甜瓜叶片的衰老与超氧化物歧化酶活性及脂质过氧化作用的关系

分别用全营养液、缺Cu-Zn营养液、缺Fe营养液、缺Mn营养液、10％NaCl营养液培养甜瓜幼苗,研究不同时间甜瓜叶片的超氧化物歧化酶(SOD)及脂质过氧化产物丙二醛(MDA)含量的变化。实验结果表明：随着胁迫时间的延长,SOD活性降低,MDA含量显著增高。证明甜瓜为Cu-Zn SOD。观察了SOD同工酶随胁迫时间的延长在叶片中的变化。讨论了离子胁迫过程中氧自由基对酶及质膜的损伤影响。     

Purification and characterization of myosin from wheat mitochondria

Myosin was purified from wheat mitochondria using DE-52 anion exchange chromatography and Sephacryl S-300 gel filtration. The molecular weight of its heavy chain is about 210 ku, similar to that of muscle myosin Ⅱ(205 ku), and it could be recognized by the polyclonal antibodies against human skeletal muscle myosin Ⅱ. The ATPase activity of the mitochondrial myosin stimulated by F-actin from chicken muscle is 202.5 nmoles Pi/min·mg. The mitochondrial myosin could be activated by Ca²⁺ and was not inhibited by Ca²⁺ at high concentration. The results demonstrate that the myosin of wheat mitochondria shares some similarities with the skeletal muscle myosin Ⅱ.     

大豆叶片衰老过程中半胱氨酸蛋白酶基因的特异性表达

用反转录和多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）和琼脂糖凝胶电泳方法对大豆叶片衰老过程中半胱氨酸蛋白酶基因的表达情况进行了研究，发现由ＰＣＲ扩增出的ｃＤＮＡ带谱会随着叶片的不断衰老而发生较明显的改变，初步证明，至少有一条ｃＤＮＡ带为绿叶样品所特有，另外，两条ｃＤＮＡ带则为衰老叶片样品所特有，该实验结果为进一步分离大豆叶片衰老时特异表达基因及其启动子和最终实施转基因工程奠定了基础。     

小白芸豆凝集素的分离纯化及性质研究

从小白芸豆中分离纯化出一种新的凝集素,对其部分理化性质和生物活性进行研究.小白芸豆经过去皮粉碎、浸提、硫酸铵分段盐析、SP Sepharose阳离子交换、Q Sepharose阴离子交换和Superdex 200凝胶过滤层析后可得到小白芸豆凝集素(Phaseolus vulgaris var.albuslectin,PVAL)纯品.测定了PVAL的表观分子质量、亚基分子质量、糖含量、等电点、氨基酸组成、酸碱稳定性以及抗癌性.PVAL的表观分子质量为136 ku,是由2种分子质量分别为36.2 ku和32.2 ku的亚基组成的四聚体,糖含量为4.93%,等电点分布在pH5.3~6.0之间.PVAL分子无半胱氨酸,也无二硫键,疏水性氨基酸质量分数约为37%.PVAL对酸碱的耐受性比较好,并且对肿瘤细胞MDA-MB-435S有较好的抗性.     

梧桐花粉主要变应原的分离纯化

以离子交换和凝胶过滤层析对梧桐花粉变应原进行分离和纯化,采用生物素-链霉亲和素酶联免疫吸附分析法（BSA-ELISA）测定其抗原活性,得到两个具高活性的单一变应原组分PT13和PT53。经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测得它们的分子质量分别为20ku和18ku。     

不同脱乙酰度和分子质量的壳聚糖的抑菌性能

通过壳聚糖的抑茵实验和几种壳聚糖最低抑茵浓度的测定,比较了相同脱乙酰度不同分子质量以及分子质量相近但脱乙酰度不同的壳聚糖对金黄色葡萄球菌、枯草杆菌、大肠杆菌和假单胞菌的抑茵性能．结果表明：脱乙酰度相同、分子质量为400～800ku的壳聚糖,其抑茵能力随分子质量的增加而增强;而分子质量相近（均在430ku左右）、脱乙酰度不同（分别为68．4％,75．3％,83．6％和93．7％）的壳聚糖对上述4种细菌的抑茵能力差别不大;在pH值为5．5～6．0左右的条件下,壳聚糖具有最强的抑茵能力;实验条件下的壳聚糖对4种细菌都有较强的抑制作用,总体看来,壳聚糖对金黄色葡萄球菌的抑制作用最强,而对大肠杆菌的抑制作用相对较弱;实验条件下的壳聚糖对上述4种细菌的抑制作用普遍比苯甲酸钠强．     

