胰岛自身抗原GAD65片段和胰岛素B链基因共表达DNA疫苗的构建与表达

构建两种胰岛自身抗原谷氨酸脱羧酶（ glutamic acid decarboxylase, GAD） 65片段与胰岛素B链基因共表达DNA疫苗,并检测其在体外COS-7细胞中的表达。PCR方法从GAD65质粒中扩增出GAD190-385和GAD490-570两个片段的cDNA,overlap法再分别与信号肽基因进行拼接,将拼接后的融合基因SGAD190-515和SGAD490-570分别与胰岛素B链基因依次克隆入双启动子真核表达载体pBudCFA．1中。重组质粒经酶切和测序鉴定后,脂质体体外转染COS-7细胞,Western blot方法检测目的基因在该细胞中的表达。结果表明核酸序列测定克隆的融合基因和胰岛素B链基因序列与报告序列一致,开放阅读框正确,Western blot显示转染了DNA疫苗的COS-7细胞中均可检测两个目的基因的表达。两种GAD65片段与胰岛素B链基因共表达DNA疫苗均成功构建,为自身免疫糖尿病的免疫干预研究奠定了实验基础。     

DNA疫苗经基因枪介导的免疫研究

将基因枪介导的DNA疫苗用于小鼠腹部免疫,并用免疫组化法检测gD抗原在接种部位的表达,利用ELISA检测血清中的抗gD抗体,并采用病毒攻击检测DNA疫苗对动物的保护效果。结果表明,基因枪可有效地将DNA质粒运送至小鼠皮肤组织,DNA疫苗携带的抗原保护基因gD2糖蛋白能在真皮和肌肉组织中高效表达。同时,免疫小鼠体内产生高滴度的中和抗体,能有效抵抗HSV2病毒的攻击。     

核酸疫苗研制的最新研究进展

;核酸疫苗是才发展起来的一种新型疫苗,不仅有预防疾病的作用,同时还具有治疗疾病的作用。因其高效、持久、广谱、简便、廉价、无致病性等特点得到广泛的研究与应用,现今,病毒感染性疾病的核酸疫苗、非病毒微生物感染性疾病的核酸疫苗、寄生虫核酸疫苗、肿瘤核酸疫苗等多种核酸疫苗都有了相关的开发和应用。尽管核酸疫苗有许多传统疫苗无可比拟的优点,但在理论分析和实际应用上仍有许多问题等待解决。笔者对核酸疫苗的概念、种类、优缺点、最新研究进展、发展前景进行了综述。     

IL-2与猪瘟病毒E_2基因真核双表达载体的构建及其免疫增强作用的研究

应用DNA重组技术构建了猪瘟病毒E2 基因与IL 2基因的双表达真核表达载体 ,观察其表达水平 ,并对其免疫增强效果进行了观察。结果是构建了猪瘟病毒E2 基因与白细胞介素 2的真核表达质粒pIRSTIL 2。将质粒转染BHK 2 1细胞 ,可在体外表达E2 和有生物活性IL 2。pIRSTIL 2质粒能诱导产生CSFV的特异性免疫反应。pIRSTIL 2所诱导的免疫应答反应比使用单表达质粒pIRST强。实验表明 :IL 2与猪瘟病毒E2 基因构建的双表达基因疫苗能有效提高基因疫苗的免疫效果     

鱼用核酸疫苗研究进展

核酸疫苗是20世纪90年代初发展起来的一种新型疫苗。虽然目前核酸疫苗的研究还处于试验阶段,却体现出巨大的优越性和应用前景。就核酸疫苗的作用机理、鱼用核酸疫苗的构建、接种的方法和途径、免疫效果以及安全性问题的研究作了概括。     

人胰岛素原DNA疫苗的构建与鉴定

构建1型糖尿病关键自身抗原胰岛素原（Proinsulin）的DNA疫苗,并在体外对其表达产物进行鉴定。从人胰腺cDNA库用半巢式PCR扩增出编码Proinsulin的cDNA,克隆入载体PGEM－T中,再将其亚克隆至真核表达载体pcDNA3.1（＋）中,构建重组载体pcDNA3.1( )／Proinsulin,测序后在真核细胞COS－7中进行体外短暂表达,Western印迹法对其表达产物进行鉴定。结果克隆的人Proinsulin基因,测序表明其cDNA序列与Genbank公布的序列基本相同,仅在第63位氨基酸（C肽区）有一CAG（Glu)→CGG（Arg）的突变,Western免疫印迹法证实DNA疫苗在COS－7细胞中有效地获得了表达。结果说明运用基因克隆方法构建的Proinsulin DNA疫苗,在真核细胞内能有效地表达Proinsulin重组抗原。该疫苗的构建成功,为1型糖尿病的免疫干预提供了实验基础。     

