Characteristics of Two Intermediates Trapped in the Unfolding Pathway of Arginine Kinase Induced by Guanidinium Chloride

Equilibrium guanidinium chloride （GdmCl）-induced unfolding of arginine kinase （AK） was investigated by enzymatic activity, intrinsic fluorescence, 8-anilinonaphthalene-1-sulfonic acid （ANS） fluorescence, circular dichroism （CD） spectrum, and size-exclusion chromatography. The measurements showed that AK unfolded through two equilibrium intermediates： the molten globule state and the partly folded state. Both intermediates have no enzyme activity. The molten globule state exists at 0.4-0.8 mol/L GdmCi, perhaps after the N-terminal domain has unfolded but the C-terminal domain is still intact. The partly folded state occurs at 1.1-1.5 mol/L GdmCI with a hydrodynamic volume no more than 1.6-fold larger than the native state and a pronounced far UV-CD signal. Its ANS fluorescence intensity is about 50% of the molten globule state. This partly folded state shares similarities with the “burst” kinetic intermediate of protein folding.     

Comparison of Inactivation and Unfolding of Calf Intestinal Alkaline Phosphatase in Guanidinium Chloride Solution

IntroductionCalf intestinal alkaline phosphatase(CIP,EC3 .1 .3 .1 ) is a metalloenzyme which catalyzes thenonspecific hydrolysis of phosphate monoesters[1 ] .The X-ray crystal structure of bacterial alkalinephosphatase has been reported to0 .2 nm resolutionin the presence of inorganic phosphate[2 ] . Theactive site is a pocket containing a tight cluster oftwo zinc ions (0 .3 9nm separation) and onemagnesium ion (0 . 5 and 0 .7nm from two zincions) .CIP also contains zinc and magnesium ions…     

乙醇对鲍鱼碱性磷酸酶活力与构象的影响

以乙醇为效应物研究对鲍鱼碱性磷酸酶(ALP)活力影响的结果表明．酶的剩余活力随着乙醇浓度增大而迅速下降，乙醇浓度40％可使酶活力完全丧失．说明乙醇对鲍鱼ALP有明显的失活作用，JG50为13％．含较低浓度乙醇(30％)的失活过程是可逆的反应．测定乙醇对酶的失活作用机理．结果表明乙醇对鲍鱼ALP的失活作用是非竞争性机制，说明底物存在不影响乙醇对酶的失活作用．应用荧光光谱、紫外吸收光谱研究鲍鱼ALP经乙醇微扰后的分子构象变化，发现乙醇对酶分子构象有显的影响，酶的内源荧光强度随乙醇浓度增大而增强．荧光发射峰逐渐发生红移．紫外吸收光谱在276nm吸收峰随乙醇浓度增大而增强．这些结果表明．酶蛋白分子中的生色基团残基的微环境发生变化．     

在胍溶液中文昌鱼酸性磷酸酶活性部位的构象变化与活力变化的关系

盐酸胍中酸性磷酸酶活性部位构象变化与活力变化的关系，酶于０．６ｍｏｌ／ＬＧｕ－ＨＣｌ中，其相对活力提高２０％，当ＧＵ－ＨＣｌ浓度增加到１．２～２．４ｍｏｌ／Ｌ时，酶的相对活力，其活性部位紫外－可见光谱５００ｍｍ处吸收峰及荧光发射光谱５１５ｍｍ处的发射峰值下降，同时测定了酶的变性与失活常数，也研究了酶的重折叠与复性的关系     

