微注射入TCP10L基因对斑马鱼形态的影响

利用模式生物斑马鱼,通过微注射的方法,研究了人肝脏特异性转录因子TCP10L对斑马鱼早期胚胎发育的影响.结果显示：人TCP10L基因对斑马鱼胚胎发育有一定的毒性.表现为早期的脊索发育异常,个体严重畸形;当血液循环出现后,表现为血流延缓和围心腔水肿等症状.该项研究表明：人肝脏特异性转录因子TCP10L在斑马鱼胚胎中的过表达会引起显著的形态异常和心血管障碍,并且这种影响与其是否在斑马鱼肝内的特异表达有关,为进一步探明该转录因子在人肝脏内发挥的功能奠定了基础.     

微注射人TCP10L基因对斑马鱼形态的影响

利用模式生物斑马鱼,通过微注射的方法,研究了人肝脏特异性转录因子TCP10L对斑马鱼早期胚胎发育的影响.结果显示:人TCP10L基因对斑马鱼胚胎发育有一定的毒性.表现为早期的脊索发育异常,个体严重畸形;当血液循环出现后,表现为血流延缓和围心腔水肿等症状.该项研究表明:人肝脏特异性转录因子TCP10L在斑马鱼胚胎中的过表达会引起显著的形态异常和心血管障碍,并且这种影响与其是否在斑马鱼肝内的特异表达有关,为进一步探明该转录因子在人肝脏内发挥的功能奠定了基础.     

斑马鱼母源凝集素基因zfol的克隆和表达分析

为验证凝集素Zfol是否为母源蛋白及其具体表达模式,揭示凝集素这类来源于母体的免疫物质在鱼类胚胎发育早期的免疫保护作用并提供理论依据,克隆Zfol的基因全长进行了生物信息学分析.利用RT-PCR和Western blot分析了zfol mRNA和Zfol蛋白的时空表达.结果表明:zfol mRNA及Zfol蛋白在斑马鱼胚胎发育过程中的表达均呈动态变化.zfol mRNA在成鱼的卵巢、心脏、肝脏、肾脏、脑中表达,在精巢中未检测到表达.Zfol蛋白在精巢、心脏、脑、肝脏等组织中检测不到表达,而在肾脏中有低含量表达,在卵巢中有高含量表达.     

乙肝病毒hbx基因诱导斑马鱼胚胎发育背部化畸形

为了研究HBX对胚胎发育的影响,从含有HBX基因的质粒上转录HBX mRNA,显微注射入斑马鱼早期胚胎,在bud期进行表型观察,并用全胚胎原位杂交法检测HBX对斑马鱼胚胎早期发育的影响,用脊索标记基因ntl和骨骼肌标记基因MyoD作为探针检测胚胎发育背部化的特征表型。首次发现HBX的表达引起斑马鱼胚胎早期发育背部化畸形,HBX过量表达的胚胎背部化表型与早期胚胎wnt缺失表达导致的胚胎发育背部化表型一致,HBX可能通过激活wnt/β-catenin信号通路的表达和调控,造成胚胎发育背部化的畸形。     

斑马鱼SAA基因克隆及表达分析

利用巢式PCR(nest PCR)的方法克隆斑马鱼血清淀粉样蛋白A基因,并进行生物信息学分析.实时荧光定量PCR结果显示:SAA在斑马鱼胚胎发育时期的表达量呈现明显的“增长—稳定—增长”趋势.成鱼组织分布中,SAA在11个斑马鱼组织中均能检测到,在心脏和肝脏中相对高表达.     

应用酵母双杂交系统筛选与Spr2相互作用的蛋白

Spr2在斑马鱼胚胎发育过程中的中胚层和外胚层中表达,它可以通过调控Fgf信号通路来调控斑马鱼中胚层的发生.为了进一步揭示Spr2调控Fgf信号通路的分子机制,本文通过酵母双杂交系统在斑马鱼早期胚胎cDNA文库中筛选可能与Spr2相互作用的蛋白,以酵母融合的方法在6.3×106个转化子中筛选到78个阳性克隆,测序鉴定后最终得到Pairedboxgene6a、mSin3A-associatedprotein130等11种可能与Spr2蛋白相互作用的蛋白,通过结果分析推测Spr2可能通过fgf8参与Fgf信号通路的调控.     

斑马鱼Pax3a结构域过表达对瓦登伯革氏症候群疾病影响

目的:探究斑马鱼PAX3直系同源基因Pax3a的结构域在多种组织细胞中的复杂功能.进一步了解哺乳类肌肉间质先祖细胞标志基因PAX3在胚胎发育、组织再生和肿瘤发生过程中发挥的重要作用.方法:构建斑马鱼Pax3a 4个保守结构域编码的过表达质粒,包括p-Paired box domain 3(PD3)、p-Homeobox domain (HD)、p-G protein-pathway-suppressor domain (GPD)和p-Paired box domain 7 (PD7),使用蛋白免疫印迹,细胞免疫荧光和实时荧光定量PCR方法验证体内外mRNA和蛋白水平表达,并进行体内胚胎显微注射和体外转染细胞.结果:胚胎发育变异表型的统计分析结果显示:每个结构域会引起斑马鱼胚胎产生较高比例的特异瓦登伯革综合征表型,比如白斑症、内眦外移、瞳孔变大等症状.在细胞学水平显示,每个结构域过表达对细胞迁移有不同影响.结论:Pax3a每个结构域有各自的作用通路,其功能增溢与PAX3基因突变均可产生瓦登伯革氏症候群.     

