筛选差异表达基因的方法进展

植入前胚胎差异表达基因的筛选是分离、鉴定发育相关基因的关键 ,是克隆动物发育分子机理研究的基础 .哺乳动物植入前胚胎和克隆胚胎材料的获得十分不易 ,使得筛选差异表达基因的方法在该领域的应用均受到较大的限制 .以DDRT -PCR为基础的单胚mRNA差异表达技术的建立 ,为克隆植入前胚胎发育相关基因及哺乳动物克隆胚胎发育分子机理研究提供有力的工具 ,本文将在多年研究基础上对该技术及目前筛选差异表达基因的方法进行综述 .     

花卉体细胞胚胎发生研究进展

综述花卉体细胞胚胎发生途径、体细胞胚胎发生过程的生理生化变化及其影响因素、体细胞胚胎发生与胚性基因的表达和花卉体细胞无性系变异等方面的研究进展,植物体细胞胚胎发生研究在基因工程体细胞融合、细胞突变体诱导、人工种子、杂种合子胚的挽救、种质保存、苗木快速繁殖等诸多方面有着广阔的应用前景,也是遗传学、转基因工程体系、生理生化、植物发育过程的基因表达和调控、功能基因组研究等方面一个必不可少的新兴研究系统.     

玉米茎尖培养研究(Ⅱ)--体细胞胚胎发生的组织细胞学研究

以玉米茎尖分生组织为外植体，在离体培养条件下诱导体细胞胚胎(胚状体)发生。组织细胞学观察表明，玉米茎尖分生组织在离体培养条件下可直接产生胚性愈伤组织，后者在继代培养中发生胚状体。多数胚状体起源于愈伤组织的表层细胞和表层之下的几层细胞，少数产生于愈伤组织的较深层。胚状体发生于单细胞，发育过程与合子胚大致相似。多数胚状体发育正常，具有一个芽端和一个胚根端。少数胚状体形成具多个芽端而共用一个胚根端的次生连体胚。胚状体发生不同步。胚状体只有在分化培养基上才能发育成熟。     

用小鼠单个MⅡ卵和2-细胞期胚胎构建cDNA文库

阶段特异性cDNA文库的构建和筛选是一种分离和克隆早期胚胎特异表达基因的有效方法.本研究利用小鼠单个MⅡ卵母细胞及发育至2-细胞的胚胎分别构建了cDNA文库.滴度分别为:6.5×106、7.2×107,基因片段平均长度为250-1500bp并用β-actin验证了文库的可靠性.这种利用单胚胎构建cDNA文库的方法,不仅解决了胚胎研究材料受限制的问题,而且在材料的发育时间上更加精确,更能反映胚胎发育的规律,是研究早期胚胎发育基因表达以及克隆胚胎发育相关基因的一种有效手段.     

基于多视图双聚类方法分析不同哺乳动物早期胚胎发育基因激活差异

大量分子生物学研究证实,哺乳动物早期胚胎发育具有严格的分子调控机制.但是,不同种类之间早期胚胎发育可能存在的调节差异和分子机理并不清楚.利用比较转录组学方法识别不同物种之间的保守共表达基因簇,对于深入揭示胚胎发育和器官分化十分关键.多视图双聚类方法(Multi-view bi-clustering,MVBC)可以解决胚胎样本中的基因表达信号弱和噪声数据较多的问题,较传统两步法可以更好地找到保守的共表达基因簇.我们使用多视图双聚类这一新方法,在人、鼠和牛胚胎中共鉴定出114个共表达基因模块,并对其中包含数目较多、可信度高的29个基因簇进行了KEGG通路富集分析.结果表明,这些基因簇在三个物种早期胚胎发育中共享的通路大多是核小体与RNA转运等起着基础作用的通路,表明在三个物种间合子特异性转录和翻译机制的建立都相对保守.另外,还发现了在物种内具有相似表达模式的8组基因簇、同一功能通路可在多个基因簇富集,以及信号通路在整个胚胎早期发育过程中呈时序性表达的特点.本研究揭示了三个物种间早期胚胎基因表达模式与通路功能的关系,丰富了物种间早期胚胎发育过程的差异化知识,对进一步研究哺乳动物早期胚胎发育机制有一定帮助.     

