到纯的铜锌超氧化物歧化酶(Cu·Zn-SOD)。4升鸭血红细胞的SOD制品总活力为375,400u,比活力为13,410u/mg蛋白,回收率为64％。 铜锌超氧化物歧化酶制品呈淡蓝绿色,最大紫外吸收波长为258nm。测得该酶分子量为32,000,亚基分子量为16,000。该酶亚基由150个氨基酸残基组成,不含色氨酸,并测得它的N—末端氨基酸为丙氨酸。     

黄鳝超氧化物歧化酶的纯化和部分性质研究

黄鳝超氧化物歧化酶粗酶液，经过正丁醇脱脂，丙酮分级沉淀，DEAE-琼脂糖离子交换层析和Sephacryl S-200凝胶过滤，从黄鳝中分离纯化获得铁超氧化物歧化酶(Fe-SOD)，并对其性质进行研究，最终该酶的比活力为1500U／mg，提纯倍数为368．5．回收率为24．7％．该酶对KCN不敏感．而对H2O2敏感，对热较稳定，对酸碱有较强的耐受性，抗胃蛋白酶的破坏，聚丙烯酰胺凝胶电泳和等电点聚焦电泳结果表明：纯化酶蛋白呈一条带，酶分子量约为85kD，亚基分子量约为16．5kD，等电点为7．15。     

植物苯丙氨酸解氨酶的研究——Ⅱ 鹰嘴豆、无壳葫芦籽苯丙氨酸解氨酶的亲和层析纯化及其部分性质研究

鹰嘴豆和无壳葫芦籽黄化苗中苯丙氨酸银氨酶(PAL)经亲和层析纯化,聚丙烯酸胺凝胶电泳和SDS—FAGE鉴定均为一条蛋白带,用SDS-PAGE测得鹰嘴豆和无壳葫芦籽PAL亚基分子量分别为55000和74000。Sephadex G—200凝胶过滤法测得鹰嘴豆和无壳葫芦籽PAL分子量分别为205 000和280 000。表明这2科植物PAL均由分子量相同的4个亚基构成。     

人绒毛膜促性腺激素的纯化及其对小鼠脾细胞产生CSFs的诱导作用

HCG 粗品(10Iu/mg)经乙醇抽提,Sephadex G-100和 SE-Sephadex C-50凝胶过滤后,纯化了800倍,免疫活性达8370Iu/mg.经 SDS-PAGE 鉴定 HCG 的两亚基分子量分别为17000和32000.用纯化的 HCG 制备具有较高滴度的抗 HCG 抗血清.通过软琼脂培养法观察了 HCG 诱导小鼠脾细胞产生 CSFs 的影响,结果表明 HCG 浓度为400Iu/mg时,诱导效应最大。时间依赖曲线以72小时的 CSFs 活力最高.HCG 的诱导作用可以被抗HCG 抗血清完全中和。     

SrFeO3-δ纳/微米纤维的制备及其磁性

利用静电纺丝法与溶胶 凝胶技术, 制备PVP/Sr(OOCCH₃)₂·0.5H₂OC₁₅H₂₁FeO₆复合纳米纤维, 热处理后得到了SrFeO_3-δ纳/微米纤维, 并采用X射线衍射（XRD）、 扫描电镜（SEM）、 透射电镜（TEM）和超导量子干涉仪磁强计（SQUID）研究纤维样品的晶体结构、 微观形貌及其磁性. 实验结果表明： PVP/Sr(OOCCH₃)₂·0.5H₂OC₁₅H₂₁FeO₆复合纤维表面光滑, 长直连续, 平均直径约为500 nm; 在空气气氛下, 经800 ℃焙烧2 h后得到的SrFeO_3-δ纳/微米纤维均为较纯的立方钙钛矿型结构, 平均晶粒尺寸约为32 nm, 纤维直径为260~480 nm, 平均直径约为400 nm, 具有较大长径比; 当温度为175 ℃时, SrFeO_3-δ纤维样品的磁化率有极大值, 磁性纳米效应的影响及SrFeO_3-δ中螺旋反铁磁有序性、 顺磁性和铁磁性的共同作用使得纤维样品与块体样品的磁学性能不同, 其Neel温度与Curie温度均升高.     

嗜甲基菌DM11菌株的二氯甲烷脱卤素酶是二聚体蛋白

经ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳测定,嗜甲基菌ＤＭ１１菌株二氯甲烷脱卤素酶的亚基分子量为３１０００。通过沉降平衡超离心分析和凝胶过滤色谱分析证明,上述脱素酶的天然酶的分子量分别是６５８００和６３５００。这些结果表明,ＤＭ１１菌株的二氯甲烷脱卤素酶是二聚体蛋白。     

蛹虫草发酵产物新纤溶酶的分离纯化

笔者所在项目组的前期研究发现,蛹虫草深层培养可以产生至少两种纤溶酶.基于此,文中对蛹虫草深层培养产生的纤溶酶的分离纯化展开了研究.采用硫酸铵盐析、Sephadex G-25凝胶色谱、Phenyl-Sepharose HP疏水相互作用色谱、CM-Sepharose FF弱阳离子交换色谱和Superdex 75凝胶色谱对纤溶酶进行分离.最终纯化后的纤溶酶Ⅰ比活力达1467.44U/mg,纯化倍数为36.07,回收率为5.79%.纤溶酶Ⅱ比活力达1681.58U/mg,纯化倍数为41.33,回收率为4.00%.两种纤溶酶经电泳鉴定均达到电泳纯,相对分子质量分别约为28000和32000.     

佳辐占和广陆矮4号水稻叶片蛋白质的双向电泳比较研究

应用双向电泳技术研究比较两种不同品质水稻(佳辐占和广陆矮4号)叶片的蛋白质组分的差异.两种水稻叶片提取的蛋白质的双向电泳图谱斑点清晰,形态规则.采用考马斯亮蓝染色获得约400个斑点,银染图谱约800个斑点.两种水稻的蛋白质图谱考马斯亮蓝染色图谱存在5个显著差异点,银染图谱存在11个显著差异点.     

一种低温锆弱凝胶调剖剂的研制

针对温度低于50℃的高含水油藏,研制出了一种聚合物/有机锆弱凝胶调剖剂.该调剖剂以部分水解聚丙烯酰胺(HPAM)为主剂,以自制有机锆YJ-1为交联剂,在35～50℃温度下能形成稳定的弱凝胶.该弱凝胶调剖剂配方为:800～1 500 mg/L HPAM,500～1 000 mg/L有机锆YJ-1交联剂,500～800 mg/L稳定剂.该体系适合的矿化度在50 000 mg/L以下,pH值4～9.该调剖剂成胶时间和凝胶黏度可调,岩心封堵率大于96%.