小鼠睾丸发育过程中Ki67蛋白的表达规律

为探讨Ki67蛋白在小鼠睾丸生后发育全过程中的时空表达规律,以20组处于不同发育阶段的昆明种正常小鼠睾丸组织为材料,在其石蜡组织切片上进行Ki67蛋白的免疫组织化学检测.结果发现:Ki67蛋白在生后1d直至58d的小鼠睾丸组织中均有表达,其表达部位集中于精原细胞和部分初级精母细胞,其中精原细胞中的表达相对强烈;其表达活跃时期出现于小鼠生后7~25 d.上述结果表明Ki67蛋白参与了小鼠睾丸正常发育过程中精原细胞的有丝分裂过程,可作为评估睾丸精原细胞增殖活性的指标之一.     

小鼠睾丸发育全过程中生精细胞的自发性凋亡

 以17组出生后不同发育阶段的昆明种正常小鼠睾丸组织为材料,采用TDT原位末端标记法在其石蜡组织切片上进行凋亡细胞原位检测,探讨小鼠睾丸发育全过程中生精细胞的自发性凋亡规律.结果发现:小鼠生精细胞从生后开始就存在自发性凋亡现象,生后1~15 d,凋亡精原细胞数目不断增加;至生后第15天时达到峰值,且15 d起个别初级精母细胞也开始出现凋亡;至27 d时,极少数次级精母细胞和精子细胞出现凋亡;至30 d时凋亡细胞基本为精原细胞;而33 d时各类型生精细胞均存在凋亡现象;至36 d时凋亡细胞又重新集中于精原细胞,并延续于此后各期.上述结果表明:小鼠睾丸发育过程中凋亡细胞主要为精原细胞;自发性凋亡活跃期发生于生后1~33 d,与生精细胞的首次发育成熟过程同步.     

小鼠睾丸发育全过程的组织学观察

为系统观察小鼠睾丸组织发育过程,将生后1～57d处于不同发育时期的17组昆明种正常小鼠睾丸组织制备石蜡切片、进行H.E染色分析。结果表明:小鼠生后初期睾丸曲细精管中只有支持细胞和原始生精细胞;至生后8d时出现B型精原细胞;15d时出现初级精母细胞;23d时出现次级精母细胞及少量圆形精子细胞,此后圆形精子细胞逐渐增多;30d时圆形精子细胞发生变态;36d时大量精子开始稳定出现于曲细精管管腔中,并延续至此后各期。这意味着小鼠生精细胞在出生后经过一个相对连续的发育分化过程,至生后约36d发育成熟。这为细化小鼠睾丸组织发育和精子发生过程提供了详细资料。     

一条在人睾丸中高表达的新的环指蛋白(RNF20)

从人胎脑构建的cDNA文库中,通过大规模测序筛选的方法获得一条新基因,该基因蛋白序列含有1个环指（RING finger)基序及2个进核信号（nuclear localization signal NLS)序列,钭此基因命名为RNF20（RING Finger 20),用放射杂交细胞系（Radial hybrid RH)方法定位此基因在人染色体的9q22上,Northern杂交表明,其mRNA在睾丸组织中高表达,用小鼠睾丸做原位杂交表明,小鼠的同源基因在精原细胞及初级精母细胞中高表达,未成年小鼠睾丸中的精原细胞没有发达,提示RNF20可能参与精子发生的调控作用。     

5种细胞周期调控基因在小鼠生殖细胞发育过程中的表达研究

 以成熟(10周龄以上)的昆明种正常小鼠的精巢和卵巢为材料,利用地高辛标记的基因探针进行组织切片上的DNA-mRNA分子原位杂交,研究了PCNA,cdc2,cyclin D1,p2 1和 p16 5种细胞周期调控基因在生殖细胞发育过程中的表达.结果表明:PCNA基因在睾丸组织的精原细胞和精母细胞中有强杂交信号,而在雌性生殖细胞及滤泡细胞的发育过程都没有杂交信号;cyclin D1,cdc2,p2 1,p16基因在生殖细胞的发育过程中都没有,表明这些基因并没有参与小鼠生殖细胞的生长和分化调控.这些事实表明在生殖细胞发育过程中,控制细胞增殖和增殖抑制的基因与培养细胞有不同的机制,它们可能采用了不同的调控系统.     