YUCCA基因家族在拟南芥胚胎发育过程中的表达模式研究

生长素作为重要的植物激素,在植物胚胎的形态建成和生长发育过程中起到关键的调控作用.依赖色氨酸的IPA途径是模式植物拟南芥中生长素合成的主要途径.以色氨酸为前体合成的IPA在YUCCA(YUC)的催化下生成IAA,这一过程也是生长素生物合成的限速步骤.拟南芥有11个YUC编码基因,目前对这11个YUC基因在植物胚胎发育过程中的表达模式还没有系统的研究.本文以Pro YUC:GUS(YUC1:GUS、YUC2:GUS、YUC4:GUS、YUC6:GUS、YUC8:GUS和YUC9:GUS)转基因植株为实验材料,观察在胚胎发育不同时期YUC基因的表达情况.结果表明:YUC1、YUC2和YUC4基因在拟南芥胚胎发育的后期(鱼雷期、拐杖期和成熟期)有极其微弱的表达;YUC6基因在拟南芥胚胎发育过程中没有表达;YUC8和YUC9在胚发育过程中有非常强的表达,其中YUC8主要在胚胎发育的三角胚时期、心形期和鱼雷期表达,而且在整个胚中表达,在拐杖期胚和成熟胚中YUC8特异在下胚轴和胚根中表达;YUC9在胚胎发育的球形期、三角胚时期和心形期有较强的表达,在胚发育的后期则在胚根有微弱的表达.这些结果表明拟南芥胚胎发育过程中存在生长素的本地合成,而且YUC8和YUC9是胚胎中参与生长素合成的主要基因.     

斑马鱼Cyclin C的cDNA克隆及其在发育过程中的表达

细胞周期蛋白C(cyclin C)与细胞周期依赖性蛋白激酶cdk8结合,通过磷酸化RNA 聚合酶 II 和 TFIIH调控转录.在脊椎动物胚胎发育过程中有关细胞周期蛋白C合子型转录激活机制尚知甚少.本研究克隆了斑马鱼细胞周期蛋白C基因,并用Northern杂交和整体原位杂交技术检测其在胚胎发育过程中的表达状态.结果显示,斑马鱼细胞周期蛋白C高度保守,与人细胞周期蛋白C有88％的蛋白序列同源;斑马鱼细胞周期蛋白C在母型期开始表达,其表达伴随中囊胚转换时期的合子型转录激活以及整个胚胎发育过程.     

红松体细胞胚胎培养技术体系的建立

以5个红松家系未成熟合子胚为材料,首次建立了红松体细胞胚胎(somaticembryo,SE)培养体系,为红松人工种子培育苗及基因转化奠定了基础实验表明:在GLH培养基上黑暗培养约6周后,5个红松家系未成熟胚的SE诱导率分别为46.31%、28.2%、26.57%、17.81%、9.652% 红松遗传类型、合子胚发育程度对SE诱导率影响均达到极显著的水平;遗传类型和合子胚发育程度之间的交互作用达到极显著水平,但合子胚发育程度与培养基类型间、遗传类型与培养基类型之间的交互作用不显著     

水曲柳胚后熟时期MSAP分析

为研究水曲柳合子胚发育后熟时期的基因组表观调控模式,以7月上旬到9月中旬8个取材时期多年生水曲柳合子胚子叶为研究对象,通过基因组甲基化敏感扩增多态性分析,检测了各时期基因组甲基化变化。结果表明:水曲柳合子胚在不同发育时期可检测到933~939条清晰的电泳条带,说明不同发育时期水曲柳合子胚甲基化差异不明显。进一步统计胞嘧啶甲基化模式及其变异模式发现,7月初基因组在CNG、CG/CNG位点下降的变异位点多于其他时期,表明在水曲柳合子胚发育过程中发生了较大规模的去甲基化事件。     

