白芥叶片总RNA提取方法的比较研究

以白芥为材料,分别采用柱式植物总RNA抽提纯化试剂盒法、RNAisoPlus法和CTAB-异丙醇法3种方法提取白芥叶片总RNA,通过琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度计及RT-PCR反应进行检测,最后对3种方法得到的结果进行分析比较．结果表明,RNAisoPlus法提取出的总RNA条带与其他方法相比更为清晰,A260／A280比值介于1．9～2．1之间,该方法更适合用于白芥叶片总RNA的提取．     

适于cDNA-AFLP的黑木相思组培苗总RNA快速提取方法的建立

针对黑木相思富含多酚、多糖等次生代谢物质的特点,以其组培苗为试材,采用改良CTAB裂解法、硼砂-SDS裂解法、改良异硫氰酸胍裂解法、CTAB-异硫氰酸胍裂解法、改良CTAB-异硫氰酸胍裂解法等5种不同的提取方法提取其总RNA.结果发现:改良CTAB-异硫氰酸胍裂解法能有效地控制多酚、多糖、蛋白质以及DNA等对所提取总RNA的污染,所得总RNA质量高、完整性好.紫外分光光度检测,A260/A280比值为1.96～2.00,A260/A230比值1.98～2.20,总RNA得率为118.4～213.6μg.g-1,电泳检测,28SrRNA亮度约为18SrRNA的2倍,所提RNA质量可以满足dscDNA合成和cDNA-AFLP等后续分子操作要求.     

沙葱总RNA的提取与质量分析

以沙葱种子和沙葱幼叶为材料,分别用RNAiso Plus试剂法、RNAiso Plus醋酸钠改进法、CTAB-异丙醇法、CTAB-LiCl法4种不同的方法提取沙葱总RNA,经琼脂糖凝胶电泳,采用紫外分光光度法测定总RNA纯度并进行RT-PCR检测.结果表明,沙葱不同组织总RNA提取的最优方法有所不同.采用CTAB-LiCl法能有效地提取出沙葱种子高质量、完整性好而且无胶状不溶物的RNA,没有明显的蛋白和基因组DNA的污染.采用RNAiso Plus醋酸钠改进法能有效地去除沙葱幼叶中多糖的干扰,所提取的RNA条带清晰,完整性好,是沙葱幼叶总RNA提取的有效方法.     

富含多糖番茄果实组织中总RNA的有效提取方法

本文介绍了一种从富含多糖的番茄果实组织中提取总RNA的有效方法,其产率约为每200 m g组织80μg RNA,并且RNA的吸光值的比值A260/A230在1.5~2.0之间,A260/A280在1.6~1.9之间.提取的RNA能够用于RT-PCR反应.这种方法也能有效地应用于富含次级代谢产物的真菌总RNA提取.     

菠菜基因组DNA提取方法与条件的研究

分别采用CTAB、SDS、高盐低pH三种方法从菠菜叶片中提取基因组DNA,通过A260/A280值、A260/A230值和琼脂糖凝胶电泳对所提取的DNA进行定量、定性分析和综合比较。研究提取缓冲液用量、水浴时间、蛋白质沉淀剂(氯仿-异戊醇)用量、DNA沉淀剂(异丙醇)用量等条件对DNA提取效率和纯度的影响。并对CTAB法的提取条件进行了正交试验,优选出菠菜基因组DNA提取的适宜条件。     

荷花花瓣总RNA的提取方法

以荷花花瓣为材料,在比较CTAB-LiCl法和Trizol法的基础上,针对荷花花瓣富含多糖、多酚的特点,在RNA提取过程中加入去多糖步骤,改良了CTAB-LiCl法.结果表明,改良CTAB-LiCl法能有效地去除多糖,提取到的RNA 28 SrRNA亮度约为18SrRNA的二倍,A260/A280比值为1.98,A260/A230比值为2.36,RNA产率为685.3ng/μL,说明利用改良CTAB-LiCl法从荷花花瓣中提取的RNA质量好、产率高、完整性好.     

山羊干扰素RNA的提取及鉴定

应用Trizol法从山羊子宫内膜中提取RNA,根据已获得的山羊IFN基因序列设计并合成引物,采用RT-PCR技术进行IFN基因的扩增。结果表明,所提取的RNA经琼脂糖凝胶电泳呈现出28S r RNA、18S r RNA 2条清晰的条带,其OD260/OD280值为1.91,RT-PCR得到的条带与目的片断大小一致,说明所提取的RNA纯度高、无降解,可进一步用于干扰素的分子生物学研究。     

水稻颖果总RNA提取方法的研究

利用TRIZOL试剂快速提取法、异硫氰酸胍法和改良的SDS法提取不同发育时期水稻颖果的总RNA,并通过凝胶电泳、紫外分光光度法检测提取获得的RNA样品的品质.研究结果表明,改良的SDS法提取的RNA具有28SrRNA和18S rRNA 2条清晰的条带,且无降解.其D260/D280为1.84～1.97,具有较高的纯度.其他2种方法获得的RNA品质较差,有降解和弥散现象.将改良的SDS法提取的RNA逆转录成cDNA,作为PCR扩增的模板,可获得清晰的约1.7kb的目的条带.该法提取的RNA用于Northern杂交,可产生特异的杂交信号.这些结果进一步证明了改良的SDS法提取的RNA具有很高的品质与纯度,可以满足下一步分子生物学研究的需要.     

