小鼠精原干细胞的分离、分选、移植和培养

精原干细胞具有自我增殖和分化为精子的能力。精原干细胞的培养、移植和体外诱导分化等研究将使我们最终阐明精原干细胞的自我更新机制和精子发生机理。经过一年多的研究,我们不仅建立了用含血清培养基对分离的乳鼠睾丸细胞进行差异贴壁分选来富集生殖细胞的简单方法,而且成功地对分选出的精原干细胞进行了近一个月的无血清培养。流式分析结果表明,差异贴壁分选能将精原干细胞富集11倍以上。移植分析表明,分选出的精原干细胞具有在受体鼠的曲精小管中产生克隆的能力和正常生精作用。免疫细胞化学和RT-PCR检测表明,培养的细胞表达精原干细胞标志基因。该研究为体外长期培养小鼠或其它哺乳动物的精原干细胞提供了一个范例,也为利用基因修饰的精原干细胞通过移植产生转基因动物奠定了基础。     

GDNF对睾丸功能的调节

在睾丸中,Sertoli’s细胞等细胞表达胶质细胞源神经营养因子（Glial cell line—derived neuotrophic factor,GDNF）,通过旁分泌或自分泌方式作用于生精细胞和Sertoli’s细胞等,调节精原干细胞（Spermatogonial stem cells,SSCs）的自我更新和分化,并促进Sertoli’s细胞的增殖以及血睾屏障的形成等。     

小鼠精原干细胞生长的一般特性

本研究以小鼠睾丸支持细胞(Sertoli)为饲养层,用无血清StemPro-34 SFM培养基培养2~5日龄小鼠精原干细胞,用倒置相差显微镜观察Sertoli饲养层对精原干细胞生物学行为的影响。结果发现Sertoli细胞作饲养层明显促进精原干细胞的更新增殖,约有30%的精原干细胞能存活下来并能维持存活到60d以上。     

精原干细胞体外培养的方法改进

探讨精原干细胞体外培养优化方法,为进一步探讨其生物特征、生殖干细胞移植及生殖损伤及药物保护等研究提供实验基础.制备骨髓基质饲养层,将生后5 d~7 d雄性小鼠生精细胞接种在饲养层上,并于IMDM培养基及37 ℃下共培养,在倒置显微镜下观察细胞生长行为,并对培养后的细胞进行组织学、细胞化学、免疫组化、遗传学鉴定.精原干细胞能在以骨髓基质细胞饲养层上进行增殖和生长,且增殖后的表现出呈簇、团状生长,细胞间可表现出明显的胞质间桥,细胞核大,核/质比高,碱性磷酸酶及C-KIT受体阳性,染色体核型为20对(40条)等精原干细胞的生物学行为特征.原代培养的骨髓基质细胞作饲养层具有取材及制作简便等优点,且能在不添加外源性生长因子的前提下能通过自分泌足够的细胞生长因子,满足精原干细胞体外增殖和抑制分化的需要,是精原干细胞培养的一种良好的饲养层.IMDM培养基、血清及适宜的环境温度是精原干细胞体外培养的重要条件.     

哺乳动物精原干细胞移植研究进展

精原干细胞(SSCs)移植是将正常动物或转基因、突变动物的生精细胞移入受体睾丸曲精小管,供体细胞中的SSCs在受体睾丸内存活、迁移、定居、增殖,从而启动精子发生,甚至产生有受精能力精子的一项新技术. 该技术为探讨精子发生机理、重建不育个体的精子发生、生产转基因动物等提供了新的途径. 文中就SSCs移植时供(受)体的条件、供体SSCs在受体睾丸内的活动过程及SSCs移植的应用等进行了评述.     

组蛋白修饰与ES细胞的多能性

胚胎干细胞（ESCs）来源于早期胚胎内细胞群，具有分化和发育多能性和无限增殖与更新能力。组蛋白修饰对ES细胞的自我更新和无限增殖能力及多能性保持具有重要作用。组蛋白修饰是表观遗传调控的关键因素，细胞通过表观遗传状态改变控制基因的选择性表达，实现对细胞分化的调控。并且可以建立调控网络调节ES细胞多能性维持。     