国内第一台单离子微束装置首次发现植物辐射损伤信号长程转导现象

中国科学院和安徽省离子束生物工程学重点实验室利用该所自行研制的国内第一台单离子微束装置,通过大量实验,创建了精确个数离子对植物个体的定点照射实验技术体系,实现定点定量辐照模式生物拟南芥种胚茎端分生组织,以根的发育模式为生物学检测终点。结果显示,在茎端分生组织受到辐照损伤后,主根伸长,根毛发育分化以及侧根发生均受到了显著的抑制,该实验表明在植物个体水平上存在辐射的长程效应。在国际上首次证实了辐射损伤信号在植物个体水平上的转导,为个体水平研究辐射损伤信号转导和解释低能离子的作用机理提供了直接的证据和重要的参考。     

羊草(Aneurolepidium chinense)的双受精作用与胚胎发育

本文以采用电镜制片的方法对羊草的双受精过程和胚胎发育进行了研究。羊草的双受精属有丝分裂前配子配合型。开花后约4h精子进入胚囊。两精子几乎同时进卵核和极核之一,精核分别在卵核和极核内松散,同时出现1到2个雄核仁。合子时期雌雄性核仁不融合,直到合子分裂前期仍为多核仁。羊草胚胎发育为紫菀型。一般合子第一次分裂为横分裂,但偶见有斜分裂。合子未见有极性,在二细胞原胚后期见有极性表现,超微结构显示,顶细胞和基细胞中圆球体大小和发育时期不同。胚发育经过原胚、椭圆形胚,再经胚分化期和成熟期发育为成熟胚。     

哺乳动物植人前胚胎发育的程序化

哺乳动物植入前胚胎发育的程序化过程,是发育生物学的核心问题,弄清这一过程,对研究哺乳动物早期发育有着重要意义.因受研究方法、实验材料等因素的影响,该研究领域的进展缓慢.文章就近年来在植入前胚胎发育的分子事件、母源调控向合子型调控的过渡、细胞核重建、染色质的重建机制、基因组甲基化与基因表达等方面的研究进展进行了综述.     

哺乳动物植入前胚胎发育的程序化

哺乳动物植入前胚胎发育的程序化过程,是发育生物学的核心问题,弄清这一过程,对研究哺乳动物早期发育有着重要意义.因受研究方法、实验材料等因素的影响,该研究领域的进展缓慢.文章就近年来在植入前胚胎发育的分子事件、母源调控向合子型调控的过渡、细胞核重建、染色质的重建机制、基因组甲基化与基因表达等方面的研究进展进行了综述.     

人类输卵管上皮细胞培养

哺乳动物输卵管是生殖过程中配子输送、受精及着床前胚胎发育的场所。在体外授精一胚胎移植（IVF－ET）工程中,虽然体外培养条件已不断得到改进,但精卵结合、胚胎早期发育及受孕率仍远不及体内。有人尝试用完整的兔子输卵管体外支持牛卵体外成熟、受精及早胚发育获得成功。用羊输卵管上皮细胞与羊胚胎体外共培养,发现可促进胚胎发育并得到高活力胚胎。更进一步的研究证明输卵管上皮细胞可能通过分泌特异蛋白而对精子、卵子及早胚产生影响。目前,对该特异分泌蛋白的研究尚不完全,在体研究很受限制,所以人输卵管上皮细胞体外培养是一…     

华北驼绒藜胚胎发育过程及多糖变化的组织化学研究

采用常规石蜡切片法、PAS法和铁矾苏木精染色,观察华北驼绒藜胚胎发育过程.结果显示胚胎发生的类型属于藜型;合子发育为直线型四细胞原胚和近似T型的四细胞原胚;胚乳发育为核型;在胚发育过程中出现异常现象,球形原胚后期不进行子叶的分化,胚体呈椭圆形生长.胚发育过程的营养来源于珠心组织积累的可溶性多糖、胚乳组织等;从胚发育过程中的营养供应分析,出现异常发育不是营养缺乏所导致的.胚后期的异常发育可能是驼绒藜种子败育的一个原因.     