角倍蚜总RNA提取方法的比较及优化

采用Trizol法及试剂盒柱提法提取角倍蚜若虫及成虫总RNA,通过紫外分光光度法(OD260/OD280、OD260/OD230)及琼脂糖凝胶电泳检测,对所提取RNA的纯度、浓度及完整性进行了分析.结果表明,采用常规样品量两种方法提取的RNA均降解严重,分析认为角倍蚜富含内源性RNase.通过大幅降低样品量,优化提取步骤,缩短提取时间,有效消除了RNA降解现象.采用Trizol法获得了纯度高、完整性好的RNA样品,电泳显示清晰的28S、18S及5S三条带;试剂盒柱提法获得的RNA呈现较为特殊的带型,没有常规的5S条带,而在750bp～1 000bp之间有一明显条带.     

泡桐叶片DNA提取

以兰考泡桐组织培养苗叶片为材料,分别采用CTAB-Ⅰ、CTAB-Ⅱ、SDS-Ⅰ、SDS-Ⅱ四种方法提取叶片DNA,并对不同提取结果进行紫外分光光度、电泳、酶切、RAPD等方法的鉴定。结果表明,用四种方法提取的泡桐叶片DNA得率约为3.5-5.2μg/10mg,A260/A280约为1.7-1.8,A260/A230在2.0以上,分子量在23Kb以上,能够被EcoRⅠ、HindⅢ酶切,能够进行RAPD分析。综合考虑得率、纯度、质量等因素,以SDS-Ⅰ法为最佳方案。     

糯米酒发酵过程中微生物基因组提取方法比较

为了更加快速地获得糯米酒发酵过程中高质量的微生物基因组DNA,本实验通过测定基因组DNA浓度和进行聚合酶链式反应(PCR),利用溶菌酶-SDS-蛋白酶-K(A法),改良CTAB(B法)和改良CTAB-溶菌酶(C法)三种实验方法获得微生物基因组DNA,通过比较三种方法发现,C法提取效率最高,获得的基因组DNA浓度为1 573.97±711.51ng/μL;B法获得的基因组浓度为1 436.03±128.0ng/μL;A法效率最低,获得基因组浓度为411.67±133.29ng/μL.以基因组DNA为模板进行PCR,将扩增产物在0.6%琼脂糖凝胶中进行电泳检验.结果显示C法获得的条带最清楚明亮,表明DNA浓度最高、结构完整.基因组DNA浓度和PCR产物琼脂糖凝胶电泳条带的亮度表明,提取糯米酒发酵过程中微生物基因组DNA的最优方法为改良CTAB-溶菌酶法(C法).     

苔藓植物DNA不同提取方法的比较分析

以苔藓植物为材料,比较快速提取法、SDS法和改良CTAB法(自行设计)提取苔藓植物总DNA的效果.结果表明:改良CTAB法提取的基因组DNA质量最好(A260/A280为1.83～1.86;A260/A230为2.05～2.50),快速提取法次之(A260/A280为1.64～1.73;A260/A230为1.68～1.77),SDS法较差(A260/A280为1.51～1.61;A260/A230为1.56～1.76).改良CTAB法提取的苔藓植物的DNA适合于作为PCR的模板,并成功地进行了RAPD扩增.     

铁观音茶树叶片总RNA提取方法研究

铁观音茶树不同生育时期叶片为材料,采用Tripure试剂法、申能博彩试剂盒与Tripure试剂相结合的方法提取茶树叶片总RNA。结果表明,Tripure试剂法比结合法更适宜提取铁观音茶树RNA,该方法提取的RNA 28S、18S和5S rRNA条带清晰明亮;OD260/OD280值在1.7~2.0之间,说明该方法提取的RNA完整性和纯度好,可用于进行后续分子生物学实验。     