小鼠睾丸发育过程中Si1基因表达的研究

 以1天龄、未成熟(3周龄)、成熟期(10周龄以上)的昆明正常小鼠睾丸组织为实验材料,利用地高辛标记的Si1基因探针在其组织切片上进行DNA-mRNA分子原位杂交,探讨Si1基因在小鼠睾丸发育过程中的表达变化.同时,分别在生后15,20 d及25 d的昆明小鼠睾丸组织切片上进行凋亡细胞原位检测,验证小鼠睾丸上述发育时期的细胞凋亡情况.结果发现:①Si1基因在1天龄小鼠的睾丸组织生精上皮内无杂交信号;在未成熟小鼠的睾丸组织部分生精上皮内有极强的杂交信号;在成熟小鼠的睾丸组织生精上皮内无杂交信号.②小鼠睾丸组织生精上皮内,凋亡细胞数从生后第15-20天呈增加趋势,于生后第20天出现峰值,生后第25天又降低.上述结果表明Si1基因可能参与了小鼠睾丸的发育过程,在小鼠睾丸发育的特定时期发挥作用,由于Si1基因的表达与小鼠生精细胞凋亡发生的时期同步,表明该基因可能与小鼠睾丸发育过程中的细胞凋亡有关.     

小鼠睾丸TERT表达的增龄变化

应用免疫组织化学和图像分析方法研究了10,20,30,60,90天龄的小鼠睾丸不同分化类型生殖细胞中端粒酶催化亚基TERT的表达.结果发现在精子发生过程中精原细胞及成熟精子中均未见TERT阳性表达,而初级精母细胞尤其是粗线期精母细胞和精子细胞是高表达TERT的细胞类群,附睾管上皮细胞也呈TERT阳性表达;同时TERT在小鼠个体发育过程中的表达存在着从弱到强再到弱的动态变化趋势.结果表明TERT在小鼠睾丸中的表达特点与精子发生过程密切相关,可能对维持生殖细胞遗传物质的完整性和减数分裂的正常进行发挥着重要作用.     

CREBBP在小鼠睾丸发育过程中表达模式的研究

睾丸是雄性动物最为重要的生殖器官,主要由曲细精管和间质构成。雄性哺乳动物持续的精子发生依赖于精原干细胞。精原干细胞通过有丝分裂自我更新,并在一些因子的诱导下启动分化进一步发育为精母细胞。研究睾丸中各细胞基因的表达调控对男性不育和睾丸生殖细胞肿瘤的治疗具有十分重要的意义。本研究利用RT-PCR、免疫组织化学及免疫荧光双染的方法主要研究了CREBBP在小鼠睾丸中的表达模式,结果显示CREBBP主要在精原细胞中表达,并在增殖状态的精原细胞中有表达,但在分化后启动了减数分裂的细胞中未检测到阳性信号。因此我们推测CREBBP可能参与了精原细胞的增殖,为后期精原细胞自我更新机制的研究提供理论基础。     

一个新的人类精子发生相关蛋白激酶cDNA的克隆

蛋白磷酸化被认为在精子发生过程中起重要作用,从人类胎脑cDNA文库中得到2个克隆,分别长1840bp和1571bp,后者仅比前者在3非翻译区少了约300个核苷酸,二者拟编码322个氨基酸残基,基序分析发现其中含有1段明显的蛋白激酶其序,Northern杂交显示其在睾丸中有显著表达,暂命名为精了发生相关蛋白激酶,原位杂交表明精子发生相关蛋白激酶基因在性成熟小鼠睾丸中主要表达在生精小管的外层细胞中,而这一层细胞主要包含分裂的精原细胞的初级精母细胞,提示精子发生相关蛋白激酶可能在精子发生过程中起着比较重要的作用。     