水生动物细胞周期蛋白研究进展

细胞周期蛋白是真核细胞周期循环中主要的调控因子,参与细胞周期的精密调控,维持细胞正常生长及发育平衡.本文简述了细胞周期蛋白与水生动物卵子发生、早期胚胎发育的关系以及细胞周期蛋白在生殖过程的表达与调控.     

斑马鱼GAPDH蛋白片段的原核表达差异分析

为了分析斑马鱼GAPDH基因不同区域原核表达构建的诱导效应差异,应用生物信息技术分析斑马鱼GAPDH分子结构,通过定向删除技术,构建表达部分斑马鱼GAPDH蛋白片段的质粒。通过IPTG诱导,SDS-PAG检测,分析GAPDH基因不同区域构建的蛋白表达差异。结果:引物对ZGCKF/ZGCXR构建的GAPDH重组表达质粒具有IPTG诱导表达效应,而引物对ZGNKF/ZGNXR构建的质粒则不具有IPTG诱导表达效应。因此,为了在原核表达真核蛋白时应考虑过表达的真核蛋白是否会影响宿主的代谢以及是否会导致宿主的抵抗,设计引物时应当选择合适的区域构建重组质粒才能获表达产物。     

斑马鱼胚胎发育的功能染色体组

随着人类和其他物种染色体组测序工作的完成 ,人类科学最大的任务就是阐明数以万计的基因的生物功能。人类和动物生命周期都从受精卵开始 ,然后一步一步地发育成具有多元组织和器官的生物体。在胚胎形成过程中 ,伴随着基因生成物的协同运作 ,基因按其固有的程序陆续显现出影响 ,从而决定并实现整个人体程序。如果使用适当的动物做模型的话 ,可以加速胚胎功能染色体组的研究。斑马鱼就是这项研究一个很好的模型。斑马鱼最大的优点就是产卵多、体外胚胎发育、体积小、容易养活 ,除此以外 ,很多的分子、细胞、胚胎和基因操作在斑马鱼身上都很容…     

A mutation that changes cell movement and cell fate in the zebrafish embryo

The study of developmental patterning has been facilitated by the availability of mutations that produce changes in cell fate, in animals such as Caenorhabditis elegans and Drosophila melanogaster. We now describe a zygotic lethal mutation in the zebrafish, Brachydanio rerio, that also changes how particular embryonic cells develop. Severe pattern deficiencies are observed that are restricted to a single body region, the trunk. The mutation may directly affect mesoderm, as somites do not form in the trunk. Head and tail structures, including tail somites, are relatively undisturbed. The earliest detected expression of the mutation is during gastrulation, when movements of mesodermal cells occur incorrectly. We injected prospective trunk mesodermal cells with lineage tracer dye and observed that in mutants these cells may enter a new body region, the tail, and there may express a new fate appropriate for the changed position.     

cdx4 mutants fail to specify blood progenitors and can be rescued by multiple hox genes

Organogenesis is dependent on the formation of distinct cell types within the embryo. Important to this process are the hox genes, which are believed to confer positional identities to cells along the anteroposterior axis. Here, we have identified the caudal-related gene cdx4 as the locus mutated in kugelig (kgg), a zebrafish mutant with an early defect in haematopoiesis that is associated with abnormal anteroposterior patterning and aberrant hox gene expression. The blood deficiency in kgg embryos can be rescued by overexpressing hoxb7a or hoxa9a but not hoxb8a, indicating that the haematopoietic defect results from perturbations in specific hox genes. Furthermore, the haematopoietic defect in kgg mutants is not rescued by scl overexpression, suggesting that cdx4 and hox genes act to make the posterior mesoderm competent for blood development. Overexpression of cdx4 during zebrafish development or in mouse embryonic stem cells induces blood formation and alters hox gene expression. Taken together, these findings demonstrate that cdx4 regulates hox genes and is necessary for the specification of haematopoietic cell fate during vertebrate embryogenesis.     

邻苯二甲酸酯对斑马鱼胚胎发育的联合毒性

通过48 h单一毒性试验和正交试验,研究了邻苯二甲酸二甲酯(DMP)、邻苯二甲酸二乙酯(DEP)、邻苯二甲酸二正丁酯(DBP)和邻苯二甲酸二异辛酯(DEHP)4种邻苯二甲酸酯类化合物暴露对斑马鱼胚胎发育的毒性效应。结果表明:这些化合物对斑马鱼胚胎发育有明显的抑制作用,可以造成胚胎发育畸形甚至死亡,具有特定最敏感的毒理学终点;4种邻苯二甲酸酯(PAEs)单独作用时毒性大小顺序依次为DBPDEHPDEPDMP;在4种PAEs对斑马鱼胚胎发育的混合暴露正交试验中,DBP和DEHP存在交互作用,对其致死毒性和发育毒性影响最大;DBP虽然对斑马鱼胚胎的致死毒性和发育毒性影响不明显,但DBP可导致胚胎发育的严重畸形。