植物基因分离的方法

总结了目前植物基因分离的方法．概括出四大类植物基因分离的方法，即序列克隆法，功能克隆法。作图克隆法。表型差异克隆法，并对其特点和适用范围进行了评述。     

葎草的胚后发育

本文应用光学显微镜对葎草的胚后发育进行了研究。核型胚乳,具合点吸器。胚柄二细胞,在心型胚时期退化。合子第一次分裂为横裂,胚胎发育为柳叶菜型。成熟胚胎呈盘旋状态,子叶细胞内含有大量的油脂颗粒。种皮由外珠被发育而成,其外表皮细胞内含有乳汁。果皮内表皮细胞径向延伸呈栅栏状,细胞壁厚呈波纹状,起着机械支持和保护种子的作用。     

乙型肝炎病毒x基因蛋白转导载体的构建

乙型肝炎病毒X蛋白在细胞转化和肝癌的发生发展中具有重要作用.为了深入研究X蛋白的致癌机理构建了pTAT-GFP-X载体.该研究以克隆在真核表达载体pCMV-X质粒中的x基因为模板,设计了x基因的PCR引物,采用PCR方法扩增x基因,回收PCR产物,以XhoI和EcoRI酶切位点将PCR产物连接到蛋白转导系统pTAT-GFP载体中,再用XhoI和EcoRI酶对筛选的重组子进行酶切鉴定,获得了510bp的目的片段,表明已成功地将目的片段克隆在pTAT-GFP载体中.经DNA序列分析检测,显示克隆的x基因无突变.经SDS-PAGE和Westernblot检测证实,将重组质料pTAT-GFP-X转化致大肠杆菌BL21中,可表达pTAT-GFP-X融合蛋白.该pTAT-GFP-X载体蛋白转导系统的构建,为进行X蛋白的蛋白转导实验奠定了基础.pTAT-GFP-X融合蛋白具有穿透细胞膜进入细胞的能力,进而在细胞内发挥作用,与转基因不同,无需细胞内基因表达的过程,使得X蛋白的定量实验成为可能,X蛋白的蛋白转导实验更有助于探讨x基因的致癌机理.     

狭叶锦鸡儿(Caragana stenophylla Pojark)的胚胎发育

本文对狭叶锦鸡儿的胚胎发育过程进行了研究,主要结论如下:胚囊发育属蓼型.在卵与次生核周围的原生质中聚集多糖.卵细胞、助细胞具明显极性,幼期的卵细胞、助细胞和中央细胞具完整的细胞壁.受精时,次生核与卵器相贴近,卵与助细胞在合点端的细胞璧消失.受精后,合子在合点端重新产生不连续的细胞壁,胚胎发育属柳叶菜型.基细胞纵横分裂产生多细胞胚柄.球胚早期,胚柄呈泡沫状团块结构,珠孔端胚囊璧以及胚柄基部,与胚囊璧毗邻处都具明显的传递型细胞壁,胚柄细胞中积累网球状颗较,从球孔端至合点端其分布密度具一定梯度,珠孔端珠被细胞中富含多糖类物质,同时,与胚囊相邻的珠被细胞质膜与壁之间具壁旁体,显示珠被组织对早期胚胎发育的营养关系,胚乳细胞化完成后,胚柄即行退化.     

葡萄离体培养中胚状体发生的研究Ⅰ.胚状体发生的组织细胞学观察

以葡萄（ＶｉｔｉｓｖｉｎｉｆｅｒａＬ．）的花药和花丝为实验材料，观察了葡萄离体培养中胚状体的发生发育过程．结果表明：（１）葡萄的花药和花丝经诱导都可形成胚性和非胚性两类不同的愈伤组织，与外植体来源无关，胚状体经胚性愈伤组织产生．（２）胚状体多起源于胚性愈伤组织表层或表层以下的单个细胞，这些细胞核大，细胞质浓，染色深，在表层者易于脱落而处于单个离散状态，它们的第一次分裂有均等分裂，也有不等分裂，经２细胞、３细胞、多细胞原胚等阶段发育为成熟的胚状体．（３）葡萄胚状体具有与双子叶植物合子胚相似的发育过程