与大豆叶片衰老相关的cDNA的克隆

植物叶片衰老是一个受遗传控制的细胞降解过程,最终导致叶片的死亡。一些研究结果已表明,蛋白酶基因的表达与叶片衰老过程相关,其中一些基因的表达具有衰老特异性。以半胱氨酸蛋白基因特异性引物和寡聚ｄＴ为引物,用ＲＴ－ＰＣＲ方法分别扩增来源于绿叶和诱导衰老叶片ｍＲＮＡ的互补ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）,然后进行琼脂糖凝胶电泳,差异显示出一条衰老叶片样品所特有的ｃＤＮＡ带,将此ｃＤＮＡ进行了克隆和序列分析。分析结果证明     

雅致放射毛霉AS3.2778碱性蛋白酶的制备及应用

毛酶蛋白酶对大豆蛋白具有较高的水解效率以及对蛋白水解物良好的脱苦效果,因此在大豆多肽的制备方面显示出很好的应用前景。为了开发这一蛋白酶系,采用离子交换,疏水层析及凝胶层析对其进行了分离纯化,从雅致放射毛霉As3.2778的发酵麸曲中分离纯化出一种蛋白酶,其纯度提高了22.7倍,酶活回收16.1%,最终比酶活可达到6094u/mg。电泳分析发现,该蛋白酶在还原及非还原条件下均显示出单一条带,表明该酶已达到电泳纯,并且是一单体蛋白,其分子量大约在32KDa。酶谱分析表明,纯化的蛋白酶仅为原发酵麸曲中三种蛋白酶组分中的一种。以大豆蛋白为底物,探讨了纯化后的蛋白酶对大豆蛋白的水解效果。结果显示,该蛋白酶在55℃,pH8.0～10.0的条件下对大豆蛋白显示出较强的水解能力。对比实验发现,纯化的毛酶蛋白酶对大豆蛋白的水解效果优于Papain、Alcalase及Protamex,表明该蛋白酶具有更为广泛的肽键选择性,对大豆蛋白亲和力更强,在大豆蛋白肽链上存在相对较多的酶切位点。     

不同pH对糙海参消化酶活性的影响

研究了不同pH条件下糙海参前肠、中肠及后肠的蛋白酶和淀粉酶比活力的变化.结果表明:1)糙海参前肠和中肠在pH=3,后肠在pH=10时,其蛋白酶的比活力最高;糙海参前肠和中肠蛋白酶的最适pH值在酸性范围,后肠蛋白酶的最适pH值在碱性范围;2)糙海参前肠淀粉酶在pH=3,中肠和后肠淀粉酶在pH=7时,其比活力最高,前肠淀粉酶的最适pH值在酸性范围,中后肠淀粉酶的最适pH值在中性或偏碱性范围;3)糙海参的整个肠道均能消化蛋白质与淀粉,中后肠是淀粉消化的主要场所;4)淀粉酶的比活力高于蛋白酶的比活力,这与其摄食底栖藻与腐屑的食性相吻合.     

阿魏酸酯酶O42807在毕赤酵母GS115中的表达

研究阿魏酸酯酶O42807基因(fae)在巴斯德毕赤酵母GS115中的表达及重组阿魏酸酯酶的酶学特性.化学合成fae基因序列,构建分泌型重组质粒pPIC9K-fae,经线性化后电转化至毕赤酵母GS115,对筛选出的高活性转化子进行诱导表达.SDS-PAGE分析显示:发酵上清液为单一条带,表观相对分子质量为42 ku,酶活为78.49 nkat·mL^-1,比活力为524.38 nkat·mg^-1,最适反应温度为50 ℃,在40~45 ℃温度范围内较稳定,最适反应p     