诱导性多能干细胞的研究概况

诱导性多能干细胞（induced pluripotent stem cells,iPS细胞）是通过在分化的体细胞中表达特定的几个转录因子,以诱导体细胞的重编程而获得的可不断自我更新且具有多向分化潜能的细胞。诱导性多能干细胞具有获取方便、能向各类细胞分化及无限增殖等特性。本文就诱导性多能干细胞的产生、制备技术的优化及应用前景等方面作一概述。     

牙髓干细胞研究进展

牙髓干细胞是存在于牙髓组织中的一种成体干细胞,具有高度增殖、自我更新的能力和多向分化的潜能。牙髓千细胞的研究对牙髓再生、牙体修复以及牙再造将产生重要的意义。本文就牙髓干细胞的研究现状作一综述,并对其应用前景以及目前存在的问题进行讨论。     

造血干细胞(CD34+)表达谱数据分析

造血干细胞分化的潜能及自我更新的分子机制是造血干细胞研究中最重要的领域。通过对来自造血干细胞（CD34＾＋）的EST（Expressed　Sequence　Tags）和SAGE（Serial　Analysis　of　Gene　Expression）数据进行系统生物信息学分析,发现了造血干细胞除表达大量下游分化细胞的分子标志外,还表达一些非造血组织的特异基因。在分子调控方面,反义RNA可能是一种非常重要的调控手段。     

肝脏干细胞研究进展

肝干细胞是一类具有自我更新能力和多项分化潜能的细胞 .在一定病理条件下可向肝细胞和胆管上皮细胞、胰腺外分泌上皮等有限的几种组织分化 ,具有多项分化增殖潜力 ,本文将就肝干细胞分类、表面标志、来源及人类肝干细胞的研究做一综述 .     

造血干细胞(CD34+)表达谱数据分析

造血干细胞分化的潜能及自我更新的分子机制是造血干细胞研究中最重要的领域.通过对来自造血干细胞(CD34+)的EST(Expressed Sequence Tags)和SAGE(Serial Analysis of GeneExpression)数据进行系统生物信息学分析,发现了造血干细胞除表达大量下游分化细胞的分子标志外,还表达一些非造血组织的特异基因.在分子调控方面,反义RNA可能是一种非常重要的调控手段.     

原癌基因c-raf在精原干细胞中的表达及作用

本研究用基因测序和BLAST检验扩增的精原干细胞DNA和c-raf的同源性;用MTT法观察c-rafASODNs(反义c-raf寡脱氧核甘酸)拮抗c-raf对体外培养精原干细胞培养的作用,探讨原癌基因c-raf对体外精原干细胞培养增殖的影响.实验结果显示扩增的精原干细胞DNA和c-raf的同源性98%;c-rafASODNs对体外培养的精原干细胞存活呈剂量依赖性抑制作用(P<0.05).提示c-raf在精原干细胞中表达;原癌基因c-raf促进精原干细胞体外培养的增殖.     

Y染色体和雄性生殖细胞生物学在健康与疾病中的作用

由人类基因组计划（Human Genome Project）所带来的人类基因组和相关研究技术方面的进步已经深刻地改变了我们对雄性干细胞发育和分化机制的理解，并提高了我们对此类机制进行研究的能力。本书对后基因组时代雄性生殖腺及干细胞研究所取得的成果进行了总结，着重介绍了精子发生生物学的发展，试图建立一个干细胞发生模型，并对与基因在干细胞发生中的作用有关的一系列问题进行了阐述，主要内容包括Y染色体基因在雄性生殖中的作用、精原干细胞和雄性干细胞的基因表达及生殖过程和干细胞肿瘤中干细胞基因表达的调节等。     

小鼠睾丸发育全过程中生精细胞的自发性凋亡

 以17组出生后不同发育阶段的昆明种正常小鼠睾丸组织为材料,采用TDT原位末端标记法在其石蜡组织切片上进行凋亡细胞原位检测,探讨小鼠睾丸发育全过程中生精细胞的自发性凋亡规律.结果发现:小鼠生精细胞从生后开始就存在自发性凋亡现象,生后1~15 d,凋亡精原细胞数目不断增加;至生后第15天时达到峰值,且15 d起个别初级精母细胞也开始出现凋亡;至27 d时,极少数次级精母细胞和精子细胞出现凋亡;至30 d时凋亡细胞基本为精原细胞;而33 d时各类型生精细胞均存在凋亡现象;至36 d时凋亡细胞又重新集中于精原细胞,并延续于此后各期.上述结果表明:小鼠睾丸发育过程中凋亡细胞主要为精原细胞;自发性凋亡活跃期发生于生后1~33 d,与生精细胞的首次发育成熟过程同步.     

