多基因双T-DNA植物表达载体的构建及拟南芥转化

多基因植物表达载体用于植物遗传转化是培育具有多种优良品质作物的有效策略. 双T-DNA系统是实现筛选完成后选择标记基因删除的一种简便可行的方式. 为培育高度抗逆或去除标记基因的农作物，构建了多基因双T-DNA植物表达载体2T-bbgdD，其中含有一个抗除草剂基因bar, 3个抗逆相关基因(DREB1A, Na+依赖性Pi转运体基因（d5）, betA)和一个报告基因gfp. 利用农杆菌介导法将该载体转入拟南芥，获得了多基因共转化及去除标记基因的转基因拟南芥. 可将此植物表达载体进一步用于作物的遗传转化.     

玉米愈伤组织的遗传转化及抗除草剂植株再生

以玉米胚性愈伤组织为受体,采用基因枪轰击法将来自拟南芥菜（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ｔｈａｌｉａｎａ）的突变抗除草剂基因ａｌｓ导入玉米愈伤组织细胞;转化后的细胞经除草剂ｃｈｌｏｒｓｕｌｆｕｒｏｎ筛选,产生了抗性愈伤组织并再生植株,经ＰＣＲ检测和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹法鉴定,部分再生植株转入了ａｌｓ基因,喷施除草剂试验表明,转基因植株具有良好的抗除草剂特性．研究的目的是获得抗除草剂ｃｈｌｏｒｓｕｌｆｕｒ     

Introduction of AtNHX1 into beet improved salt-tolerance of transgenic plants

AtNHX1 gene encoding the Na ^＋/H ^＋ antiport on the vacuole membrane of Arabidopsis was transferred into small bud tips of 1-3mm in length derived from immature inflorescence cultures of six genotypes of beet （ Beta vulgaris L. ） by the infection of Agrobacterium tumefaciens and transgenic plants with improved salt-tolerance were obtained. When transgenic plants at 5-leaf stage were potted in sand and irrigated with solutions containing a range of concentrations of NaCl （171-513mM）, they showed minor symptoms of damage from salinity and better tolerance than the controls. There were considerable discrepancies of salt-tolerance between transgenic plants originated from the same genotype and also between different genotypes. After vernalization, bolting transgenic plants were enveloped with two layers of gauzes for self-pollination. T1 seedlings tolerant to 342-427mM NaCl were obtained respectively. These results revealed that it was feasible to improve salt-tolerance of beets by the introduction of AtNHX1 gene into cultured bud cells.     

转蔗糖: 蔗糖-1-果糖基转移酶基因提高烟草的耐旱性

蔗糖: 蔗糖-1-果糖基转移酶（sucrose: sucrose 1-fructosyltransferase, 1-SST）以蔗糖为底物催化生成蔗果三糖等低聚合度的果聚糖.将从莴苣中克隆的1-SST基因重组到pCAMBIA1300-als中，构建了在CaMV 35S启动子调控下的植物表达载体，利用农杆菌介导的叶盘转化法将1-SST基因导入烟草中，PCR和Southern杂交检测表明获得了转基因植株，RT-PCR结果表明该基因在烟草中正常表达. 对T₀代转基因烟草进行的耐旱性分析结果表明，干旱胁迫6d的转基因植株丙二醛含量和电解质渗漏率显著低于未转基因对照，叶片相对含水量下降速度也明显比对照慢. 对转基因植株叶片糖分分析表明，转基因烟草植株积累果聚糖，并在干旱胁迫后含量明显增加，而未转基因对照植株不积累果聚糖. 在14%PEG溶液中未转基因烟草种子的萌发率仅为转基因烟草种子的一半；在附加200mmol/L甘露醇的培养基中未转基因烟草种子根的生长明显受到抑制，而转基因烟草根的生长发育正常. 以上研究结果表明，转1-SST基因烟草植株耐旱性的提高可能与该基因的表达有关.     

玉米茎尖培养研究(Ⅱ)--体细胞胚胎发生的组织细胞学研究

以玉米茎尖分生组织为外植体，在离体培养条件下诱导体细胞胚胎(胚状体)发生。组织细胞学观察表明，玉米茎尖分生组织在离体培养条件下可直接产生胚性愈伤组织，后者在继代培养中发生胚状体。多数胚状体起源于愈伤组织的表层细胞和表层之下的几层细胞，少数产生于愈伤组织的较深层。胚状体发生于单细胞，发育过程与合子胚大致相似。多数胚状体发育正常，具有一个芽端和一个胚根端。少数胚状体形成具多个芽端而共用一个胚根端的次生连体胚。胚状体发生不同步。胚状体只有在分化培养基上才能发育成熟。     

小盐芥(Thellungiella salsuginea)CBF1基因的克隆

CBFs （ CRT/DRE-binding factor ）是结合DNA顺式元件CCGAC的转录因子．拟南芥中CBFs由一个小的基因家族编码，包括3个成员：CBF1、CBF2和CBF3，它们在植物抗逆性调控中起重要作用．为了获得高度耐盐耐旱的转基因植物，我们以盐生植物小盐芥为材料，依据拟南芥中CBF1的序列信息设计引物，扩增出小盐芥中CBF1的部分序列，然后使用SMART^TM RACE等方法，从小盐芥中克隆到全长的CBF1 cDNA序列，进而重组到植物表达载体中，为植物抗逆基因工程提供了有用基因．