白刺总RNA提取方法的研究

以不同西伯利亚白刺组织为材料 ,利用TRIZOL试剂快速提取法、异硫氰酸胍法、苯酚法和CTAB法提取白刺总RNA ,通过RNA的产率、纯度、电泳图谱等分析来确立适用于白刺总RNA分离的方法 研究结果表明 ,CTAB法提取的RNA具有 2 8SrRNA、 18SrRNA和 5SrRNA三条较清晰的条带 ,很少有降解 ,其A2 6 0 /A2 80为 1.893～ 1.90 1,A2 6 0 /A2 30为 1.80 7～ 2 .4 87 具有较高的纯度 其他三种方法获得的RNA纯度较低 ,降解严重 ,有较多小分子和盐存在 ,RNA无明显条带出现 ,而是以小分子RNA弥撒状分布 将CTAB法提取的RNA逆转录成cDNA ,使用随机引物进行PCR扩增 ,PCR条带清晰 ,分布均匀 ,背景小 该结果进一步证明了CTAB法提取的RNA具有很高的质量与纯度 ,可以满足下一步的研究     

香蕉不同组织中总RNA提取方法的研究

针对香蕉组织中多糖、多酚等次生物质含量高的特点，以香蕉根、茎、叶、果实为试材，对其总RNA提取进行研究．比较了SDS法、改良SDS法、改良CTAB法和Trizol试剂盒法提取总RNA的效果，结果分析表明：改良SDS法能从香蕉根、茎、叶中获得质量高、完整性较好的总RNA，而改良CTAB法对果实的提取效果较佳，所得A260／A280均高于1．8，A260／A230大于2，0，28 S rRNA带的亮度约是18 S rRNA的2倍．其产率在根、茎、叶中均在400μg·g^-1以上，果实中可达49．34μg·g-^1.以上2种方法所得的总RNA均能满足RTPCR、Northern blot和cDNA文库建立等分子生物学研究，且具有快速、简便易行、成本较低的特点，适合于富含多糖、多酚的植物材料．     

香花槐各组织总RNA提取方法的改良和优化

为探索香花槐各组织总RNA提取的最佳方法,以实验苗圃中的香花槐为实验材料,在比较了Trizol试剂法和常规CTAB法的基础上,建立了香花槐不同组织的最适提取方法.改良CTAB法利用高质量浓度的β-巯基乙醇和合适质量浓度的聚乙烯基吡咯烷酮(PVP)来防止RNA提取过程中多酚的氧化,然后增加苯酚/氯仿抽提次数来去除香花槐叶片和茎皮过多蛋白质.改良Trizol试剂法在根皮中加PVP研磨成白色粉末,可以有效地防止反应液褐化.各组织优化方法经琼脂糖凝胶电泳检测,所提取的总RNA的28S、18S条带清晰明亮,无降解;其A260nm/A280nm值为2.0,表明提取的总RNA质量较好.     

高质量冬青卫矛DNA提取方法

为了从富含多酚和多糖的冬青卫矛叶片中分离高质量基因组DNA,比较了SDS法、CTAB法、高盐低pH值法及改良的CTAB法等提取DNA的方法,获得了一种以CTAB法为基础的分离高质量完整DNA的简便、快速方法。结果表明,使用该方法从冬青卫矛叶片中分离得到高纯度、高产量的DNA,A260/A280为1.84,1 g鲜叶的DNA产量为213.5μg,表明该方法可有效地从富含多酚和多糖的药用植物组织中提取高质量DNA。     

总RNA提取方法的比较与分析

用TRIZOL法、CTAB法和改良的热硼酸盐法从水稻叶片中提取总RNA,结果表明用这三种方法提取总RNA的OD260nm／OD280nm值分别为1．896、1．992和1．657。琼脂糖电泳表明,用改良的热硼酸盐法提取的RNA降解严重,用TRIZOL法提取的总RNA有部分降解,而CTAB法提取的总RNA完整、未降解,可用于后续实验。因此CTAB法更适于从水稻叶片中提取总RNA。     

玄参新鲜根和干燥根总DNA提取方法的比较研究

用十二烷基磺酸钠法分别提取玄参新鲜根及干燥根的DNA.电泳结果显示,从玄参新鲜根中可提取到完整DNA,而从"发汗"后的玄参干燥根中提取的DNA已降解.使用紫外分光光度法对新鲜根中提取的DNA进行纯度鉴定,A260/A280为1.83.结果表明,所采用的十二烷基磺酸钠法可经济高效地从玄参根部提取到高质量的DNA.     

老芒麦总DNA提取方法探讨

以披碱草属老芒麦(Elymus sibiricus)为材料,分别用简易提取法、十六烷基三乙基溴化铵(CTAB)法、十二烷基硫酸钠(SDS)法提取其基因组DNA,利用分光光度计测定其OD260与OD280的吸光值,计算比率估计核酸的纯度和浓度,并利用0.8%琼脂糖凝胶电泳观察DNA片段在凝胶中的位置.结果表明,3种方法都可以提取到基因组DNA,但SDS法所提取的DNA质量明显优于简易提取法和CTAB法,且分离的DNA产率高,纯度高,质量好,纯化后电泳检测带型清晰.因此,SDS法是实验室提取老芒麦基因组DNA的较有效而实用的方法.