基因疫苗研究与进展

基因疫苗代表了新的、具有潜力的疫苗发展途径和研究方向，它取得成功主要归功于基因治疗技术的发展．基因疫苗是直接将抗原的编码基因注入动物体内，并在动物细胞中表达抗原蛋白以诱导动物产生免疫保护作用．基因疫苗研究有可能为当今人类无法控制的一些严重传染疾病，提供新的免疫防治途径和手段．本文回顾了基因疫苗发展历史和研究进展，与传统疫苗相比较，对基因疫苗的作用原理、构造以及技术方法等方面的初步研究和进展情况进行了概述。     

日本血吸虫Sj23与IL-12多价DNA疫苗的构建

构建能共同表达日本血吸虫23kDa膜抗原(Sj23)与细胞因子IL-12的多价DNA疫苗．RT-PCR的方法从日本血吸虫成虫获得Sj23的基因片段,克隆到载体pVIVO2-mIL12／mcs上,进行酶切和测序鉴定．采用免疫荧光的方法检测多价DNA疫苗pVIVO2-Sj23-IL12在小鼠骨骼肌细胞的表达．成功地构建了能共同表达日本血吸虫23kDa膜抗原(Sj23)与细胞因子IL-12的多价DNA疫苗．此多价DNA疫苗在免疫小鼠肌细胞的细胞膜和细胞浆均获得了Sj23的表达．     

猪繁殖与呼吸综合征病毒M蛋白基因疫苗的构建及在小鼠的免疫试验

从PRRSV野毒株细胞培养上清提取RNA，用RT-PCR的方法扩增出M蛋白基因片段（525bp），并将该基因克隆到pMD18-T载体，测序结果与PRRSV BJ-4等株同源性最接近．以pIRES-neo为载体，构建表达PRRSVM蛋白的基因疫苗，按100μg／只的DNA量免疫小鼠，二免后二周抗体水平显著高于同期免疫空载体pIRES～neo组，于免疫后14、28、42天后均能检测到较高的细胞免疫水平．这说明表达M蛋白的基因疫苗能够刺激机体产生免疫应答．     

未来的丙型肝炎疫苗

丙型肝炎病毒（hepatitis C virus,HCV）是丙型肝炎的病原体,是导致输血后肝炎和非甲非乙型肝炎的主要致病因子。HCV感染常导致慢性肝炎、肝硬化和肝细胞癌。HCV在细胞内和动物体内复制能力很差,没有理想的细胞模型和动物模型。丙型肝炎目前尚无疫苗,还有很多病人在等待治疗。研制预防性和治疗性疫苗,以控制HCV感染有着重要意义。经过几代科技工作者的努力和奉献,丙型肝炎疫苗研究取得了重大进展。用核酸疫苗作首次免疫,用多肽疫苗或树突状细胞疫苗作加强免疫,不但有预防作用,而且有治疗效果。核酸疫苗将为改善人类和动物健康作出巨大贡献。     

IL—2与猪瘟病毒E2基因真核双表达载体的构建及其免疫增强作用的研究

应用DNA重组技术构建了猪瘟病毒E2基因与IL－2基因的双表达真核表达载体,观察其表达水平,并对其免疫增强效果进行了观察,结果是构建了猪瘟病毒E2基因与白细胞介素－2的真核表达质粒pIRST IL-2。将质粒转染BHK－21细胞,可在体外表达E2和有生物活性IL－2,pIRST IL-2质粒能诱导产生CSFV的特性免疫反应,pIRST IL-2所诱导的免疫应答反应比使用单表达质粒pIRST强,实验表明,IL－2与猪瘟病毒E2基因构建的双表达基因疫苗能有效提高基因疫苗的免疫效果。     

核酸疫苗的研究现状

核酸疫苗是九十年代诞生的新型疫苗,它具有许多传统疫苗没有的优点,是免疫学及预防医学的大突破,有广泛的应用前景。本文对核酸疫苗的组成、研究现状、作用机理、安全性问题等几个方面作了概述。     

弓形虫SAG1,ROP1基因及其复合抗原基因的核酸免疫研究

目的 检测混合SAG1和ROP1编码基因真核表达质粒疫苗诱导小鼠的免疫应答,评价其抗弓形虫感染的保护性免疫效果.方法 将SAG1和编码基因片段克隆入pEGFP-N3表达载体,构建重组质粒;RT-PCR体外验证重组质粒在NH3T3细胞中的表达;通过检测抗体、抗体分型及细胞因子来评价体液免疫和细胞免疫;腹腔内注射毒性株弓形虫速殖子攻击免疫小鼠.结果 RT-PCR结果显示重组质粒能在哺乳动物细胞内表达;SAG1和ROP1混合重组质粒疫苗诱导小鼠产生很强的体液免疫和细胞免疫,对于毒性株弓形虫感染攻击具有保护作用.结论 不同候选抗原编码基因重组质粒能够诱导小鼠产生抗弓形虫感染保护性免疫,提示含有多种成分的混合DNA疫苗的研制可作为核酸免疫研究的策略之一.     