参环毛蚓肠道内源性纤维素酶的分离纯化及酶学性质分析

通过对参环毛蚓肠道组织提取液进行DEAE阴离子交换及凝胶过滤层析,获得参环毛蚓单一的内源纤维素酶的活性组分.根据AlpHaEaseFCTM软件计算出该组分分子质量约为45 ku,命名为Cx1.羧甲基纤维素钠(so-dium carboxymethylcellulose,CMC)法对Cx1进行酶学性质分析.分析结果显示:对于底物羧甲基纤维素钠,Cx1的米氏常数(Km)为0.289 mg/mL,Vmax为0.446 U.mL-1.min-1,反应最适温度为55℃,最适pH为6.0,在40~60℃、pH5.0~8.0具有较好的热稳定性和pH稳定性,其相对酶活力都能保持在55%以上.Ag+和Ba2+对Cx1起显著激活作用,K+、Zn2+、Mg2+、Ca2+、NH4+、Ni2+、Na+、Pb2+部分抑制酶活性,Cu2+离子对Cx1有完全抑制作用,而Fe2+对酶活力无明显影响.     

Purification and characterization of keratinase from a new Bacillus subtilis strain

The aim of this study was to purify and characterize a keratinase produced by a new isolated Bacillus subtilis KD-N2 strain. The keratinase produced by the isolate was purified using ammonium sulphate precipitation, Sephadex G-75 and DEAE (diethylaminoethyl)-Sepharose chromatographic techniques. The purified enzyme was shown to have a molecular mass of 30.5 kDa, as determined by sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) analysis. The optimum pH at 50 °C was 8.5 and the optimum temperature at pH 8.5 was 55 °C. The keratinase was partially inactivated by some metal ions, organic solvents and serine protease inhibitor phenylmethanesulfonyl fluoride (PMSF). Sodium dodecyl sulfate (SDS) and ethylene diamine tetraacetic acid (EDTA) had positive effect on the keratinase activity. Reducing agents including dithiothreitol (DTT), mercaptoethanol, L-cysteine, sodium sulphite, as well as chemicals of SDS, ammonium sulfamate and dimethylsulfoxide (DMSO) stimulated the enzyme activity upon a feather meal substrate. Besides feather keratin, the enzyme is active upon the soluble proteins ovalbumin, bovine serum albumin (BSA), casein and insoluble ones as sheep wool and human hair. Calf hair, silk and collagen could not be hydrolyzed by the keratinase.     

脱落酸对离体叶片衰老的影响及其与活性氧代谢的关系

研究了脱落酸对离体韭菜叶片衰老的影响与活性氧代谢的关系.发现在暗诱导衰老过程中膜脂过氧化产物丙二醛含量随超氧物歧化酶、过氧化氢酶活性和抗坏血酸、谷胱甘肽含量下降而增加.脱落酸处理后,伴随着叶绿素和蛋白质含量下降,超氧物歧化酶、过氧化氢酶活性和抗坏血酸、谷胱甘肽含量降低,而丙二醛含量增加.证明脱落酸促进离体韭菜叶片衰老的作用与活性氧代谢有密切关系.     

光度法测定常见蔬菜的抗氧化活性

在稀硫酸介质中,羟自由基迅速氧化丁基罗丹明B,使其褪色.在558 nm处测定吸光度的变化,可间接测定羟自由基的生成量;蔬菜提取物可以清除溶液中的羟自由基,从而使溶液的吸光度下降程度减弱.由此建立了一种测定蔬菜对羟自由基的清除率的新方法.测试了菠菜、油菜、香菜等10种蔬菜的抗氧化活性,其中菠菜、油菜、香菜的抗氧化活性较强.     

蛹虫草纤溶酶酶学性质的初步研究

对蛹虫草纤溶酶的酶学性质进行了研究,结果表明,其纤溶活性随温度(≤45℃)的升高和保温时间的延长,逐渐下降,当温度超过50℃时,则随温度的升高和保温时间的延长急剧下降;蛹虫草纤溶酶的最适pH为7.0,在碱性条件下纤溶活性相对稳定;金属离子Ca2+和Fe2+对蛹虫草纤溶酶的活性有显著激活作用;抑制剂中PMSF对蛹虫草纤溶酶活性的抑制作用较小,而Aprotinin、EDAT和EGTA对其纤溶活性均有较显著的抑制作用,说明蛹虫草纤溶酶可能不同于之前报道的纳豆激酶(丝氨酸蛋白酶),而是一种全新的蛋白酶,但对这一点还需要进一步的研究验证.     