杂色鲍碱性磷酸酶在DMSO溶液中的活力与构象变化的研究

以二甲亚砜（DMSO）为效应物．研究其对杂色鲍碱性磷酸酶（ALP）活力的影响，结果表明：该酶的剩余活力随着DMSO浓度增大而迅速下降，当DMSO浓度达40％，酶活力几乎完全丧失．说明DMSO对杂色鲍ALP有明显的失活作用．导致酶活力丧失50％的DMSO浓度为17％．在较低DMSO浓度（〈20％）的失活是可逆的反应过程．动力学研究表明，该酶的失活过程属于混合型．进一步测定游离酶（E）和酶底物络合物（ES）与DMSO的结合常数（K1和K1s），结果表明K1〈K1s即说明底物存在对酶被DMSO的失活作用有一定的保护作用．应用荧光发射光谱研究杂色鲍ALP经DMSO微扰后的分子构象变化情况，随着DMSO浓度增大，荧光强度逐渐增强．但发射峰未发生明显变化现象．说明酶分子中的生色基团残基的微环境发生了一定的变化．     

h—SOD在脲、胍变性剂中的光谱学特征

研究了人血超氧化物歧化酶（h-SOD)在脲、胍及不同温度下变性的分子构象与活力之间的关系。酶的吸收光谱与酶活力的变化表明：当用不同的变性剂处理后,酶蛋白的空间结构发生了改变,紫外吸收表现出明显的增色效应;酶的荧光强度随脲浓度的增加有所增加随胍浓度的增加明显下降,在4mol/L胍变性条件下,h-SOD的发射峰自337nm红移到353nm,且酶活力明显下降。据此结果推测：酶活力的下降与构象的改变是同步发生的。     

荧光光度法快速测定水溶液中甲醛的研究

利用铵盐,乙酰丙酮及醛基反应生成的黄色产物的荧光性质,分别用紫外可见分光光度法及荧光分光光度法研究了影响黄色物质生成速度的各种因素,常温下,柠檬酸铵浓度4mol/L和乙酰丙酮浓度0．04mol/L的实验条件下,黄色物质在24S时间内可快速生成,荧光分光光度测定甲醛的线性范围为：0．4－1．0ug/mL,该方法用于自来水中甲醛的加标回收,结果满意。     

异优呫吨酮及其衍生物与DNA相互作用的研究

采用紫外光谱、荧光光谱、圆二色谱以及红外差谱法研究了异优呫吨酮(1,6-二羟基吨酮)(A)及其哌啶衍生物(1-羟基-6-(2-(1-哌啶基)乙氧基)呫吨酮)(B)与小牛胸腺DNA(CT-DNA)的作用方式和作用强度。结果表明,这两种化合物的紫外吸收光谱随DNA浓度的增加表现出减色效应;化合物A和B与DNA作用的结合常数分别为1.5×104,2.8×104 L/mol;DNA-EB体系的荧光强度随着两种化合物浓度的增加发生淬灭现象,化合物A和B的淬灭常数Kq分别是1.9×104,3.7×104 L/mol;两种化合物主要以嵌入方式与CT-DNA发生作用,B与DNA的结合能力比A强;并且呫吨酮芳环的嵌入使DNA螺旋变得松散、碱基堆积增强;化合物B插入后使CT-DNA的构象变化更为明显。研究结果对抗肿瘤药物的研发有一定的指导意义。     

Cause of Irreversible Inactivation of Aminoacylase in Urea Solution

ＩｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎＡｍｉｎｏａｃｙｌａｓｅ (Ｎ ａｃｙｌａｍｉｎｏａｃｉｄａｍｉｄｏｈｙｄｒｏｌａｓｅ .ＥＣ 3.5.1.14 ) ,ｗｈｉｃｈｅｘｉｓｔｓｉｎｍａｍｍａｌｉａｎｋｉｄｎｅｙｓａｎｄｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ ,ｃａｔａｌｙｚｅｓｔｈｅｒｅｖｅｒｓｉｂｌｅｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓｏｆＬ ａｃｙｌａｍｉｎｏａｃｉｄｓ[1] .Ｔｈｅｅｎｚｙｍｅｉｓｄｉｍｅｒｉｃｗｉｔｈａｒｅｌａｔｉｖｅｍｏｌｅｃｕｌａｒｗａｓｓｏｆ86 0 0 0 ,ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇｏｎｅＺｎ2 ｉｏｎｐｅｒｓｕｂｕｎｉｔｗｈｉｃｈｉｓ…     