大天鹅睾丸和附睾的组织结构及EGF,Bax,Bcl-2蛋白和iNOS的表达

为了解大天鹅(Cygnus cygnus)睾丸和附睾的组织结构特征及相关活性物质的表达情况,用生物显微技术观察了大天鹅睾丸和附睾的组织结构,用免疫组织化学方法检测了EGF,Bax蛋白,Bcl-2蛋白和iNOS在睾丸和附睾中的表达.结果表明,大天鹅睾丸内生精小管主要由支持细胞和各级生精细胞构成,众多生精小管被睾丸间质隔开;附睾由输出小管和附睾管组成;大天鹅睾丸生精小管直径、生殖细胞大小、附睾管直径及上皮厚度等与其他脊椎动物存在差异;EGF,Bax蛋白,Bcl-2蛋白在睾丸生精小管管周的肌样细胞、精原细胞、精母细胞、精子细胞、间质细胞和附睾管上皮细胞等处呈免疫反应阳性;iNOS在睾丸间质内的血管壁及间质细胞、附睾管上皮细胞、附睾结缔组织等处有阳性表达;EGF可能参与其精子发生、获能及激素生成的调控过程;Bax蛋白和Bcl-2蛋白可能共同参与调控正常大天鹅睾丸和附睾细胞的凋亡;iNOS可能也参与雄性大天鹅各种生殖活动的调节.     

黄犏牛与黄牛b-Boule基因编码区序列、结构、表达模式和睾丸组织表达水平的差异分析

Boule是动物精母细胞减数分裂过程中的必需蛋白,与精子发生减数分裂阻滞、雄性不育等密切相关.文中通过PCR扩增和克隆测序获得黄犏牛b-Boule基因的cDNA全序列,生物信息学分析发现黄犏牛b-Boule基因编码区全长885 bp,具有典型的RNA识别基序(RRM)和DAZ重复序列;与黄牛氨基酸序列的同源性为98.65%,仅在C-末端有4个氨基酸的差异,典型结构域的氨基酸序列和高级结构相同.RT-PCR发现b-Boule基因在黄牛和黄犏牛睾丸组织中特异表达,原位杂交显示b-Boule存在于初级精母细胞和次级精母细胞的细胞质中.荧光定量PCR发现黄牛睾丸组织中b-Boule基因表达水平显著高于黄犏牛(P<0.05),且黄犏牛精子发生减数分裂阻滞的表型与人、小鼠BDule基因表达缺失或降低引起的不育表型一致,因此推测b-Boule基因可能在精母细胞减数分裂过程中发挥重要作用,且与黄犏牛雄性不育有密切的关系.     

RT-PCR法检测大鼠组织中GLUT8基因表达特异性

采用半定量RT_PCR技术检测青春前期和成年大鼠的主要组织中GLUT8基因mRNA表达水平.实验结果显示,葡萄糖转运蛋白GLUT8基因在成年和青春前期大鼠的睾丸组织中都有高度表达,在心脏和肾脏组织中有少量表达,在肝、脾等组织中的表达是微量的;在成年大鼠睾丸组织中,Leydig细胞、睾丸生精细胞以及附睾的精子细胞中GLUT8基因都有大量的表达,其中以在Leydig细胞中的表达最丰富,而且GLUT8基因在睾丸生精细胞中的表达水平高于附睾的精子细胞.结果说明GLUT8蛋白主要分布在大鼠睾丸组织中,并且主要在Leydig细胞和精子细胞中参与葡萄糖转运和能量代谢与供应.     

棕色田鼠睾丸和附睾胚后发育中的雌二醇表达

应用免疫组织化学方法研究了产后1日龄、10日龄、25日龄、45日龄及60日龄(成体)5个发育阶段的棕色田鼠(Microtus mandarinus)睾丸和附睾中雌二醇(estradiol,E2)的表达.结果表明:1日龄,睾丸生殖母细胞有E2阳性表达.10日龄,生殖母细胞E2表达减弱(P<0.05).25日龄,E2表达主要见于精子细胞.45日龄,精母细胞和精子细胞中有E2表达.60日龄,精原细胞、精母细胞、精子细胞及精子中均有E2表达,精母细胞和精子细胞表达较强,精原细胞表达较弱.在胚后发育过程中,1日龄和10日龄间质区细胞的E2表达最强,25日龄和45日龄E2表达减弱,60日龄E2表达最弱(P<0.05).1日龄至60日龄附睾上皮细胞和连接组织均有E2表达,60日龄附睾管内有大量精子,且有明显的E2表达.这些结果说明,棕色田鼠从出生到性成熟过程中,生殖细胞和间质细胞有E2生成.在精子发生的各阶段,雌激素通过其受体可能对生精细胞的分化和增殖有直接调控作用,对间质细胞的发育也存在着调节作用.同时,附睾的发育和精子的成熟也受到雌激素的调节.     