牙髓干细胞的研究新进展

牙髓干细胞是存在于牙髓组织中的一种成体干细胞,具有高度增殖、自我更新的能力和多向分化的潜能。牙髓干细胞的研究对牙组织工程和牙齿的再生将产生重要的意义。     

大天鹅睾丸和附睾的组织结构及EGF,Bax,Bcl-2蛋白和iNOS的表达

为了解大天鹅(Cygnus cygnus)睾丸和附睾的组织结构特征及相关活性物质的表达情况,用生物显微技术观察了大天鹅睾丸和附睾的组织结构,用免疫组织化学方法检测了EGF,Bax蛋白,Bcl-2蛋白和iNOS在睾丸和附睾中的表达.结果表明,大天鹅睾丸内生精小管主要由支持细胞和各级生精细胞构成,众多生精小管被睾丸间质隔开;附睾由输出小管和附睾管组成;大天鹅睾丸生精小管直径、生殖细胞大小、附睾管直径及上皮厚度等与其他脊椎动物存在差异;EGF,Bax蛋白,Bcl-2蛋白在睾丸生精小管管周的肌样细胞、精原细胞、精母细胞、精子细胞、间质细胞和附睾管上皮细胞等处呈免疫反应阳性;iNOS在睾丸间质内的血管壁及间质细胞、附睾管上皮细胞、附睾结缔组织等处有阳性表达;EGF可能参与其精子发生、获能及激素生成的调控过程;Bax蛋白和Bcl-2蛋白可能共同参与调控正常大天鹅睾丸和附睾细胞的凋亡;iNOS可能也参与雄性大天鹅各种生殖活动的调节.     

小鼠睾丸发育过程中Ki67蛋白的表达规律

为探讨Ki67蛋白在小鼠睾丸生后发育全过程中的时空表达规律,以20组处于不同发育阶段的昆明种正常小鼠睾丸组织为材料,在其石蜡组织切片上进行Ki67蛋白的免疫组织化学检测.结果发现:Ki67蛋白在生后1d直至58d的小鼠睾丸组织中均有表达,其表达部位集中于精原细胞和部分初级精母细胞,其中精原细胞中的表达相对强烈;其表达活跃时期出现于小鼠生后7~25 d.上述结果表明Ki67蛋白参与了小鼠睾丸正常发育过程中精原细胞的有丝分裂过程,可作为评估睾丸精原细胞增殖活性的指标之一.     

造血干细胞的研究进展

干细胞是一类具有自我更新、高度增殖和多向分化潜能的原始细胞．造血干细胞在胚胎时期的发生、发育过程已得到进一步阐明．造血干细胞的移植已成功的应用于治疗多种血液系统和相关系统疾病．作者对造血干细胞的来源、细胞表面标志和其临床应用前景进行了综述．     

脂肪来源干细胞分化潜能的现状研究

与骨髓间充质干细胞一样,来源于中胚层的脂肪,亦具有多向分化潜能,其内含有大量能自我更新和向多系分化潜能的细胞群称为脂肪来源干细胞。其取材方便,来源丰富,可在体外稳定增殖传代。并与骨髓间充质干细胞有相似的多向分化表面标志CD105、STRO-1以及CD166受体。研究发现它具有向多系分化潜能,除可以分化为间充质来源的脂肪、骨、软骨、脂肪以及骨骼肌、心肌等细胞,在特殊的环境条件诱导下,可向神经细胞分化,用以修复骨、软骨、心肌、骨骼肌、血管以及神经等组织。因而,脂肪来源干细胞有望成为组织工程、细胞治疗以及基因转染良好的种子细胞。     

脑肿瘤干细胞分子生物学研究进展

脑肿瘤干细胞是脑肿瘤组织中存在的一小类具有无限增殖、自我更新和多向分化等干细胞特性的肿瘤细胞。肿瘤干细胞是肿瘤发生、发展、侵袭、转移、耐药、复发等恶性行为的主要根源,只有杀死脑肿瘤干细胞才能彻底治愈脑肿瘤。本文对当前脑肿瘤干细胞研究在分子生物学水平上取得的一些进展进行了综述。