金属离子和变性剂对黄精凝集素Ⅱ构象与功能的影响

黄精凝集素II（Polygonatum cyrtonema Hua.Lectin II,PCLII)具有323nm的荧光发射峰和281．6nm的激发峰,其远紫外圆二色谱（CD谱）显示224nm负峰,分子中含有17．3％的α螺旋和45．8％的β折叠,在10mmol/L的SDS中,PCL II完全丧失兔红细胞凝集能力及促T－淋巴细胞有丝分裂活性,CD谱呈现双负峰的a螺旋构象,去除SDS后,则呈无规卷曲构象,此时,荧光发射峰红移而激发峰蓝移,PCL II仍完全失活,在EDTANa2溶液中,PCL II凝集红细胞能力及促淋巴细胞有丝分裂活性完全丧失,去除EDTA后,红细胞凝集活性完全恢复,但仍失去促淋巴细胞有丝分裂能力,PCL II二级结构变化不大,荧光光谱的变化表明微环境受到影响。     

脲引起反相胶束酵母醇脱氢酶的紫外与荧光变化

比较了ＡＯＴ－异辛烷及水相两种体系中脲引起的酵母醇脱氢酶（ＹＡＤＨ）紫外和荧光变化。在水相反应系统中随着脲浓度增加（至３．０ｍｏｌ／Ｌ），酶活性迅速下降并全部失活，构象发生重大改变，２２０ｎｍ处的紫外吸收增加，荧光强度减小，３３６ｎｍ处的荧光峰红移１２ｎｍ至３４８ｎｍ，在Ｒ＝１５的反相胶束体系中，酶浓度相同时ＹＡＤＨ活力相当于水相ＹＡＤＨ的６３％左右，但脲浓度增至３．０ｍｏｌ／Ｌ时ＹＡＤＨ的活力基本无变化，２４０ｎｍ和２７０ｎｍ处的紫外吸收峰、３５７ｎｍ处的荧光发射峰均随着脲浓度的增加有所升高。上述结果表明脲对两种体系中ＹＡＤＨ的分子构象和活力的影响是不同的     

变性剂作用下文昌鱼碱性磷酸酶构象与催化活力变化

研究了文昌鱼碱性磷酸酶(AKP)的变性作用,结果表明:低浓度盐酸胍(0.5 mol/l,1.0 mol/l)对该酶具有明显激活作用;酶的荧光构象变化指标随脲浓度增大呈现两个陡变区(1.0～2.0 mol/l,4.0～8.0 mol/l),蜂位因变性剂存在而明显红移,表明肽链己发生较明显的伸展,该酶的失活与变性过程均为一级反应,低浓度脲(2.0 mol/l)作用表现为构象变化略快于失活,而高浓度盐酸胍(2.0 mol/l,4.0 mol/l)及高浓度脲(4.0 mol/l,6.0 mol/l,8.0 mol/l)作用均表现为失活略快于构象变化。     

利用电化学及光谱方法研究环丙沙星与DNA的相互作用

用循环伏安法研究了环丙沙星在单壁碳纳米管(SWNT)修饰电极上的电化学行为,在pH5.0的磷酸盐缓冲溶液(PBS)中,环丙沙星只出现一个氧化峰,峰电位为1.439 V.与其在裸玻碳电极相比,环丙沙星在单壁碳纳米管修饰电极上峰电流有明显增强;若底液中存在DNA时,环丙沙星峰电流减小,峰电位正移.另外用紫外和荧光光谱研究了DNA与环丙沙星的相互作用.结果表明其紫外吸收强度减弱,吸收峰红移,相对荧光强度减弱.实验结果表明环丙沙星与DNA之间形成新的加合物.     