果蝇精子发生中CG15899的基因表达

为了检测在雄性果蝇中CG15899基因是否有特殊的表达,利用PCR的方法得到CG15899的基因片段,并用DIG标记PCR产物,将其与野生型雄性果蝇melanogaster的精巢进行原位杂交,最后在果蝇精巢的细胞质中产生了较强的信号．实验结果表明,CG15899基因在精原细胞和初级精母细胞中表达．     

超声对小白鼠睾丸精子发生的影响

实验用功率面密度为5W/cm~2,频率为1.10MHz 的连续聚焦超声分别对小白鼠睾丸进行5min 和10min 的照射,於照射后24,48,168和360h 取材制片,观察计数小白鼠睾丸生殖细胞中期分裂相,发现超声对小白鼠睾丸精子发生有明显的抑制作用,并且与照射时间长短有关.精原细胞、初级精母细胞和次级精母细胞对超声的反应有所不同.本文对其作用机制进行了初步讨论.     

黄胫小车蝗配子发生时c-kit蛋白特异性表达

应用组织学、免疫组织化学和生物统计分析相结合的方法,对黄胫小车蝗(Oedaleus infernalisSauss.)配子发生期间原癌基因c-kit的特异表达进行了研究.结果表明:精子发生过程中,精原细胞、初级精母细胞、次级精母细胞和成熟精子中均有不同程度的c-kit蛋白表达,精巢末端还有较粗大的阳性颗粒分布;卵子发生过程中,第1~6阶段卵母细胞中有不同程度的c-kit蛋白特异性表达,但随着卵黄的发生逐渐消失.     

一个小鼠睾丸特异表达新基因的克隆及表达谱分析

运用“数据库消减杂交”(digital diffrential Display)筛选出一个在小鼠睾丸中特异表达的新基因—mLrrc18(Genballk Accession No：AY775400),该基因的全长cDNA序列为2.7kb,小鼠多组织RT-PCR结果表明：该基因在睾丸中特异表达,而在其它组织中没有表达。该基因的睾丸特异性表达提示它可能在睾丸的的发育和性成熟过程中起重要作用。     

小鼠精原细胞体外培养分化的研究

目的 探讨小鼠精原细胞的分离纯化及体外培养条件。方法采用组合酶消化法分离纯化小鼠精原细胞和支持细胞,在添加FSHC和TC的基本培养基中进行体外培养。采用反转录PCR方法检测精子细胞特异性基因过渡蛋白9（Tnp2）的表达以对分化细胞进行鉴定。结果培养5d后有分化的圆形精子细胞出现,培养7d后收集的细胞可见Tnp2基因表达。结论通过体外培养小鼠精原细胞可迅速完成减数分裂过程和减数分裂后的分化过程,并可获得更接近成熟阶段的精子细胞。     

柄海鞘生殖系统的组织学研究

１９９８年５月至１９９９年４月每月１次 研究了柄海鞘的生殖系统的组织学、发育及季节变化。柄海鞘为雌雄同体的尾索动物,其卵巢和精巢相间排列,但不同期发育。精巢由外腊和无数生精小管组成。外膜由单层扁平上皮和薄层肌肉构成并向腺体内延伸参与形成生殖小管的基膜,生殖上皮位于基膜上,它不断的向腔内分裂增殖出精原细胞、初级精母细胞次级精母细胞、精细胞、精细胞和精子。精原细胞较大,圆形或卵圆形,核较大,与细胞同型     

赤点石斑鱼精子发生和形成的超微结构研究

用透射电镜研究了赤点石斑鱼Epinephelus妇精子发生和精子形成过程。结果表明，赤点石斑鱼精子发生经历了初级精原细胞、次级精原细胞、初级精母细胞、次级精母细胞、精子细胞阶段。精子细胞再经过精子形成过程成为精子。在初级精原细胞、次级精原细胞阶段，细胞核释放出拟染色体。拟染色体分布于精原细胞和前期Ⅰ的初级精母细胞的细胞质中。初级精母细胞减数分裂早期同源染色体配对明显可见，并形成联会复合体。精子细胞之间存在细胞联系（桥粒）。赤点石斑鱼成熟精子的特点是细胞核圆形，核内染色质致密，没有核泡（核空隙）。精子尾部细长，横切面为典型的“9＋2”轴丝结构。