灵芝漆酶的分离纯化及其部分酶学性质研究

将灵芝（Ganoderma lucidum）漆酶经过Sephadex G-75和DEAE-Sepharose Fast Flow两步纯化,获得具有3个同工酶的组分,并且纯度提高了81倍,酶活回收率高达83.9%。以ABTS为底物,漆酶最适pH值是2.2～2.6,在pH值4.6～7.8范围内稳定;最适温度45℃,在低于45℃时较稳定。大部分金属离子、酸根离子对灵芝漆酶普遍有抑制作用,除盐可以提高漆酶活力。     

水稻OsNAP基因的功能分析及其在育种价值方面的研究

NAC转录因子是植物特异的转录因子.本研究通过从水稻日本晴(Oryza sativa L.)的基因组中克隆到一个与拟南芥衰老相关的基因AtNAP(Atlg69490)的同源基因OsNAP.OsNAP的ORF为1 179bp,推测其编码蛋白含有392个氨基酸,等电点为8.55,分子质量为42.195ku.为进一步研究OsNAP的功能,利用显性抑制元件SRDX构建其pCAMBIA1304-35S:OsNAP-SRDX表达载体,通过农杆菌浸染方法将其转化水稻中花11品种.T1代转基因植株通过潮霉素、RealtimePCR、和Western blot鉴定,筛选出4个OsNAP高表达的阳性植株.在种子成熟期,观察到T1代转基因4号植株较野生型相比有明显的延缓衰老的表型,其他农艺性状如单株分蘖数、单株总粒数、单穗饱和穗粒数、千粒重、结实率等都优于野生型.实验证明抑制OsNAP基因的表达能够延缓水稻叶片衰老并可以提高产量,具有潜在的育种价值.     

RNAi-mediated knockingdown of rlpk2 gene retarded soybean leaf senescence

Leaf senescence that occurs in the last stage of leaf development is a genetically programmed process. It is very significant to elucidate the molecular mechanisms that control the initiation and progression of leaf senescence and the way the senescence signal is transduced. In a previous study on artificially induced soybean leaf senescence, we cloned a novel gene designated rlpk2 (Genbank Accession No. AY687391) that encodes a leucine-rich repeat (LRR) receptor like protein kinase. The expression level of rlpk2 gene was shown to be strongly up-regulated during both the natural leaf senescence process in this report and the artificially induced primary-leaf-senescence process in our previous work. The RNA interference (RNAi)-mediated knocking-down of rlpk2 dramatically retarded both the natural and nutrient deficiency-induced leaf senescence in transgenic soybean. The transgenic leaves showed more cell-aggregated surface structure and higher content of chlorophyll.     

组织蛋白酶L及其酶学特性研究

组织蛋白酶L很难通过常规的肌动球蛋白提取方法完全去除.由琼脂糖凝胶6B凝胶层析图谱显示,组织蛋白酶L的活性主峰明显偏离肌动球蛋白主峰,表明该酶是肌动球蛋白非结合型酶.凝胶柱层析后测定L型组织蛋白酶粗酶液(Lmix)的活性,结果表明Lmix的热稳定性与pH和温度密切相关,其最适pH为5.0,最适温度为45℃.在最适pH5.0时,Lmix的活性随NaCl浓度的增加而增大.专一性底物及酶激活剂、抑制剂影响研究表明,Lmix为内含巯基的半胱氨酸型组织蛋白酶.     

香菜挥发油功能性研究

对水蒸气蒸馏得到的香菜挥发油的功能性进行了研究,测定了香菜挥发油清除NaNO2和DPPH自由基的能力,研究结果显示,香菜精油具有很强的清除NaNO2和DPPH自由基能力.研究了香菜精油的抗菌活性,结果显示,香菜精油对大肠杆菌、葡萄球菌、枯草芽孢杆菌具有显著的抗菌作用,对根霉也有明显的生长抑制作用,但是,对米曲霉和黑曲霉完全没有抗菌作用.