Fluorescence spectra and enzymatic property of hemoglobin as mimetic peroxidase

0　IntroductionHemoglobin(Hb)isthemajorhemeproteinofredbloodcells(RBCs)andisresponsibleforthetransportofoxygentothetissues.ThefunctionofHbdependsupontheabilityoffer rousironinthehemegrouptobindandreleaseoxygen .Despiteitsprincipalroleasanoxygen carrier,theHbmoleculepossessesdifferentenzymaticactivities[1 ] andamethodwasdevelopedforthedeterminationofHbbasedonitsenzymaticactivityfortheox idationofo phenylenediamine (OPDA)withH2 O2 asanoxi dant[2 ] .Hbasamimeticenzymeofperoxidase ,cancataly…     

十六烷氧基偶氮苯-喹啉化合物合成、表征及性能

以间苯二甲酸为原料,经多步反应合成了1种新型烷氧基偶氮苯-喹啉化合物（E）5-[8-（十六烷氧基）喹啉-5-偶氮]-1,3-苯二甲酸二乙酯,通过IR、UV-Vis和1 H NMR对其结构进行了表征.利用吸收光谱和发射光谱研究了目标化合物的反-顺异构化和发光性能.目标化合物（2.0×10^-5 mol/L的DMF溶液）在365nm紫外光照射下,398nm处的偶氮苯-喹啉结构K带π-π＊跃迁吸收峰及267nm处芳香环的B带π-π＊跃迁吸收峰逐渐减弱,光照7min后达到光稳态.目标化合物（2.0×10^-5 mol/L的DMF溶液）以312nm光激发下,在418nm处发射蓝紫色荧光.     

Effect of Urea on Activity and Conformation of a Glycoprotein

Introduction In some enzymes, inactivation occurs before noticeable conformational change can be detected during denaturation by guanidinium chloride or urea[1-6]. Tsou[7] suggested that enzyme active sites are formed by relatively weak molecular interact…     

纳米银溶胶中超痕量分子的Raman光谱

根据柠檬酸钠还原硝酸盐的原理制备直径为80~90 nm的银纳米颗粒溶胶, 采用1 mW激光功率和5 s积分时间, 通过表面增强Raman散射技术检测到浓
度为10^-13 mol/L水中的超痕量若丹明6G分子, 通过制备银纳米膜的方法检测到浓度为10^-11 mol/L的超痕量R6G分子. 实验结果表明, 若银纳米颗粒的密度降低, 则其增强Raman散射的能力减弱.     

Inactivation of Lactate Dehydrogenase from Pig Heart by o—Phthalaldehyde

IntroductionLactate dehydrogenase( EC1 .1 .1 .2 7,LDH) playsa vital role in the energy flow of higher organisms.It is a tetrameric enzyme that catalyzes thereversible dehydrogenation of lactate,converting itto pyruvate.The enzyme exists in five isozymicforms which are not usually found all together inone tissue or organ.At least three different typesof LDH subunits( M,H and X) are known invertebrates,butthe X subunits are usually presentin only one or at mosta few tissues[1,2 ] .　Variou…     

红景天甙对人红细胞膜流动性的影响

利用荧光技术,研究红景天甙对人红细胞膜流动性的影响．结果表明,红景天甙对膜脂疏水链区流动性无显著影响;但红景天甙浓度增加对膜脂极性基区流动性有增强作用;红景天甙对膜蛋白也有作用     

芘有机硼化合物的合成及对氟离子的识别

通过在硼原子上引入大体积的芳香取代基合成稳定的含芘二米基硼化合物(Ⅰ)。经紫外可见吸收光谱和荧光光谱分析,研究其光物理性质及对F-的识别性质。结果表明:化合物具有较强的蓝色荧光发射,在四氢呋喃(THF)中荧光峰位为428 nm;由弱极性溶剂正己烷(荧光峰位在413 nm处)到强极性溶剂乙腈(荧光峰位在435 nm处),化合物荧光光谱峰值红移22 nm,荧光量子产率由0.98降为0.68;将四丁基氟化铵逐渐滴加入化合物Ⅰ的THF溶液中,其吸收光谱和荧光光谱均伴有旧峰消失和新峰出现的现象:吸收光谱的旧峰在383和399 nm处,新峰出现在324、338和353 nm处;荧光光谱的旧峰在429 nm处,新峰出现在385和403 nm处;继续滴加四丁基氰化铵,其吸收光谱和荧光光谱均无明显变化。