流感疫苗的研究进展

流感是一种严重危害人类健康的传染病,目前接种传统的鸡胚灭活疫苗仍是预防流感的主要措施.近几年,生产工艺先进、副作用小的新型流感类病毒颗粒疫苗、重组活载体疫苗、病毒核酸疫苗和广谱疫苗的研究均有突破性进展,尤其基于MDCK细胞和Vero细胞等哺乳动物细胞培养的流感疫苗在欧美国家已经上市,有替代传统疫苗的趋势.     

壳聚糖-卵透明带DNA纳米微囊的制备及其体外表达

目的：发展壳聚糖-卵透明带口服DNA粘膜免疫避孕疫苗。方法：首先利用基因工程技术构建含卵透明带特异抗原pZP3α DNA的真核质粒表达载体pVAX1-pZP3α，然后用壳聚糖C390包被pVAX1-pZP3α重组质粒制备免疫微囊，测定免疫微囊对质粒DNA的包裹率，用原子力显微镜(AFM)观察壳聚糖-DNA微囊的形态结构，并体外转染HeLa细胞，用间接免疫荧光法(IIF)检测pZP3α的瞬时表达。结果：pZP30αDNA正确插入到载体pVAX1中并与壳聚糖C390形成纳米免疫微囊，对重组质粒pVAX1-pZP3a的包裹率达90％以上，AFM成像技术显示这些微囊的直径为100nm到300nm不等，平均为224.6nm，形状为球形、椭圆形等。体外转染HeLa细胞用IIF法检测到了抗原pZP3α在细胞内的表达。结论：壳聚糖-卵透明带口服DNA纳米免疫微囊制备成功，为进一步发展更安全、方便、有效的卵透明带DNA避孕疫苗打下了基础。     

中国流行株HIV—1gp120及其与IFNα基因共表达核酸疫苗质粒的构建及表达

目的 研究pGP和pGPIFNα在真核细胞中的表达。方法 以表达中国流行株HIV－1gp120基因的核酸疫苗质粒pGP及其表达中国流行株HIV－1gp120基因与IFNα基因与IFNα基因的核酸疫苗质粒pGPIFNα。转染BHK－21细胞，以间接免疫荧光鉴定其表达产物。结果 荧光显微镜下，pGP和pGPIFNα转染细胞可见绿色荧光，而HK－21细胞和空质粒则不见绿色荧光。结论 pGP和pGPIFNα可在真核细胞中表达目的蛋白gp120。     

乙肝病毒核酸疫苗诱导小鼠细胞免疫应答的研究

研究利用核酸疫苗诱生乙型肝炎病毒 (HBV)表面抗原 (S)细胞免疫应答的作用 .免疫前于BALB/C小鼠股四头肌注射 75 %盐酸布比卡因 ,三天后同样部位注射包含HBsAg基因片段的重组质粒pcDNAHBs .采用3H -TdR掺入法测定免疫小鼠脾细胞增殖能力 ;XTT法测定其脾细胞分泌IL 2活性 .结果表明注射乙肝核酸疫苗可以使小鼠脾细胞增殖 ,小鼠脾细胞分泌上清中可检测到IL - 2活性     

新型免疫疫苗——DNA疫苗

DNA疫苗是近几年发展起来的一种新型疫苗 .将抗原编码基因插入带有强启动子的质粒载体,然后用物理方法将重组质粒导入体内细胞,抗原编码基因即在细胞内合成抗原蛋白,诱发机体产生保护性免疫反应 .DNA疫苗是独特而有效的接种方法,实验证明它可以用来抵抗病毒感染和医治肿瘤等,有广泛的应用前景 .     

DNA疫苗的佐剂研究综述

DNA疫苗是新发展起来的一种疫苗。它有许多传统疫苗所没有的特点，但是其免疫原性较弱限制了应用。本文探讨了传统与新型分子免疫佐剂在提高DNA疫苗的免疫效果方面发生的作用，其中主要从细胞因子、趋化因子、CpG序列三个方面来说明。     

DNA疫苗在预防禽流感病毒的应用进展

DNA疫苗是近几年开始研发的一种新兴疫苗，发展十分迅速。本文对DNA疫苗近几年来在预防禽流感病毒方面的研究进行了综述。